实验性隐睾术后大鼠生精小管内精子的计量学研究_高佩安

实验性隐睾术后大鼠生精小管内 精子的计量学研究 y 高佩安,孟 � 文, 王新成,李亚鲁 (泰山医学院组织学与胚胎学教研室,山东 泰安 � 271000) 摘要: 目的 � 研究热作用对大鼠睾丸生精过程影响中精子数量变化的生物学意义, 为男性抗生育提供形态学 资料。方法 � 人工隐睾术后 1~ 70 天取出大鼠睾丸, Carnoy 液固定, 石蜡切片, PAS 和 HE 复染, 光镜观察, 计数生 精小管内的精子。结果 � 术后 1~ 70 天, 生精小管内精子的数量和对照组相比减少具有显著性意义( P < 0�01)。 术后 20~ 50 天,生精小管内很少见到精子。术后 60~ 70 天,在中央区少部分生精小管内可见少数精子。结论 � 隐睾术后因热作用影响生精过程,致精子数量减少显著。术后 20~ 50 天很少见到精子,这是热作用与大鼠睾丸的 生精细胞周期相关。术后 60~ 70 天在中央区少数生精小管有生精现象, 对该问题应作进一步的探讨。 关键词:隐睾; 生精小管;精子; 计量学 中图分类号: R321� 1 � 文献标识码: A � 文章编号: 1004-7115( 2002) 04-0327-03 Metrological study of spermatozoon in seminiferous tubule of rats after artificial cryptorchism GAO Pei-an , MENG Wen, WANG X in-cheng , LI Ya-lu (Dept� of Histology and Embryology, T aishan Medical Collge, Taian 271000, China) Abstract: Objective: T o study the effects of heat action on the biolog ical significance of spermatozoon number changed in the process of spermiogenesis so as to pr ovide morpholog ical data for male ant-i fertilization� Methods: Within one to seventy days after the artificial cryptorchism, the testes were t aken out, fix ed w ith Carnoy� s solution, put into paraffin section and stained wit h PAS and HE; and then t he spermatozona in the seminiferous tubule were observ ed and counted under light microscope� Results: In one to seventy days after the operation, spermatozoon number decreased obv-i ously compared w ith t hat of the rats in the control group( P < 0�01) � In tw enty to tw enty five days after the oper ation, few spermatozona could be seen, and in 60 ~ 70 days after t he operation, a very small number of t he spermatozona could be seen in a small number of seminiferous tubules of the central ar ea� Conclusion: Heat action has an effect on the process of spermato genesis, thus the number of spermatozona decreases obv iously� In twenty to fifty days after the oper ation, a smallnumber of spermatozona could be seen. That is because heat act ion is interr elated with the cycle of the spermatogene- sis� In six to seventy days after the oper at ion, the phenomenon of the ver y small number of spermatozona observed in a small number of seminiferous tubules of the central area remains to be fur ther probed into� Key Words: cr yptorchism; seminiferous tubule; spermatozoon; metrolog y � � 隐睾由于腹温的热作用致生精过程障碍 , 各级 生精细胞发生明显的形态学变化[ 1] ,其它影响生精 过程的因素可致精子生成量的改变[ 2] , 而实验性隐 睾术后大鼠睾丸生精小管内精子生成量的计量学研 究未见报道。我们对大鼠人工隐睾术后, 生精过程 障碍其精子的数量变化进行计量学研究, 以探讨热 作用对睾丸生精小管内精子数量的影响, 为男性抗 生育措施提供参考资料。 1 � 材料与方法 1�1 � 选用成年雄性大鼠 62只,体重 250~ 350 g,分 成对照组和实验组, 前者 6 只, 后者 56只。实验组 大鼠行实验性人工隐睾手术。手术过程: 将用乙醚 吸入性麻醉的大鼠固定于自制手术台上, 腹部正中 327 泰 � 山 � 医 � 学 � 院 � 学 � 报 JOURNAL OF TAISHAN M EDICAL COLLEGE � Vol. 23 � No. 4� 2002 y � 项目基金:山东省教育厅资助项目 作者简介:高佩安( 1954 � ) ,男,山东章丘人,教授,本科。从事组织学、胚胎学的教学和科研工作。 备皮后碘酒精、酒精腹部皮肤消毒, 铺无菌洞巾, 逐 层切开腹壁,把两侧睾丸自阴囊内提入腹腔内并固 定于两腹侧壁上,然后关闭腹腔。术后 1、2、4、6、7、 10、15、20、25、30、40、50、60和 70天断头杀死动物, 每组 4只,取睾丸入 Carnoy 液固定, 石蜡切片, PAS 加HE 复染,光镜观察计数精子数量的改变。对照 组大鼠睾丸不行隐睾手术,睾丸切片制作同实验组。 对精子数量的观察记录由一人操作。 1�2 � 精子数量计数方法 � 把睾丸的横切面分成上、 下、左、右和中央五个区域, 每个区抽 3个圆形生精 小管计数精子个数, 每一睾丸切片共计数 15个生精 小管,每组 4只,共计 60个生精小管的精子个数, 分 别记录后进行统计学处理。 2 � 结 � 果 2�1 � 对照组大鼠生精小管生精过程正常,精子排列 规律,精子数统计学为( �x � s ) 121�42 � 27�65 (图 1)。 图 1 � 正常大鼠睾丸生精小管, �示精子, � 15 2�2 � 术后 1~ 2天, 可见精子排列紊乱,精子数分别 为( �x � s) 99�84 � 16�55 和( �x � s ) 98�00 � 20�30, 和对照组大鼠生精小管内的精子数相比减少具有显 著性差异( P< 0�01)。 2�3 � 自术后 4天开始, 精子数减少更趋明显, 生精 图 2 � 术后 10天, �示精子排列紊乱,精子数量 减少明显, � 45 小管支持细胞空泡样变(图 2)。 2�4 � 术后 20、25、30、40和 50天, 很少见到精子, 生 精小管仅见少数几个精原细胞, 支持细胞受损严重, 无生精过程发生(图 3)。 图 3 � 术后 30天,生精小管内很少见到精子, � 15 2�5 � 术后 60~ 70天, 中央区部分生精小管精子生 成过程个别恢复, 可见少数几个精子的存在(图 4)。 图 4 � 术后 60天,生精小管内见少数精子, �示精子, � 45 2�6 � 术后 1~ 70天,生精小管内精子数量变化的统 计学分析见 1。 表 1� 隐睾术后大鼠睾丸生精小管内 精子的数量变化( �x � s ) 术后天数 精子数量 P 值 1 99�84 � 16�55 < 0�01 2 98�00 � 20�39 < 0�01 4 70�40 � 23�22 < 0�01 6 54�92 � 21�58 < 0�01 7 50�94 � 24�51 < 0�01 10 46�92 � 21�33 < 0�01 15 40�91 � 40�12 < 0�01 20 0 < 0�01 25 0 < 0�01 30 0 < 0�01 40 0 < 0�01 50 0 < 0�01 60 41�38 � 21�69 < 0�01 70 49�00 � 29�23 < 0�01 328 泰 � 山 � 医 � 学 � 院 � 学 � 报 JOURNAL OF T AISHAN MEDICAL COLLEGE � Vol. 23 � No. 4 � 2002 3 � 讨 � 论 3�1 � 精子是男性配子发生过程中的最终产物,为高 度特化的细胞。在生精过程中, 从精原细胞到精子 形成,要经过数次细胞分裂,生精细胞在生精上皮中 排列严格有序, 从某一特定细胞组合开始到下一次 出现同一细胞组合所经历的时程, 称为一个周期。 大鼠精子发生周期时程为 12天,整个精子发生时程 为 48天, 人精子发生周期时程是 16天,整个精子发 生时程是 70天。精子发生需要低温,而各种热作用 均可影响精子的发生。关于生精上皮各种成分对温 热刺激的敏感性和耐受性差异, 目前仍没有一致的 见解[ 3]。我们的实验观察表明, 生精上皮成分对温 热作用的敏感性由高到低的顺序是支持细胞、精原 细胞、精母细胞、精子细胞、精子,耐对温热的耐受性 从弱到强的顺序是精子、精母细胞、精子细胞、精原 细胞、支持细胞[ 1]。由于精子常位于生精上皮的浅 层,对温热的耐受性又最弱,致术后 1天其精子数量 从正常的 121�42 � 27�65降到 99�84 � 16�55, 数量 减少具有显著性差异( P< 0�01)。 3�2 � 术后早期, 除精子数量显著减少外, 精子的排 列也出现紊乱, 可见横向或反向排列的精子, 这种现 象是精子对温热作用的应激性改变,加快了精子的 排出速率, 术后早期可观察到附睾管内精子数量的 增多[ 4]。 3�3 � 术后 20~ 50天,生精小管内很少见到精子, 甚 至生精小管内仅观察到残存的个别的精原细胞, 这 种反应我们认为与大鼠的整个精子发生时程为 48 天相关。自术后开始, 由于温热使整个精子生成过 程出现障碍, 支持细胞和各级生精细胞均发生应激 性的反应性的代谢紊乱和形态学变化, 当术后温热 所作用的前周期时, 到 20天无精子存在, 最后的周 期,即术时将发生的周期到 50 天时无精子存在, 这 是术后 20~ 50天不同天数无精子的基本原理。 3�4 � 术后晚期,在睾丸的中央区部分生精小管出现 生精过程,可见少数精子,该类小管约占生精小管总 数的 10~ 20% , 这种现象其原因尚无正确的解释, 也未见这方面的报道。我们认为, 隐睾手术是将睾 丸退入腹腔并固定在腹腔侧壁上,这样,睾丸不是游 离于腹腔中而是靠腹壁上, 为腹腔边缘,由于术后时 间的延长睾丸对腹腔温度进一步适应, 使睾丸中心 部位的逆流交换装置呈适应性变化, 致睾丸中央区 个别生精小管出现精子发生的恢复, 这是我们的设 想,确切的原因尚待进一步探讨。 参考文献: [ 1] � 孟文,高佩安,王新成,等 � 隐睾术后大鼠生精上皮的反应性变 化[ J]� 泰山医学院学报, 1986, 7( 2) : 38� [ 2] � 朱善民,陈龙,高伟,等� 大鼠慢性镉染毒后精子生成量和运动 能力的研究[ J]� 生殖与避孕, 2002, 22( 1) : 14� [ 3] � 朱继业,王一飞,吴明章� 电吹风及透热对睾丸精子发生和间 质细胞影响的组织学及组织化学观察[ J ]� 生殖与避孕, 1982, 12( 3) : 37� [ 4] � 孟文,高佩安,王新成,等 � 实验性隐睾术后大鼠附睾的反应性 变化[ J]� 解剖学杂志, 1991, 14( 2) : 133� (收稿日期 � 2002-05- 12) 作者写统计学符号须知 论文中统计学符号应按 GB 3358-82�统计学名词及符号�的有关规定书写,常用如下: ( 1)样本的算术平均数用英文小写 �x (中位数仍用 M ) ; (2)差用英文小写 s ; ( 3)标准误用英文小写 s x� ; ( 4) t 检验用英文小写 t ; (5) F 检验用英文大写 F; (6) 卡方检验用希文小写 � 2 ; ( 7)相关系数用英文小写 r ; (8)自由度用希文小写 �; ( 9)概率用英文大写 P ( P 值前应给出具体检验 值,如 t 值、� 2值、q 值等)。以上符号均用斜体。 (本刊编辑部) 329 泰 � 山 � 医 � 学 � 院 � 学 � 报 JOURNAL OF TAISHAN M EDICAL COLLEGE � Vol. 23 � No. 4� 2002