ECHO病毒9型致手足口病实验室鉴定1例_余楠

文章编号:1001-764X(2012)03-240-01 ·病例报告· ECHO病毒 9 型致手足口病实验室鉴定 1 例* ? 余楠a，潘玉先a，郭敏a，何思杰a，林裕龙a，蒙育林b，车小燕a(南方医科大学珠江医院 a．检验医学中心，b． 儿 科，广州 510282) 关键词:埃可病毒 9 型;手足口病;实验室检查 中图分类号:R512． 5 文献标志码:B 1 病历摘要 患儿，男，1 岁 11 月，4 d前无明显诱因反复发热，次日发 现口腔疱疹，伴刺痛及进食减少，无咳嗽、流涕。双手、双腿、 双足出现散在红色小疱疹，周围有红晕，部分溃破，入院诊断 “手足口病”。患儿入院后抽搐 1 次，表现为双上肢抖动，双 眼上翻，持续 2 min 自行缓解，无口吐白沫。体格检查:体温 38． 1 ℃，脉搏 120 次 /min，呼吸 25 次 /min，体重 10． 5 kg，营 养中等，发育良好，神志清楚，双手、下肢、足、口腔可见散在 红色小疱疹，周围有红晕，未溃破。咽充血，双侧扁桃体Ⅰ度 肿大，未见化脓。双肺听诊呼吸音清，四肢肌张力正常，双侧 巴氏征阴性。实验室检查:血常规:WBC 6． 23 × 109 /L，L 0． 316，N 0． 675;生化检查:CK 162 U /L，LDH 226 U /L，其余 检查未见异常。病原学检查:采集患儿发病第 5 天肛拭子标 本 2 份，1 份提取核酸，按实时荧光定量 RT-PCR 试剂盒(达 安基因公司)说明操作检测肠道病毒通用型、EV71 和 CA16 特异性核酸，结果 3 项均阳性，初步考虑为两种病毒感 染。另 1 份用横纹肌肉瘤(RD)细胞进行病毒分离培养，待 细胞病变效应(CPE)出现，收集培养上清液，进行荧光定量 RT-PCR检测，方法同上，结果与直接检测临床标本相同。收 集急性期(发病第 4 天，S4)和恢复期(第 10 天，S10)血清检 测，按 EV71-IgM 和 CA16-IgM抗体检测试剂盒(北京万泰生 物公司)说明书操作，结果两组血清均为 EV71-IgM 阳性、 CA16-IgM阴性。按文献［1］操作对两组血清进行中和试验 和交叉中和试验，血清中和抗体滴度结果显示 EV71 和 CA16 均未感染，不支持上述检测结果。 提取病毒培养液核酸，用巢式 PCR 扩增和产物测序［2］， 经 BLAST 比对为埃可病毒 9 型(ECHO 9) ，与序列号为 GU393549． 1 的病毒衣壳蛋白 VP1 部分序列同源性 92%。 诊疗过程:入院后患儿病情平稳。予以隔离，抗感染、抗病 毒、退热及补液对症支持治疗。7 d后患儿手、腿部皮疹逐渐 消退，口腔疱疹消失，无再发热，痊愈出院。血清学和病原学 结果见表 1。 表 1 患儿病原学检查所有标本类型和检测结果 标本 方法 结果 结论 血清 ELISA IgM 抗体 抗 EV71-IgM:S4 1． 958，S10 2． 039 判为(+) 单纯 EV71 感染 抗 CA16-IgM:S4 0． 026，S10 0． 088 判为(－) 中和试验 IgG抗体 抗 EV71-IgG:S4 0，S10 0 判为(－) 排除 EV71 或 CA16 感染 抗 CA16-IgG:S4 40，S10 40 判为(－) 肛拭子 实时荧光定量巢式 PCR EV (+)、EV71(+)、CA16(+) EV71 和 CA16 共感染 肛拭子加病毒液 病毒分离培养经实时 EV (+)、EV71(+)、CA16(+) EV71 和 CA16 共感染 荧光定量 RT-PCR鉴定 病毒分离培养经 RT-PCR 与 ECHO 9 型病毒同源性 92% ECHO 9 型病毒 产物测序、比对鉴定 2 讨论 针对 EV71和 CA16的实验室诊断包括病原学和血清学检 测，如病毒分离培养、分子生物学检测、中和试验和急性期血 清 IgM抗体检测等。实时荧光 RT-PCR为实验室首选方法［3］， 检测出现两种病毒核酸阳性，首先考虑共感染。病毒分离是 病原诊断金。细胞病变非特异，需免疫荧光法或实时荧 光 RT-PCR鉴定，基因组测序鉴定病毒型别最可靠。ECHO 9 与 CA16同属科萨奇病毒 A组，也称 A23型。本例患儿出现了 轻微神经系统症状，未发展严重并发症，1周后痊愈出院。 3 参考文献 ［1］Wu TC，Wang YF，Lee YP，et al． Immunity to avirulent enterovirus 71 and coxsackie A16 virus protects against enterovirus 71 infection in mice［J］． J Virol，2007，81(19) :10310-10315． ［2］Nix WA，Oberste MS，Pallansch MA． Sensitive，seminested PCR amplification of VP1 sequences for direct identification of all enterovi- rus serotypes from original clinical specimens［J］． J Clin Microbiol， 2006，44(8) :2698-2704． ［3］中华人民共和国卫生部．手足口病诊疗指南［Z］． 2010-04-21． (收稿日期:2011-09-05，修回日期:2012-02-25) (本文编辑:许晓蒙，陈维忠) ·042· 临床检验杂志 2012 年 3 月第 30 卷第 3 期 Chin J Clin Lab Sci，Mar． 2012，Vol． 30，No． 3 * 基金项目:国家重大科技专项课题 (2009ZX10004-213)。 通信作者:车小燕，研究员，博士研究生导师，E-mail:Chexiaoyan@ 126． com。