四君子汤抗衰老的药理作用研究

第8卷 第5期 2006年9月 辽 宁 中 医 苗 大 学 学 报 JOURNALOFL认ON刃NGUNIVERSITYOFTCM V目.S NO.5 SeP-，20(场 四君子汤抗衰老的药理作用研究 李海波，李 斌 (辽宁中医药大学，辽宁沈阳11(X)32) 摘 要:探讨四君子汤理气化疾杭衰老的作用机理。:采用D一半乳糖小鼠亚急性衰老模型，小鼠预背部皮 下注射D一半乳糖40天，中药组注射D一半乳糖同时以不同浓度浓缩四君子汤煎液灌胃40天，并以空白组作对照，观 察四君子汤自由基代谢指标血清超氧化歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷光普肤过氧化物酶(GSH一Px)的影响。 结果:四君子汤能改善D一半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠的sOD活性明显下降，MDA含童明显提高，四君子汤能够 影响脑、胸膝和脾的指数，提高实脸动物提高血清SOD和GsH一Px活性，降低MDA含童。结论:四君子汤具有一定 的抗衰老作用，并为健脾化疾抗衰老理论提供了实验依据。 关键词:四君子汤;杭衰老;药理研究 中图分类号:G451.2 文献标识码:A 文章编号:1008一231(20(拓)05一0049一02 中医学认为，肾为先天之本，脾胃为后天之本， 衰老与脾肾二脏密切相关，有关肾与衰老的研究很 多11一，本研究试从健脾化痰人手，探讨四君子汤延缓 衰老的作用。因为脾气虚衰，运化功能失常，则痰浊 内生，这种病理产物又作为病因影响脾的运化功能， 脾之运化能失常是衰老的重要机制，因此孙思邀、李 东垣等诸多医家强调 “补肾不如补脾”，调补脾胃是 药物养生的重要环节。结合衰老现代研究自由基作 用体内代谢产物是导致机体衰老的重要物质，与中 医的痰浊内积具有相似性，因此我们推测采用理气 化痰疗法可清除人体内的代谢产物而延缓衰老进 程。四君子汤为功在健脾化痰，笔者就四君子汤延 缓衰老的作用进行了初步的实验研究。报道如下。 1 材料与方法 1.1 药品和试剂 四君子汤(选自《太平惠民和剂 局方》):按获荃，炙甘草，白术，人参等比例配伍。以 上药物购自辽宁中医药大学附属医院药局，一次性 购齐并鉴定。上方水煎煮2次，合并滤液浓缩至生药 含量为1岁mL，冰箱冷藏备用(实验所用剂量均以生 药计)。soD、MD和GSH一Px试剂盒由南京建成生物 研究所提供。D一半乳糖为上海试剂二厂产品， 用0.9%生理盐水稀释成sm岁inL，冰箱冷藏备用。 12 动物实验 选用昆明种小鼠印只(由辽宁中医药 大学实验动物中心提供)，雌雄各半，体重(20土2)9。实 验小鼠随机分为6组:①四君子汤中药(高、中、低剂量) 组:每晶颈背部皮下注射Dwe半乳糖，同时灌胃四君子 汤浓缩剂，剂量为4目吸92目吸9和1创kg;②D一半乳糖模 型组:每日颈背部皮下注射D一半乳糖，同时灌胃等剂 量的生理盐水;③空白对照组:每日注射相应量的生理 盐水和灌胃相应体积的蒸馏水;④阳性对照组:每日颈 显提前，镜下可见有血凝块形成，72h后处死动物可 见模型组有直径3~4mm大小的血肿，其血肿的大小 基本一致，其产生的相同大小的血肿区胶原酶用量 可明显减少，从而减少了对其它检测指标的影响。 显微结构观察血肿邻近的组织的出血 、水肿明显，神 经细胞空泡变性、核固缩、深染。超微结构显示模型 组神经细胞明显肿胀，胞浆内大部分细胞器消失，神 经纤维脱髓鞘.毛细血管周围水肿。脑含水量是反 映造模后血肿周围组织脑水肿情况的一个重指标， 造模后72h大鼠脑含水量观察明，其模型组的脑 含水量明显高于假手术组少ko.OS)，说明脑水肿的存 在。鉴于以上观察我们建议:运用该模型进行研究， 不宜超过96h，既能在血肿形成，尚未吸收，血肿周 围脑水肿仍未消退、神经行为体征明显的情况下，观 察研究因素对血肿吸收、脑水肿改善、形态学改变、 神经功能缺损的作用，又不受神经行为表现自然恢 复的影响。本研究的结果提示:大黄蜜虫丸中药治 疗组可促进血肿的吸收明显改善造模后大鼠脑组织 形态上的损害。其大体形态观察发现中药组血肿范 围较模型组明显缩小。血肿周围组织的显微和超微 结构较较模型组好转。另外，脑含水量的观察表明， 中药组72h大鼠脑含水量明显低于模型组少、0-05)。 通过以上的研究可以看出中药大黄蜜虫丸可明显的 改善胶原酶加肝素联合注射法诱导大鼠脑出血模型 的脑组织形态学损害，降低因出血而致的血肿周围 组织的水肿。对大鼠脑出血模型所造成的脑细胞的 损害有一定的保护作用。这也为我们临床上运用大 黄蜜虫治疗脑出血急性期取得很好的疗效提供了实 验方面的依据。. 参考文献: 川 峨高中.浅淡大黄魔虫丸泊疗脑出血急性期【J].江苏中医2“刀， 21(12):42 【ZJ 戴高中，陈汝兴，卫洪昌，等.大黄度虫丸治疗脑出血急性期的 临床观察【Jl.上海中医药杂志，20叱，39(收1):14 【3]任泽光，吴建中.大限脑出血模型【J].中华神经外科杂志，1993， 9(4):205 【4】下、臼tantJP，阮娜cP，M川ikanCH，et日，公拌‘讹n回加峨目洲血阁 hematom成J].ArcbNe咖10盯，1963，9:586 【5】R叩perAH，众口asNT.C二b司bl以泪口。样止改“户们功entalb助目 召叨砂iahembn七哪e【J].An皿1oof阮urology，1982，11:266 16]NathFP，KellyPr，JonkinsA，etaLE几ctofexrerimon目intzace- 二b旧hemo滋叱eon卜扣】d日ow以IPilea勺p如‘山ility明dhi，toC- he而aty[Jl.JNeurO日U飞，1987，66:555 17]R伽e川笼唱GA，Mun一BryceS，WesleyM，。tal.Colla罗~ indu- ced玩n.cerebralhem位滋班gelnza倾J].5加ke，l99()，21:801 收稿日期 作者简介 ZIX巧一04es21 李海波(1968一)，男，辽宁凌海人，副教授，博士研究生，研究方向:中药抗衰老、抗肿瘤。 医生在线 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 8卷 背部皮下注射D一半乳糖洞时灌胃维生素E0.1 }l,g/kgo 1.3 方法及检测指标〔3-41 于末次给药后1天摘眼 球取血并处死小鼠，小鼠摘眼球取血，常规离心过 滤机，取血清用于测定血清SOD, MAD和GSH-Px含 量，测定方法按试剂盒说明书操作。处死后的小鼠 取出脑 、胸腺、脾、肾和甲状腺，吸去血液，剪去脂肪、 系膜，精确称取重量，并按照脑(胸腺、月卑、肾、甲状 腺)指数等于脑(胸腺、脾、肾、甲状腺)重mg/体重g 公式计算脑、胸腺、脾、甲状腺和肾指数。 1.4 统计学方法 所有数据以X。表示，结果用方 差分析。 2 结 果 2.1 四君子汤对亚急性衰老小鼠脑胸腺脾肝肾指 数的影响 D一半乳糖模型组小鼠脑指数、脾指数、 甲状腺指数、肾指数、均比正常组显著降低，说明D- 半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠脑 、胸腺、脾 、肝和肾 的重量明显下降。四君子汤中药组小鼠的脑指数、 胸腺指数较D一半乳糖模型组明显(P < 0.05=提高。 但对甲状腺指数、脾指数和肾指数影响没有统计学 意义。结果见表10) 表1 四君子汤对亚急性衰老小鼠胸腺脾肝肾指数的影响匡士s) 脑指数 甲状膝指数 3.67土0.76 3.21 * 0.35 3_26士0.65 3.21 * 0.54 3.33土0.64 3.02 * 0.58 牌指数 肾指教 模型对照 维生素E十D-gal IJZT+D-gal(高) IJZT+D-gal(中) 曰ZT+D-.皿(低 ) 16_99士2.66 13.12出2_01 2.48 * 0.69 1.35士0.45 15.12土 2.19士0.69 16.68土 2.54 2_33 2_33土0_82 13.16: 1.68 11.36: 1.56 12.11出1.32 1125士1-33 16.12士2.315 16.23士2_41 2.11 : 0.65 2.23士0.72 7.66: 1.34 6.(拓: 0.98 7.29: 1.12 7.43: 1.24 7.29土1.25 7.17土1.14 12.15土0.26 11_23 土0.28 注:与模型对照组比较，*P < 0.05，与模型对照组比较，OP<0.01, 2.2 四君子汤对D一半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠 MDA的含量，与模型组比较有明显差异，并呈现剂 SOD MDA和GSH-Px的影响 结果显示，不同浓度 量依赖性特点。结果见表20 的四君子汤明显提高SOD和GSH-Px的活力，降低 表2 四君子汤对D一半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠SOD MDA和GSH-Px的影响匡士s) Dow (班s ) SOD (Mu/mL ) MDA (nmol/mL ) GSH-Px (m@/L ) 487含51 296土37 628生1_11 模型对照 维生索E+D-gal IJZT+D-gal(高) IJZT+D-gal(中) IJZT+D-zal(低 ) 14.13 *3.22 z.石? 6.36' 5.礴3 378 * 55 431士45 10.12生 6.98 * 2.12 40-12土5.135_69一 399出38 386土42 8.42全2.15 10.02士2.31 35.11出4.79 31.36* 3.66 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 注 3 讨 :与模型对照组比较，*P < 0.05，与模型对照组比较，OP<0.01. 自由基是一类具有高度活性的物质。它们可在 细胞代谢过程中连续不断的产生并对自身具有一定 损害作用，可以直接或间接地发挥强氧作用，从而 损伤生物体的大分子和多种细胞成分(5l0自由基可 以广泛地参与机体的生理与病理过程。正常机体， 自由基氧化作用与抗氧化防御作用处于动态平衡的 状态，但随着年龄增长，自由基的产生增加，自由基 氧化作用与抗氧化防御作用处于动态平衡失调，故 机体功能失调，人体日渐衰老。衰老的自由基学说161 认为自由基反应可引起膜内多价不饱和脂肪酸发生 脂质过氧化反应，使老化代谢产物在体内蓄积性增 加，引起膜结构和细胞功能的紊乱，从而导致机体的 衰老。D一半乳糖亚急性衰老小鼠模型是根据衰老 的代谢紊乱学说研制而成的。该模型系在一定时间 内连续注射D一半乳糖，使机体细胞内半乳糖浓度增 高，在醛糖还原酶催化作用下，还原成半乳糖醇，这 种物质不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内，影 响细胞的正常渗透压，导致细胞肿胀、功能障碍、代 谢紊乱，最终引起机体衰老。D一半乳糖能提高体内 自由基水平，使SOD活性降低，自由基反应的最终 产物MDA含量提高，产生拟老化效应。SOD酶是机 体内清除自由基的重要抗氧化酶之一，机体抗氧化 酶活性降低或抗氧化剂含量减少，能造成机体总抗 氧化能力下降，降低防御自由基的能力。SOD是“内 源性抗衰老物质”，它们能够有效地清除自由基及其 代谢产物Cll0 四君子汤能提高SOD活性，表明该方可以增强 机体内源性抗衰老物质活性，从而抑制自由基对细 胞的损害。本实验结果提示:四君子汤能够拮抗D- 半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠脑、胸腺重量的增龄 性下降，但对肝、肾指数的影响与模型组比较无明显 差异，说明四君子汤能够有效地控制和对抗脑的衰 老，保持机体的免疫功能，提高抗病能力。本文提示 四君子汤可能通过提高内源性抗衰老物质的活性， 抑制脂质氧化反应，也可能通过直接清除自由基而 发挥其抗衰老的作用。. 参考文献: 【1]刘永源，贺松其.二陈汤对亚急性衰老小鼠的实验研究【J].辽 宁中医学院学报，2003,4:373-374 [2]沈自尹，蔡德培.人分子水平研究补肾法对性早熟与衰老的调 控规律[J].中国中西医结合杂志，2005,(7)25:549-550 [3]陈奇.中药药理实验方法[M].第3版.北京:人民卫生出版枕 2加2.8 I82002.838 [4]陈勤.抗衰老实验方法学[MI-IM:中国医药科技出版社，1996. 445 [5]Masaaki Akagi.Neuroprotective effect of magnolol in the hippoc- ampus of senescence-accelerated[ M].International Congress Se- ries, 1260 (2004):405-408 [6]MJ Jurmann, L Dammenhayn, HJ Schaefers, and A Haverich; Pu- lmonary reperfusion in jury: evidence for oxygen-derived free radical mediated damage and effects of different free radical sea- venge城J〕.Eur.J.Cardioth。二..Sung.，Jul 1990,4: 665 [7 ] Matthew T.Davis and Wally J.Bartfay. 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