日本血吸虫虫卵分离方法的改进

＼f7 一／7／ ．17O ． 目亭盘 癌 岛方 亟 丧知 ， 血暧虫病防治雍寿 生整 鲞璺 日本血吸虫虫卵分离的改进 淅江省 院鬻： ( 昌31001 3) 广 2 1 淅江省医学科学院寄生虫病研究所 (杭州 随着免疫生化技术的进展，在血吸虫病 诊断方面 ，普遍采用血吸虫虫卵作为抗原，制 作诊 断试剂，因此，虫卵的需要量越来越大。 几十年来，国内外分离日本血吸虫虫卵普遍 采用将感染家兔肝脏捣碎、过筛、沉淀、离心 及过滤五步的传统方法。此方法操作步骤复 杂，分离速度幔，虫卵得量低，成本高。近年 来，我们对 日本血吸虫虫卵传统的分离方法 进行 了改进，建立 了一种 日本血吸虫虫卵分 离的新方法。 材料与方法 1 材料 取体 重 2—3kg健康家兔 8 只，每只家兔按常规感染 1 5Oo一2 000杀尾 蚴。感染家兔饲养 45a后，解剖取肝脏，去除 太血管及肝胆管，剪碎用普通天平称其重量， 将肝组织一分为二，一份用传统方法分离虫 卵，另一份用新方法分离虫卵。 2 方法 2．1 传统方法 取肝脏组织捣碎、过 筛、沉淀、离心、过滤。具体操作参照血防手册 进行，操作过程中均采用 1 生理盐水。 2．2 新方法 第一步：取肝脏组织捣 碎，8 000转／rain共 3m En。第二步：过筛，依 次用 4O、80、120、180孔／25．4ram 筛子过筛， 去除体积 比虫卵大的肝洼，再用 300孔／25．4 ]rflln缔子过筛，去除体积比虫卵小的肝渣，并 收集虫卵。第三步：漂浮，特收集的虫卵教入 白色塘瓷胜盆 中，加入 300ml左右 8℃以下 的自来水，轻轻摇动胜盆，使体积与虫卵相 等，而比重比虫卵小的肝渣漂浮在水 中，虫卵 沉降在脸盆底鄯，转动脸盆使虫卵集中，收集 虫卵。操作过程均采用 自来水，水温控制在 8℃以下，防止虫卵孵化。 上述二种方法收集的虫卵，达到每 ]00 只虫卵内<5块杂质为合格，否则再次 离心 或漂浮。合格虫卵冰冻干燥，用精密天平 称其重量。 3 现场应用 日本血吸虫虫卵分离的新方法在浙江省 宁海县卫生防疫站及加善县枫桐卫生院进行 了现场应用，二地分别感染家兔 45只及 32 只，感染方法同前。 结 果 1 实验 室 感染家兔8只，饲养过程中死亡2只，余 6只家兔肝脏重1 324g，剪碎后一分为二，用 二种方法分离虫卵。 传统方法 662g兔肝(3只兔)舟 离虫 卵耗时7h，每只兔肝分离时间2h2Omin；获得 虫卵0．221g·每只兔肝获得虫卵0．074g。 新方法 662g兔肝 (3只兔)分 离虫卵 耗 时 3h，每只兔肝分 离 时间 1h；获得 虫 卵 0．363g。每只兔肝获得虫卵0．121g。 2 现场应用 宁海县卫生防疫站感染家兔45只，饲养 过程中死亡 1O只，将 35只兔肝采用新方法 分离虫卵，工作时间 48h，每只兔肝分离时间 lh22mln；获得虫卵 6．75g，每只兔肝获得虫 卵O．193g。 加善县枫桐卫生院感染家兔32只，饲养 过程中死亡7只，将 25只兔肝采用新方法分 离虫卵，工作时间 32h，每只兔肝分离时间 lhlTmin；获得虫卵 4．85g，每只兔肝获得虫 卵 0．194g 讨论与小结 传统方法与新方法分离 日本血吸虫虫卵 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国血吸虫痛防治杂志 1998年第 1o卷差!塑 有 以下几方面的区别。 1 操作步骤 传统方法采用捣碎、过 筛、沉淀、离心、过滤五步{新方法采用捣辞、 过筛、漂浮三步。新方法不但操作步骤简便， 而且操作器具简单，更易于推广应用 2 分离速度 用传 统方法分 离虫卵， 每只兔肝需 2h20min，而新方法只需 1h 二地 推广应用结果明，用新方法分离虫卵，每只 兔肝所需 时间分别为 lh22min及 1hl7mln 新方法分离虫卵的速度 明显快于传统方法 主要是新方法省去了沉淀、离心二步时间。其 次传统方法用 40—120孔／25．4mm．去除体 积 比虫卵大的肝渣，沉淀、离心去酴比重比虫 卵小的肝渣，但要使虫卵纯度达到合格至少 要重复离心 4次以上，每次离心的量少，影响 分离速度；新方法用 40—180孔／25．4mm 过 筛去除体积比虫卵大的肝渣．比传统方法更 为彻底，用 300孔／25．4mm 过筛去除体 积比 虫卵小的肝渣，更为重要的是用漂浮去滁体 积与虫卵相等而比重比虫卵小的肝渣，经漂 浮后收集的虫卵纯度可达到台格。 3 虫卵得量 研究结果表明， 传统方法每只兔肝获得虫卵 0．074g，新方法 每只兔肝可获得虫卵0．121g；二地推广应用 新方法每只兔肝获得虫卵0．1 93g及0．194g 新方法分离虫卵得量明显高于传统方法。主 要是传统方法在 40—120孔／25．4mm 过筛 过程中要考虑下一步沉淀、离心 时容器的限 制，不可能大量用水，不能彻底冲洗肝渣，导 致部分虫卵丢失；而新方法在 40—180孔／ 25．4mm 过筛过程 中可用大量水充分冲洗肝 渣，减少虫卵丢失 其次传统方法操作过程用 1 生理盐水．使肝组织液中蛋 白质形成豆腐 渣状凝块，虫卵粘附在凝块表面，在过筛中导 致虫卵丢失；而新方法操作过程采用 8"C以 下自来水．避免肝组织液中蛋白质产生凝块， 过筛顺利，减少虫卵丢失。另外，传统方法操 作过程时间长，增加了虫卵孵化的机会；而新 方法操作过程时问短，减少 了虫卵孵化的机 套。 通过实验室研究与现场应用，我们认为 本方法具有操作简便、分离速度快、虫卵得量 高、获得虫卵成本低的优点，适宜推广应用。 宁海县卫生防疫站周德 宏同志 t嘉善县枫桐卫 生院陈经纹同志参加部分工作井给予帮琦，一并志 谢 1996—05一O4收稿 (蝙辑 ：方洪 元) 急性血吸虫病误诊甲型肝炎 1例 沈美清 章强橙 刘 林 董兰芬s 1 浙江省桐乡市卫生防疫站 (314500) z 淅江省桐乡市第一^民医院 3 淅江省桐乡市卫生局 患者王××，男性·36岁，安徽省无为县泉塘乡 长河村人．从事水上燃煤运输 9月 5日因发热在戎 市某卫生院就诊。后以畏寒、发热、腹胀、乏力半月泉 收住栽市第一人民医院。既往无血吸虫痛史 ．1 5年前 忠过病 毒性肝 炎 ^ 院 时，体 温 38．2C，肝肋下 1、 5cm。经实验室初步挂查．诊断为甲型肝炎。住院期间 一 直给予护肝治疗，但持续发热．大便每天3—4欢， 有帖藏，病情来见好转。再作流行痛史调查．患者当 地有血吸虫痛流行 。8月上旬忠者 曾固船上鸭子逃^ 长江，下永抓鸭接触疫水，约一月后出现畏寒、发热、 肝脾肿大等症状和体征。再作问接血凝和环卵沉淀 试验．结果呈双阳性反应。然后取大粪量集卵毛蚴孵 化，孵出大量毛蚴．当即确母为急性血吸虫痛，并立 即给予吡喹酮捕原治疗 第 5天体温下降．第6夭降 至正常。 1997—1o-2z收稿 (蝙辑：包献清) 维普资讯 http://www.cqvip.com