更年安胶囊质量标准研究

Dmg Standards of China 2009．Vo1．10 No．6 E)，每 1 mg××××含内毒素的量应小于 A Eu。” 对某些产品，必要时还可以注明可以使用的鲎试剂 生产厂家。 参考文献 [1] 国家药典委员会．《中国约典I临床用药须知》．(化学约和生物 制品卷)[M]．北京：人民卫生fj{版社，2005：492． [2] 国家药典委员会．《中华人民共和国药典临床用药须知》．(化 学药和生物制品卷)[M]．化学工业出版社，2005：513． 更年安胶囊质量标准研究 [3] [4] [5] [6] 中国药品标准2009年第 lO卷第 6期 417 国家药典委员会．《中国药典12005年版二部[s]．北京：化学 工业出版社，2005．149，附录V． 杨积平 ．注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠 (2：1)细菌内毒素检查 法建立的方法学研究[J]．淮海医药，2005，23(6)：44_4—445． 陈海松．动态浊度法定量测定头孢哌酮钠中的细菌内毒素 [J]．中国药师，2005，8(1)：34．35． 黄晓虹．注射用头孢哌酮钠细菌内毒素检查方法的研究[J]． 国际医药卫生导报 ，2004，22(2)：63-64． 谭少云，范宜涛，叶放，杨放，陈溪，邹瑜(广州门云山制药股份有限公司，』 州510515) 摘要 目的：建立更年安胶囊质量标准。方法：采用薄层色谱法对方中的五味子、何首乌、首乌藤、麦冬、玄参、牡丹皮、钩藤进 行鉴别；采用高效液相 色谱法测定五味子醇甲的含量。结果：薄层分离度好，专属性强；五味子醇甲在 0．05～2．0 g范围内线 性关系良好，平均回收率97．2％ ，RSD为 1．7％(n=9)。结论 ：所建立之方法准确可靠、灵敏度高、专属性强，可有效控制更年 安胶 囊的质量。 关键词：更年安胶囊；五味子；何首乌；首鸟藤 ；麦冬；玄参；牡丹皮；钩藤 中图分类号：921．2 文献标识码：A 文章编号 ：1009—3656(2009)一6—417—5 Quality Standard for Gengnian an Capsule Tan Shao—yun，Fan Yi-tao ，Ye Fang，Yang Fang，Chen Xi，Zou Yu(Guangzhou Baiyunshan Pharmaceutical Shared Co．，Ltd． Guangzhou 510515，China) Abstract Objecitve：To establish the quality standard for Gengnian an Capsule．Methods：Fructus schisandrae chinensis，Radix poly— goni muhifiori，Caulis polygoni muhifiori，Radix ophiopgonis，Radix scrophulafiae，Cortex moutan；Ramulus uncariae cumuncis in Geng— nian an capsule were identified by TLC．Schisandrin was determined by HPLC．Results：The characteristic identification by TLC was distinct and highly specific．The quantitative evaluation of schisandrin had the linear range of 0．05～2．0 txg．The average revovery was 97．2％ and RSD was 1．7％ ．Conclusion：The method is reliable，accurate and specific．It can be used for quality control of Geng— nian an Capsule． Key words：Gengnian an capsule；fructus schisandrae chinensis；radix polygoni muhifiori；caulis polygoni muhifiori；radix ophiopgo— nis：radix scrophulariae；cortex moutan；ramulus uncafiae cumuncis 更年安胶囊是由五味子、制何首乌、首乌藤、麦 冬、玄参、牡丹皮、钩藤等十五味药组成，具有滋阴， 除烦安神，主要用于更年期潮热汗出，眩晕耳鸣、烦 躁失眠。原试行标准有茯苓、玄参、泽泻、牡丹皮、钩 藤、麦冬的薄层鉴别和五味子醇甲含量测定，但可操 作性、重现性、灵敏度不理想。本文增订了五味子、 制何首乌、首乌藤的 TLC鉴别，优化了麦冬、玄参、 牡丹皮、钩藤的 TLC鉴别和五味子醇 甲含量测定 方法。 1 仪器与试药 Agilent 1 100高效液相色谱仪；紫外分光光度计 (SHIMADZU UV-2401PC)；乙腈为色谱纯；其它试 剂均为纯；五味子对照药材、何首乌和首乌藤对 照药材、五味子醇甲对照品、麦冬对照药材、玄参对 照药材、哈巴俄苷对照品、哈巴苷对照品、牡丹皮对 照药材、芍药苷对照品、丹皮酚对照品、钩藤对照药 材(中国药品生物制品检定所提供)；更年安胶囊由 广州白云山制药总厂提供。 作者简介：谭少云，女，制药工程师。学科及研究方向：新药研发。联系电话：15014193796。 中国药品标准2009年第 lO卷第 6期 418 2 定性鉴别 2．1 五味子、制何首乌和首乌藤的TLC鉴别 取本品内容物6 g，研细，加乙酸乙酯30 mL，超 声处理 30 min，滤过，残渣加少量乙酸乙酯洗涤一 次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙酸乙酯 1 mL使 溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材 0．5 g，何首乌对照药材0．7 g，首乌藤对照药材 1．4 g，同 法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》 2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述四种溶液 各5 L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂 的硅胶 GF254薄层板上，以石油醚(30～60 oC)一甲 酸乙酯一甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开， 取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品 色谱中，在与何首乌、首乌藤对照药材色谱相应的位 置上，显相同颜色的斑点。置紫外光灯(254 nm)下 检视，供试品色谱中，在与五味子对照药材色谱相应 的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照均无干扰。 见图 1，2。 l 2 3 4 5 6 8 I 2 3 4 5 6 7 8 365ilirl 25,1ILIII 图1—2 五味子、制何首乌和首鸟藤的TLC鉴别 l 五味子阴性对照；2．五昧子对照药材；3—5供试品；6．何蓖 乌对照药材；7．首乌藤对照药材；8．制何首乌与首呜藤双阴性对照 2．2 麦冬的TLC鉴别 取本品内容物 6 g，研细，加水 40 mL，低温加热 取本品内容物 6 g，研细，加水40 mL，加盐酸 1 mL，加热回流30 rain，放冷，用三氯甲烷提取2次，每 次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷 1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材 0．5 g，加水煎煮 30 min，滤过，滤液浓缩约至40 mL， 同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药 典}2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取卜述两种溶液 各5 ，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂 的硅胶 GF'254薄层板上，以三氯甲烷一_人J酮(4：1)为展 开剂，展开，取出，晾干、置紫外光灯(254 nm)下检视。 供试品色谱中，在 科照药材色谱相应的位置上，显 相同颜色的斑点，阴性刈照无干扰。见图3。 I 2 3 4 5 图 3 麦冬的 TLC鉴别(254nm) 1～3．供试鼎；4．麦冬对照药材；5 麦冬阴性对照 2．3 玄参的TLC鉴别 一 溶剂前沿 T 35℃ RH 62％ 10 min使溶解，离心，取上清液，用水饱和正丁醇提取 2次，每次 30 mL，合并正丁醇液，蒸于，残渣加甲醇 0．5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取玄参对照药 材0．7 g，加水煎煮 30 min，滤过，滤液浓缩约至 4JD mL，同法制成对照药材溶液。再取哈巴俄苷、哈巴苷 对照品，分别加甲醇制成每 1 mL含 1 mg的二种溶 液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》 2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液 10 L，对照品溶液2 L，分别点于同一以羧甲基纤维素 钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上，以乙酸乙酯一甲酸一冰 乙酸一水(15：1：1：2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 1％问苯三酚溶液[1％间苯三酚丙酮溶液．盐酸(6：1) 临用新制]，在 105 cc加热至斑色清晰。供试品色谱 中，在与对照药村和对照品色谱相应的位置上，显相 同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图4。 2．4 牡丹皮的TLC鉴别 2．4．1 取本品内容物5 g，研细，加乙醇 50 mL，超声 处理 15 rain，滤过，滤液蒸干，残渣加水 10 mL使溶 解，用水饱和正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁 醇液，蒸干，残渣加甲醇 1 mL使溶解，作为供试品溶 液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每 1 mL含 1 mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药 典))2oo5年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液 擘 瓣 藏 j 鑫 骥黧” ⋯ ∞ t i 曩 中国药品标准 2009年第 l0卷第6期 419 ．． 一 溶剂前沿 T：22℃ RH：76％ 1 2 3 4 5 6 7 图4 玄参 TLC图 图6 牡丹皮TLC图(丹皮酚) 1～3·供试品；4·幺参对照药材；5·哈巴苷对照品；6·哈巴俄苷对照 1～3 ． 供试品；4．丹皮酚对照品；5．牡丹皮阴性对照；6．牡丹皮对照 品；7·幺参阴性对照 药材 1O ，对照品溶液2 ，分别点于同一以羧甲基纤维 素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上，以三氯甲烷．乙酸 乙酯-甲醇一甲酸(40：5：10：0．2)为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在 105 oC加热至斑点 清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置 上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图5。 2．4．2 取本品内容物6 g，研细，加乙醚30 mL，超声 处理30 rain，静置，取上清液，低温挥干，残渣加丙酮 1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取牡丹皮对照药材 0．5 g，同法制成对照药材溶液。再取丹皮酚对照品， 加丙酮制成每 1 mL含 1 mg的溶液，作为对照品溶 液。照薄层色谱法(《中国药典))2005年版一部附录 ⅥB)试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各 l0 ，对照品溶液2 ，分别点于同一以羧甲基纤维素 钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上，以环己烷一乙酸乙酯 (5：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性 5％ 三氯化铁乙醇溶液，在 105 oC加热至斑点清晰。供试 品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置 上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图6。 ．． 一 溶剂前措 T。24 C RH：7l％ 图5 牡丹皮的TLC图(芍药苷) 1～3．供试品；4．芍药苷埘照品；5．阴性对照 2．5 钩藤的TLC鉴别 取本品内容物 10 g，研细，加浓氨试液 10 mL使 之湿润，加三氯甲烷30 mL加热回流30 min，滤过，残 渣加少量三氯甲烷洗涤一次，合并三氯甲烷液，蒸干， 残渣加三氯甲烷 1 mL使溶解，作为供试品溶液。另 取钩藤对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。照薄 层色谱法(《中国药典))2005年版一部附录Ⅵ B)试 验，吸取上述两种溶液各 l0 ，分别点于同一以羧甲 基纤维素钠为黏合剂的硅胶 GF254薄层板上，以三氯 甲烷-丙酮一浓氨试液(15：6：0．1)为展开剂，预饱和 15 min后，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检 视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。见图7。 溶剂前沿 T 23℃ RH：75％ 图 7 钩藤 TLC图(254 nna) 1～3．供试品；4．钩藤对照药材；5．钩藤阴性对照 3 五昧子醇甲的含量测定 3．1 供试品溶液的制备 3．1．1 提取方法的选择 取装量差异项下的本品内 容物，研细，取约0．75 g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 精密加入甲醇 50 mL，称定重量，分别采用超声和水 浴回流两种方法提取 30 min，放冷，再称定重量，用甲 醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品 溶液。结果两法一致，超声提取较方便快捷，见 1。 3．1．2 超声提取时间的选择 同上操作，分别超声 提取 10，20，30 min，结果超声提取 20 min时含量已 基本提取完全。见表2。 2o09年第 l0卷第 6期 420 表 1 不同提取方法的试验结果 表2 超声提取时间对含量测定的影响结果 3．1．3 对照品溶液的制备 精密称取五味子醇甲 对照品，加甲醇制成每 1 mL含 lO g的溶液，即得。 3．1．4 阴性对照溶液的制备 按更年安胶囊处方 中药味的比例，自配不含五味子的群药，按其制法项 制备阴性供试品，再按供试品溶液的制备方法配制 阴性对照溶液。 3．2 检测波长的选择 五味子醇甲在 25Onto处有最大吸收，故选择其 作为作为测定吸收波长。 3．3 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Phenomenex C】8柱(4．60 Inn x 250 mm ，5 Ixm)；流动相：乙腈一水(50：50)；检测波长：250 nm；流速：1 mL·rain～；进样量20 IxL。理论塔板数 按五味子醇甲峰计算为5 000，五味醇甲与杂质峰达 到基线分离，阴性无干扰。见图8。 0 5 10 l5 2O 25 30 35 4O 45 0 5 l0 I 5 20 25 30 35 40 45 O 5 10 15 20 25 30 35 4O 45 图8 阴性对照液、五味子醇甲对照品和更年安胶 囊供试品 的 HPLC图 Dmg Standards of China 2009，Vo1．10 No．6 3．4 线性关系考察 配制浓度为 l0．0 mg·L 五味子醇甲对照品 溶液，分别精密吸取 5，10，20 ILL，注入高效液相色 谱仪；配制浓度为 100．0 mg·L 五味子醇甲对照 品溶液，分别精密吸取 5，10，20 IxL，注入高效液相 色谱仪，测定。以对照品进样量为横坐标，峰面积为 纵坐标，回归方程为：Y=0．000 5X一0．003 1(r= 0．999 9)。结果表明：五味子醇甲在 0．05—2．0 g 进样范围内线性关系良好。 3．5 加样 回收率试验 精 密 称 取 已 知 含 量 的 同 一 批 号 (批 号 20070801，含量 0．367 8 mg·g )的样品0．4 g，置 50 mL量瓶中，精密加入浓度为 100．0 mg·L一的五 味子醇甲对照品溶液各 0．5，1．2，5 mL，加甲醇稀释 至刻度，称定重量，超声提取20 min，放冷，再称定重 量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作 为供试品溶液，按上述色谱条件测定，结果平均回收 率97．2％，RSD1．7％，见表 3。 表3 加样回收率试验 3．6 精密度试验 3．6．1 进样精密度试验 精密吸取同一供试品溶 液，连续进样测定 6次，RSD为0．32％。 3．6．2 重复性试验 精密称取同一批更年安胶囊 适量，平行 9份，分别测定含量，平均含量为每粒 0．110 1 mg，RSD为 1．2％。 3．7 稳定性试验 取供试品溶液，分别于 0，2，6，24 h测定，RSD 为0．56％。表明供试品溶液在24 h内稳定。 3．8 耐用性试验(不同色谱柱的比较试验) 取同一批样品，分别用 Phenomenex C (3)柱 (4．6 mm×250 mm，5 in和 Symmetry Shield’ RP18 (4．6 mm x 250 mm，5 m)，两种品牌的色谱柱测 定，结果两种品牌的色谱柱对含量测定结果无明显 差异。 3．9 样品的测定 取 供 试 品 (批 号 20070801，20070901， 20070902)按上述方法测定，3批的平均含量分别为 每粒0．11 mg，0．12 mg，0．11 mg，结果均符合规定。 4 讨论 4．1 本品由十五味药组成的复方制剂，所含成分复 杂，本法的TLC鉴别采用五个色谱系统鉴别七味药 材。五味子、制何首乌和首乌藤在同一色谱条件下 识别，玄参采用环烯醚萜类专属性的显色剂间苯三 酚溶液可排除杂质干扰。 4．2 经验证何首乌和首乌藤对照药材均含有大黄 素、大黄素甲醚，故本标准采用何首乌、首乌藤对照 药材同时鉴别制何首乌和首乌藤两味药。 人参北芪片质量标准的研究 中国药品标准20o9年第 10卷第 6期 421 4．3 《中国药典》2005年版一部中“更年安片”收 载有2项 TLC鉴别和大黄素的含量测定，本标准融 合中国药典标准，建立7味药材的 TLC鉴别和五味 子醇甲的含量测定，提高了标准。 4．4 本品滋阴，除烦安神。用于肾阴虚所致的绝经 前后诸症。首乌中的大黄素主要是泻下的作用；五 味子的功能为收敛固涩，益气生津，补肾宁心。用于 自汗、盗汗、津伤口渴、短气脉虚、内热消渴、心悸失 眠等症状，上症皆为更年期综合征候，选择五味子的 特征成分五味子醇甲作为含量测定指标更趋合理。 参考文献 [1] 国家药典委员会 ．《中国药典))2005年版．一部[S]．北京：化 学 丁、l 出版社 ．2005：44． 刘晓凤 ，笔雪艳 ，张清波 (1．黑龙江中医药大学，哈尔滨150040；2．黑龙江省药品检验所，哈尔滨150001) 摘要 目的：建立人参北芪片的质量控制方法。方法：采用TLC法同时鉴别制荆中的人参及黄芪膏粉，采用HPLC—ELSD方法 测定制剂中黄芪甲苷的含量。结果：鉴别方法专属性强，含量测定方法黄芪甲苷在 1．060 8—10．608 g之间呈 良好的线性关 系 ；人参北芪片中黄芪甲苷的平均回收率为96．4％ (RSD 1．3％)；结论：该方法简便、准确、分离效果好，可用于人参北芪片 的质 量评价 。 关键词：人参北芪片；薄层色谱；黄芪甲苷；HPLC．ELSD 中图分类号：921．2 文献标识码：A 文章编号：1009—3656(2009)一6—421—3 Study on Quality Standard for Renshen Beiqi Tablets Liu Xiao—feng ，Bi Xue—yan ，Zhang Qing．bo (1．胁渤， 。 ity ofTraditioMl Chin e肘ed w，Harbin 150040，ChiM；2．Hei— longfiang Institutefor Drug Control，Harbin 150001，China) Abstract Objective：To establish a quality standard for Renshen Beiqi Tablets．Methods：Thin layer chromatography was used for i— dentification of Ginseng and Astragalus extract powder at the same time．The Astragaloside was determinated by HPLC—ELSD．Results： The identification study showed strong specificity．The calibration curve was linear in the ranges of 1．0432～10．432 txg．The average recoveries were 96．7％ (RSD1．2％ )。Conclusion：The developed method is simple and accurate．It can be used for quality control for Renshen Beiqi Tablets． Key words：Renshen Beiqi Tablets；TLC；Astragaloside；HPLC—ELSD 人参北芪片是由人参 、黄芪膏粉组成的中药复 方制剂，具有扶正固本，补气升阳，强心固脱，补虚生 津的功效。原标准收载于《中华人民共和国卫生部 药品标准》第四册⋯，其检验项 目为3项化学反应。 为进一步控制产品的内在质量 ，本文对人参北芪片 的质量控制方法进行了实验研究，建立了处方中人 作者简介：刘晓风，女，在读硕士。学科及研究方向：中药学。联系电话 ：13819451055。