作为有效血型试剂的单克隆抗体

单克涟抗体通讯1989年第一期 (总第26期 )：l】1～】1 3 作为有效血型试剂的单克隆抗体 N． C． Hughes-Jones 血型是 多克隆抗血清表示单个扛细胞特征的。最近誊加7专题讨论会井得到 T专题集 从而得出这样一种推论，虽然单克隆抗体非常有前途，但用于血型 鉴定上还很不容易。单克隆抗体技术能提供虹细胞本身具有的特征。 输血习惯与血液学有关，这种关系对输血实践的重要性并无紧密关系，也无相互的利害 关系．输血法几乎完全依据抗原抗体反应，因此，在免疫学中它具有一定的地位．因为血液 好似一个器官，输血是保证移植存活的唯一例子。实际上输血法已被列为移植免疫的一个分 技． 血型由来 输血法与免疫学同时产生，Landols 1875年 观 察蓟一种血清能凝集男一种血蜘胞，这 也是最早体外免疫学观察之一。Von Behring和Kitasato 1990年结合许多其它的观察，如细 菌凝集作用是它们试管活性的特征之一等等，初步形成抗体 学说，从而导致t990年 La tei=er氏发现，即红细胞的凝集作 用可由同种生物获得的抗血清引起，进而发现了ABO系统 并产生现代输血法．血型凝集作用和交叉配合法的原始技术至今仍在使用，因为它是最为简 单、敏感、可靠的方法。 此后的40年这方面无大进展 。t939"~1941年Rh系统发现后又推动了这方面的发展．其 原因是大多数血型抗体属IgG类，在ABO系统中除了这些抗体外，其它的抗体都不能凝集红 血球。由于凝集性 IgM抗体同时存在帮助TRh系统的发现，即在错综复杂的血型系统中发 现了十五个血型系统--1945年Combs，Mouranf和Race的抗球蛋白试验，以抗 一IgG去 凝集 被非凝集性抗体致敏的红细胞 这个试验是Moresehi 1908年介绍的，当时方法并不成熟， 而后就被人们忘记了。在输血实践中仍p／ABO系统和Rh系统为主要系统，与其它系统抗原 相比，这些抗原船有效地刺激抗体产生 而其它系统则忽视了这种不配台性，认为接受者的 血清 中无抗体。 提供用于血型鉴定的高质量和绝对可靠flgABO~RJI特异性多克隆抗血清是一项费时和 费力的工作，常需要供血者红I细胞的第=次免疫作用。因此，单克隆抗体取代多克隆抗体 应用于血型鉴定引起了人们的注意，专题讨论会也回顾了这方面的进展情况，第一次讨论的 主题是科学性和实用性。科学性的目的是以不同的单尧隆抗体识别限定性表位，即使是许多 情况下不完全知道的表达表位的生化结构 实用性的目的是考虑使用单克隆抗体作为常规血 型鉴定的血型试剂。 单克陵抗体趵特性 35个不同试验室对 168种不同的单克隆抗体进行了鉴定，大多数单克隆抗体对ABO和 111 维普资讯 http://www.cqvip.com Rh系统抗原都是特异 的，也 有 与MN、Kell、Lewis、P和其它系统交叉反应 包括ABO 系统的大多数抗体都是 鼠源性和以方法制备的，但 Rh抗体是人源的 在动物中产生的 抗体的特异性都不如人源的 以EBV转移 B淋巴细胞单独的或同杂交瘤一起或异源性杂交 的形式对人单克隆抗体进行检验 单克隆抗体欲取代多克隆抗体显然不是件容易事，关键在于抗原和抗体的性质 一个单 个抗体可识别许多不同的空间基团，凝集性多克隆抗体的特异性的问题在于所有抗体都与特 异性抗原发生反应，而特异性抗原的量是否足够是凝集反应的关键 如果任何单个抗体与其 ’ 它抗原的红细胞上的非特异抗原发生反应，抗体量则不足以引起凝集反应 而用单克隆抗体 的话，则有更多的机会非特异地与另外分子基团发生反应而凝集 (单克隆抗体浓度高 ) 如 - A和B抗原问的差别是较小的，只是在碳水化台物末端有或无乙酰基团。因此，与A和B抗 原发生反应的单克隆抗体的出现是不足为奇的。从输血角度看，更为危险的是抗一A单 克隆 抗体主要与A细胞发生反应，鹤也和B细胞发生反应 类似的发现在Lewis系统中也有，位 于分子核心糖的表位带有ABO的特异性，多克隆血清可识别两个表位 Le 和Le ，这两个表位 在岩藻糖中位置不同 单克隆抗体优先与关系密切的一个或其它显型起反应，但不是绝对特 异的 使用一种单克隆抗体其它方面的有关问题妊识别抗原上的几个不表位问题，如A抗原就 有两个普通型A和Al同时存在，也有几个罕见的遗传基因指导下产生的分子，在质量霸数 量上都与普通型不同 这种差别难以用标准的多克隆血清出来，而且许多多克隆抗体不 与它们起反应，可能是缺乏普通型上的表位。 Rh系统的D抗原 (Rh阳卡宅人必须有D抗原 )，许多年前就知道它存在着许多不同应住。 一 些 Rh-阳性人输血绐Rh阳性人产生抗一D抗体，这种情况的发生可能是供体的D抗原上缺 乏一个或几个表位。这些个体间的相互差异总共可分为6种 Tippett(MRC血型单位，伦 敦 )指出了这些种类细胞与抗一D抗体针对性关系 的 反应类型。这些凝集反应类型与掷制试 验综起来使我们认识到在D抗原上至少有7个不同表位 ABO和 RII抗原上的几个表位 (也存在子其它血型抗原上 )表明了使用单克隧抗体鉴定 血型所存在的问题。应找到能识别相关抗原上莆通型表位的单克隆抗体或使用几_种单克隆抗 体混台物。尽管有这些不足，几个抗一A，抗一B，抗一D (Rh)单 克 隆抗 体现在已可以使 艏了 ‘ 抗原特性 专题讨论会后， 集 _『关于红细胞抗原和单克隆抗体在输血中的作用的专题论文集，除 了具有输血中人单克隆抗体实用价值外，也可以作为测定抗原性质的工具 以往的40年的大 最血清学资料使我们认识yRh系统和40个不同型 (显型 )，但要分离抗原是十分困难的 抗 原一旦从它的脂环境中提取出来后，分子表位的生化特性即丧失 Moore和他的同事在1982 年在这方面取得了重大突破 他们指出，如果先把抗原固定在抗体上它就稳定了。单克隆抗体 的大量使用使抗原分离容易得多了，而且可以鉴定多腻和大约28"--34KD 的分子团 众所周知，Rh系统发现后的几年内在染色俅 l上的三个遗传睫基医Dd，cc和Ee相互 间有着极为密切的关系。还有许多有争论的地方墨是否这些基因的最终产物是含所有裘位的 大分子 还是三个相互分开的 各 自有一个表位的分于。3-P，Cartron(CNTS 、 巴黎 )和他 】l2 维普资讯 http://www.cqvip.com 舳同事在这方面取得较大进展，井有充分证据表明它是三个分开的分子。主要有两方面的证 据．第一，成对地甩单克隆抗一c、抗一D和抗一】 抗体，每一种抗体标有不同的荧光分子， 单个红细胞上每个表值就可能显示每个表位的数量一这些表位是相互独立的．表明了它们是 分开的分子，预期点阿接呈直接关系的裘位在同一个分于上。第二，带有表位的多肽的分离是 以三种不同的酶将肽断开，可以揭示每分子上的肽图 既然多肽上一些氨基酸顺序已知道， 分离基因已不会很久了，而且将要发现许多不同显型的结构基础 ((Immunology Today 9、(3)68—7O．1988．)) (柳增善译 ￡姜党校 ) 艾滋病毒的中和性单克隆抗体 松下修三 等 f|1985年HIV感染患者血清中存在阻止艾滋病毒感染的中和抗体以来，对其确切的 作甩尚不清楚。中和抗体的作用靶点~：HIV被膜蛋白 gp120，其通过病毒表面或病毒感染细 胞表面的gp41的中介作用，在病毒的病原性和感染性上超着重要作用。作者已制备出与gpl20 反应的H1Y中和性单克隆抗体，本文对其性质和今后应用傲一介绍。 一 、 杂交瘤的建立 将加热失活的病毒HTLV一噩口株经过处理后得到各 糖蛋白，然后免疫BAIB／e小鼠(4 次 )，取小鼠脾细胞与X63的骨髓瘸细胞融台，经过克隆和再克隆化后，得到活性较大的亚 单隆84 CB ，其分泌的单克隆抗体命名为0．5B。其次，用HIV携带者血清进行检查发现其 不仅可与env基因产物gp120帮gpl40反应，还可与pol基因产物P”、P 及gag基因产物P”． P“、P”反应。gag蛋白的单吏隆抗体P“(VAK5) 抗P”不仅能分别与P“和P”结合， 而且能与其共同前驱体结合。通过RIPA．交叉免疲沉淀法等确认0．5 B为gpl20的单克隆抗 体 = 中和港憾 的测定 HIV感染包括病毒颗粒直接引起的感染和细胞问感染 (cell-to-cell infection)，其均 与gpl20和HIV受体CD分子曲相互作用有关 HIV感染细胞通过膜表面的gP120而与非感染 的CD 阳性细胞不峨地发生融台，从而形成多核巨细胞。多核巨细胞不久死亡又释放出太量 病毒。利用这科t台胞体形成系统可检查0．s目的中和活性。结果表明HIV生成细胞与GD 阳 性细胞混台培养18d,时后，对照组明确可见有台胞体生成，而0．8 p实验组则明显被抑柳 培养 3日后，对照组细胞已聚集成团，实验组仍散在分步。因此0．5目有明显抑制台胞体形成 的作用 检查培养上清中的浓缩病毒的感染性，病毒选用最初免疫动物的I{TLV一豆自株和RF 林。用0．s口(梯度稀释 )或含有中和抗体的血清对病毒进行预处理，然后使其感染 H。细胞， s一 6天后测定感染细胞数量．发现 0．5p在 100ng／ml低浓度下即有阻止面B株感染H 细胞 (7 5 )的作用。未见其对RF株有中和活性，可以认为0．5p可识别株特异性中和活性中的 Il3 维普资讯 http://www.cqvip.com