附子多糖诱导人早幼粒白血病细胞分化研究

职业卫生与病伤 2003年(第 l8卷)第 2期 附子多糖诱导人早幼粒 白血病细胞分化研究 彭文珍① 吴雄 志⑦ 曾升平④ 陈 丹④ 陈佩钰④ (①四川大学基础医学与法医学院医学分子生物学开放实验室 成都 610041 ②四川大学华西医院人类疾病生物治疗重点实验室 成都 610041 ③成都中医药大学临床医学院 ④四川泸州医学院) 附子为温阳散寒的常用药物，广泛用于包括恶性 肿瘤在内的各种疾病的治疗 ，由于附子大都有毒，因而 限制了其临床应用。一般认为多糖为非细胞毒药物， 具有高效低毒的特点，因此我们从川产附子里提取了 附子多糖，并制备成静脉注射液，开展附子多糖对人早 幼粒白血病细胞株 HL一60诱导分化的研究，为临床 应用附子治疗恶性肿瘤寻找现代医学的理论依据。 1 材料和方法 1．1 材料 附子多糖注射液由成都中医药大学曾升 平教授提供；全反式维甲酸(ATRA)为 signm公司产品； 硝基四唑氮蓝(NBT)、佛波酯(TAP)、二甲亚砜(DMsO) 购自成都利康设备公司；生理盐水(NS)为四川长征制 药厂产品 ；ATRA以 DMSO配制成浓度 为 30mg／L的储 存液，使 用前 用 RPMI1640培养 液 稀 释 至终 浓 度 0．3rag／L；NBT先用 DMSO助溶后用 Ns配制成0．1％浓 度；鼠抗人 CDllb荧光抗体以及 鼠抗人髓过氧化物酶 (MPO)与碱性磷酸酶(NAP)单克隆抗体均为 pharmin． gen公司产 品 ；RPMI1540培养基 为 GIBCO—BRL公 司 产品；新生小牛血清为成都哈里生物工程有限公司产 品；HL一60细胞株引 自四川大学华西医院肿瘤研究 所[1·2I。 1．2 方法 细胞培养 ：将 HL一60细胞培养于含 10％ 新生小牛血清(56~C、灭活 30min)的 RPMI1640培养基 中，于 37℃、体积为 5％c02、饱和湿度的恒温孵箱中培 养⋯。分别用含附子多糖 10me／L、100mg／L、1舄／L、A— TRA0．3mg／L与等容积 NS的 PRMI1640培养基培养 5d 后收集细胞。细胞形态学观察：取药物作用后各组细 胞悬液离心涂片，瑞氏染色，油镜下随机计数 200个细 胞 ，分别求出早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞、杆 状核及分叶核细胞百分率。NBT还原试验：取药物作 用后各组细胞悬液离心，去上清，加入 0．1％NBT溶液 0．5ml、TAP溶液 20 ，37℃温育 lh后，离心涂片，瑞氏 染色，油镜下随机计数 200个细胞 ，求出阳性细胞百分 率。阳性细胞判断为胞浆内含有蓝黑色颗粒者为 阳性细胞。MPO与 NAP：取药物作用后的 HL一 60细胞约 1×lO6个 ，PBS洗 2次 ，涂 片吹干，进行 MPO 与 NAP免疫化学染色，油镜下随机计数 200个细胞 ， 求出阳性细胞百分率。阳性细胞判断标准为胞浆内含 有红色颗者为阳性细胞。细胞膜分化抗原检测：取药 物作用后的 HL一60细胞约 1×lO6个，PBS洗 2次，分 别用抗 CDllb(MO1)与抗 CD33(My9)荧光抗体标记，流 式细胞仪检测各组细胞荧光强度的变化。 2 结果 2．1 附子多糖对 HL一60细胞形态的影响 附子多糖 作用后的 HL一60细胞分叶核与杆状核细胞增多，晚 幼粒细胞亦增多，早幼粒细胞减少( 1)。 表 1 附子 多糖对 HI,一60细胞 形态 的影响 ①与 Ns组比较 P．北京：人民卫生出版社，1993．106 4 ‘神农本草经>．太原：山西科学技术出版社 ，1991．94 5 明 ．李时珍 ．本草纲目 ．北京：人民出版社 ．1957．729 头孢噻肟钠治疗／JxJL急性细菌性痢疾疗效分析 王平康 刘玲玲 (四川省简阳市人民医院儿科 64140o) 1998年6月 一20O2年 4月我科用头孢噻肟钠 治疗小儿急 性细菌性痢疾 25例，并 以25例氨苄青霉素加丁胺卡那霉素治 疗作为对照 ．现

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如下。 1 资料与结果 1．1 临床 资料 5O例息儿 ，男 29例，女 21例。年龄 3月 一12 岁 ，其中3月 一6岁 44例。发热 49例，腹泻每日平均 >5次，以 1O一20次居多，大便均为脓血便或粘冻便。5O例均为急性起 病 ，到我院就诊时间均在起病 5d内，既往无反复发作菌痢史。 实验室检查：周围血象 WBC>10．0×1o9／L48例，大便镜检 WBC >+／HP 50例 ，RBC+一++ ++／HP 49例，均见吞 噬细胞。 大便培养福氏志贺氏菌阳性 47例，宋内氏志贺氏菌阳性 3例。 5O例均做药物敏感试验 ，其敏感率分别为头孢噻肟钠 100％(敏 感／中敏／耐药：50／0／0)；先锋霉素 5号 85％(敏感／中敏／耐药： 44／3／3)；丁胺卡那霉素 4％(敏感／中敏／耐药 ：2／44／4)；其它如 庆大霉素、氨苄青霉素、氟哌酸、四环素、痢特灵、SMZCO敏感率 为 0，其中氟哌酸、痢特灵中敏占多数 ，其余药物多耐药。 1．2 结果 5O例息儿随机分成治疗组和对照组，两组年龄 、性 别 、病情程度无明显差别。治疗组用国产头孢噻肟钠 100mr／ kg／d分 2次静注；对照组用氨苄青霉素 1(30—150me／kg／d，丁胺 卡那霉素 10me／kg／d均分 2次静注。治愈标准：体温正常。腹泻 停止 ，大便成形，镜检正常 ，每 日大便培养连续 3次阴性。治疗 结果见表。 · 124 · 表 两组临床疗效结果比较 2 讨 论 随着时代的变迁 ，痢疾杆菌的菌群分布常有变异，其药物 敏感性亦发生了很大的变化。既往传统用药的耐药率有所上 升。在 60年代菌痢敏感药为土霉素、四环素、氯霉素 ，7O年代 为磺胺药，8o年代为喹诺酮类 ，9o年代喹诺酮类也出现了耐药 性且不宜用于儿科。治疗急性细菌性痢疾应选择合适抗生素， 本文报告头孢噻肟钠治疗小儿急性细菌性痢疾 25例，疗效甚 佳。与对照组比较 ，退热天数、止泻天数、大便培养转阴天数及 治愈天数 ，两组经统计学处理，P均 <0．01，有非常显著意义。 头孢噻肟钠对革兰氏阴性杆菌有强大的杀菌效应 ，对内酰胺酶 高度稳定 ，能有效抑制痢疾杆菌细胞壁的合成 ，作用迅速，疗效 明显高于一般抗生素，其对痢疾杆菌的药物敏感率为 100％。目 前国产头孢噻肟钠价格适中，毒副作用小，经临床观察安全有 效，可为治疗菌痢的首选 良药。 T⋯一 一1酉¨ 习瞪 硼嘲n 维普资讯 http://www.cqvip.com