CIK治疗乙型肝炎研究进展

CIK治疗乙型肝炎研究进展　　【摘要】近年来，细胞治疗已成为临床治疗乙型病毒性肝炎(乙型肝炎)的一种重要手段，细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)作为一种新型、高效、广谱的免疫活性细胞，在乙型肝炎治疗中得到广泛应用。本文就CIK的生物学特性、制备和临床应用做一综述。　　【关键词】杀伤细胞;细胞因子诱导;乙型病毒性肝炎　　我国属乙型肝炎高地方性流行区，每年死于肝硬化和肝癌等乙型肝炎相关疾病者达30余万例。乙型肝炎已成为严重危害我国人民健康的重要因素。目前对乙型肝炎的治疗缺少有效手段。最有效的是应用干扰素、拉米夫定等药物抗病毒治疗，但其治疗反应率不高，效果并不理想。细胞免疫治疗由于其安全、不良反应少、抗病毒活性高、增强机体免疫等特点成为治疗乙型肝炎的又一手段[1]。　　细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkillers，CIK)是外周血单个核细胞经多种细胞因子刺激产生的一群异质细胞，兼有T细胞强大的抗病毒活性与自然杀伤细胞(NK细胞)的非主要组织相容性复合物(MHC)限制性免疫杀瘤和抗病毒特点[2]。CIK还能分泌多种细胞因子，提高机体的免疫能力，增强抗病毒能力，在细胞治疗中前景越来越广阔。本文就近年来在CIK治疗乙型肝炎方面的相关研究作简要综述。　　1、CIK细胞的生物学特性　　CIK细胞是人外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子如干扰素(IFN)、CD3单抗和白细胞介素-2(IL-2)等刺激后生成的一群异质细胞。Kim等[3]研究显示，外周血CIK细胞含量很少，细胞因子IL-2可促进其增殖。流式细胞仪检测CIK高达CD3CD8和CD3CD56，提示其具有T细胞的功能又具有NK细胞的功能。杀伤活性试验显示[4]，CIK能对多种肿瘤细胞如人红白血病细胞株K562、肝癌细胞株HepG2和人肺癌细胞株A549等起到杀伤作用。目前已有大量临床研究报道CIK应用于肿瘤治疗[5，6]。　　2、CIK细胞的制备和扩增培养　　CIK细胞来源于外周血单个核细胞，常规培养方法是应用IFN-γ、CD3单抗和IL-2刺激使其大量增殖，IFN-γ能增加CIK的细胞毒活性，CD3单抗和IL-2能使T细胞活化并增殖。乔林邦等[7]在常规培养中加入重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)可抑制CD3+CD4+T细胞，增加CD3+CD56+T细胞生成。刘军权等[8]在常规培养中加入CD28mAb、IL-15和IL-21，结果显示在CIK细胞培养体系中增加CD28mAb、IL-15和IL-21，细胞增殖能力增加，细胞分泌IFN-Y量显著增高，经不同刺激因子活化的CIK细胞对A549、MFC-7和HMEl细胞杀伤活性有明显增强。徐本玲等[9]在常规培养中加入重组人纤维连接蛋白(RetroNectin，RN)结果显示用RN诱导的CIK细胞增殖速度快，杀伤肿瘤细胞活性高，细胞因子IFN-γ和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量增多，在无血清培养条件下可在短期内诱导出大量的具有生物学活性的CIK细胞。　　3、CIK细胞应用于治疗乙型肝炎的临床应用　　目前细胞免疫治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染已取得一定的疗效。韩际奥等[10]对95例慢性乙型肝炎(CHB)患者随机分组，自体静脉回输DC/CIK，患者治疗后3、6个月时病毒载量显著下降，治疗后1个月后，患者血清IL-12水平显著高，提示细胞治疗对HBV有一定的抑制作用。苏海滨等[11]研究显示，应用CIK细胞治疗慢性乙型肝炎患者，随访52周后HBV-DNA显著下降。陈作严等[12]将50例慢性乙肝患者随机分成两组。治疗组30例，接受CIK细胞治疗一个疗程，回输细胞数为(1.0～3.2)×1010，对照组采用常规药物治疗。结果显示30例治疗组患者经CIK治疗后，CD3+、CD4+、CD8+的表达和细胞增殖倍数均明显增加。在近期的疗效观察中，乙肝患者血清中HBV-DNA含量明显下降，完全应答率>50%。陈宛丽等[13]应用CIK细胞治疗慢性乙型肝炎，CIK组12例和对照干扰素组21例，疗程结束6个月后，患者的谷丙转氨酶(ALT)及HBV-DNA复常率、HBeAg转阴率及HBeAb阳转率均高于干扰素治疗组患者。陈剑等[14]收集72例肝郁脾虚型HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者，其中42例为CIK细胞治疗组，30例为口服恩替卡韦(ETV)对照组，研究表明CIK细胞治疗肝郁脾虚型慢性乙型肝炎患者在24周内是安全有效的，其抑制HBV-DNA作用较服恩替卡韦差，但改善肝功能的作用与恩替卡韦相当，且HBeAg阴转率及血清转换率明显优于对照组。韩际奥等[15]HBsAg致敏的DC-CIK具有较好抗病毒治疗效果，治疗结束24周后患者病毒学应答总有效率可达63.6%，其中4例HBV-DNA转阴，转阴率12.1%。同时治疗后慢性乙型肝炎患者HBsAg浓度及ALT水平亦有所下降。　　综上所述，CIK治疗乙型肝炎能够增加患者的免疫功能，提高抗病毒能力，是治疗乙型肝炎感染的又一重要手段。　　4、存在的问题与展望　　虽然目前有关CIK细胞应用于治疗乙型肝炎研究结果令人鼓舞，但在很多问题上仍然还存在颇多争议，还有许多问题需要解决。如CIK培养用何种培养基、细胞移植数量、移植途径、移植时机、安全性以及不良反应症等仍需要进一步研究证实。　　综上所述，急需建立CIK的细胞治疗化来解决这些问题，相信随着研究的深入，CIK细胞治疗标准化方案的建立、CIK在细胞治疗的应用前景会越来越广阔。　　：　　[1]MichelML，DengQ，Mancini-BourgineM.Therapeuticvaccinesandimmune-basedtherapiesforthetreatmentchronichepatitisB：perspectivesandcha11enges.Hepatol，2011，54(6)：1286-1296.　　[2]Schmidt-WolfIG，NegrinRS，KiemHP，etal.UseofaSCIDmouse/humanlymphomamodeltoevaluatecytokine―inducedkillercellswithpotentantitumorcellactivity.ExpMed，1991，174(1)：139-149.　　[3]KimHM，LimJ，ParkSK，etal.Antitumoractivityofcytokineinducedkillerceilsagainsthumanlungcancer.IntImmunopharmacol，2007，7(13)：1802.　　[4]李新灵，王志爽，邵晓枫，等.CIK细胞体外诱导培养及对不同肿瘤细胞株的细胞毒作用.天津医药，2013，41(8)：759-761.　　[5]杨莉莉，曹水，李慧，等.DC+CIK联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效评价.中国肿瘤临床，2009，36(17)：969-979.　　[6]赵和泰，李丁，李江涛，等.DC-CIK细胞治疗中晚期恶性肿瘤的临床疗效.肿瘤药学，2012，2(1)：54-56.　　[7]乔林邦，张永喜，白雪，等.不同细胞制备方法对CIK细胞亚群比例的影响.江苏医药，2013，39(7)：783-784.　　[8]刘军权，朱云，陈复兴，等.不同刺激因子对人CIK细胞功能影响.中国实验血液学杂志，2013，21(4)：1021-1026.　　[9]徐本玲，袁龙，高全立，等.重组人纤维连接蛋白对无血清培养的CIK细胞增殖及对K562细胞杀伤活性的影响.西安交通大学学报(医学版)，2012，33(1)：24-28.　　[10]韩际奥，杨丽，王志凌，等.慢性乙型肝炎患者DC/CIK体外经HBsAg活化后自体回输的疗效和对机体免疫的影响.中华实验和临床感染病杂志，2013，7(3)：55-58.　　[11]苏海滨，李捍卫，赵洪兰，等.自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗HBV感染肝硬变患者的临床疗效分析.中华实验和临床病毒学杂志，2007，21(1)：64-66.　　[12]陈作严，黄俭.自身CIK细胞治疗乙肝的临床观察.中国医药指南，2008，6(3)：25-26.　　[13]陈宛丽，杨莹，张威，等.CIK细胞治疗慢性乙型肝炎的临床疗效观察.中国现代药物应用，2012，6(14)：45-46.　　[14]陈剑，王少扬，王贤，等.自体CIK细胞治疗肝郁脾虚型慢性乙型肝炎疗效观察.中西医结合肝病杂志，2014，24(1)：31-32.　　[15]韩际奥，马应杰，王志凌，等.DC-CIK治疗慢性乙型肝炎患者疗效观察.肝脏，2013，18(10)：677-679.