火龙果溃疡病的症状观察和病原菌鉴

火龙果溃疡病的症状观察和病原菌鉴 DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.2013.05.008果树学报2013，30（5）:854～856JournalofFruitScience 火龙果溃疡病的症状观察和病原菌鉴定 张荣1，刘爱媛1*，白成艳1，刘成明1，罗笑容2，姜 3峰3，梁瑞伟2，郑红莉1（1华南农业大学园艺学院，广州510642；2清远市大丰果业有限公司，广东清远511500；华南农业大学发展规划处，广州510642） 摘要:【目的】2012年广东省清远市火龙果种植区爆发一种病害，株发病率高达60%，对火龙果茎和果实造成极大危害，为识别和控制该病害的发生，进行了该项研究。【方法】采用常规植物病理学方法观察病害症状，鉴定病害的病原菌。【结果】发病初期，受侵染的肉质茎和果实出现圆形凹陷褪绿病斑，病斑逐渐变成橘黄色；发病后期，受侵染部位呈灰白色突起，产生黑色分生孢子器，病斑直径可扩展到0.5cm。从病组织中分离出的病原菌，在PDA培养基上生长的菌落由白色逐渐转为黑绿色，产生具0~2个隔膜的节孢子，节孢子无色到浅褐色，杆状、柱状或腰鼓状；节孢子细胞壁加厚，形成深褐色，球形厚垣孢子；在马尾松（Casuarinaequisetifolia）水琼脂培养基中，可产生黑色分生孢子器，分生孢子器遇水喷射出分生孢子，产孢细胞无色桶形，分生孢子卵圆形，无色单孢，大小（13.31±1.42）μm×（5.4±0.35）μm。【结论】经鉴定该病原菌为Neoscytalidiumdimidiatum，导致火龙果肉质茎和果实溃疡。 关键词:火龙果；溃疡病；Neoscytalidiumdimidiatum 中图分类号：S667．9文献标志码：A文章编号：1009－9980(2013)05－0854－03 Symptomobservationandpathogenidentificationoncankerdiseaseofpitaya ZHANGRong1，LIUAi-yuan1*，BAICheng-yan1，LIUCheng-ming1，LUOXiao-rong2，JIANGFeng3，LIANGRui-wei2，ZHENGHong-li1 (1CollegeofHorticulture，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou，Guangdong510642；2QingyuanDafengFruitIndustryCo.，Ltd，Qingyuan，Guangdong511500；3OfficeofDevelopmentandPlanning，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou，Guangdong510642)Abstract:【Objective】CankerdiseaseofpitayaexpandedquicklyinmostcommercialplantingareasofQingyuancityinGuangdong，whereincidencerateofthediseasereachedashighas60%in2012.Theobjectiveofthestudywastoidentifyandcontrolthedisease.【Method】Thesymptomsweredescribed，thepathogenwasidentifiedbyusingphytopathologicalresearchmethods.【Result】Theresultsshowedthatsymptomsonthestemandfruitweresmall，circular，sunken，chloroticspotsatearlyinfectionandthendevelopedintocankers.Inlateinfectionperiod，blackpycnidiawereerumpentfromthesurfaceofthecankers.Diseasespotsenlargedastheymaturedtoamaximumof0.5cmindiameter.Colonychangesfromwhite，sparse，radialexpansiontoblack-greenwithlongandsparseaerialmyceliumonPDA.Hyphaedisarticulatedintocylindrical-truncate，oblong-obtusetodolioform，0-to-2-septatearthrospores，whichdevelopedfromhyalinetobrown.Brownandglobosechlamydosporeswereproduced.Subconicalandblackpycnidiawereinducedbyculturingonsterilehorsetailtree(Casuarinaequisetifolia)leaves.Conidiogenouscellsweredolioform.Conidia(13.31±1.42μm×5.4±0.35μm)ejectedfrompycnidiuminwaterdropletswereone-celled，hyaline，andovate.【Conclusion】Thepathogencausingcankerdiseaseofpitayawasi-dentifiedasNeoscytalidiumdimidiatumbasedonpathogenicityandmorphologicalobservation. Keywords:Pitaya；Canker；Neoscytalidiumdimidiatum 火龙果（Hylocereusspp.）原产墨西哥、中美洲和 收稿日期：2013－03－25接受日期:2013－06－05南美洲[1]，它集水果、花卉、蔬菜、保健为一体，有很高 作者简介：张荣，女，实验师，博士，研究方向为果树病害。Tel:020-85288255，E-mail:r-zhang@scau.edu.cn觹通讯作者Authorforcorrespondence．Tel:020-85288255，E-mail:liuay@scau.edu.cn 5期张荣等:火龙果溃疡病的症状观察和病原菌鉴定855的经济价值。在马来西亚、泰国、越南、菲律宾、以色 列、美国、日本、澳大利亚等国家已成为重要的经济 作物[2]。1624年，荷兰人从中美洲将火龙果引种至我 国台湾省[3]，直至20世纪90年代初，大陆由台湾省 引进试种，90年代中后期陆续在广东、广西、贵州、 福建等省区种植[4]，逐渐成为种植者创收的经济作物 之一。 目前由于大面积引种，火龙果种植区病害发生 日趋严重，在火龙果上已记载发生的病害有17种， 如炭疽病（Collectotrichumgloeosporioides）、枯萎病 （Fusariumoxysporium）、黑斑病（Alternariasp.）、茎枯 病（Ascochytasp.）、茎斑病（Botryosphaeriadothidea）、 果腐病（Bipolariscactivora）、溃疡病（Neoscytalidium松水琼脂培养基中，于25℃的近紫外灯下培养，诱导产孢结构和分生孢子，同时在显微镜下观察病原菌各种孢子形态，并选取30个分生孢子和厚垣孢子，于400倍下测量其大小[11]。22.1结果与病害症状病害从火龙果抽生嫩芽到开花结果期间均可发生，发病始于幼嫩的茎部，发病初期茎上出现圆形凹陷褪绿病斑（图版-a），病斑逐渐变成橘黄色，严重时整条肉质茎上密密麻麻布满了病斑（图版-b）；发病后期受侵染部位呈灰白色突起，形成溃疡斑，其上产生黑色分生孢子器，病斑直径可扩展到0.5cm（图 版-c），严重时茎部完全腐烂（图版-d）。取发病后期 腐烂部位进行镜检观察，发现与炭疽菌和镰刀菌形 成共同侵染，导致肉质茎软腐（图版-e）。 果实受侵染，在发病初期，果实的鳞片和果实 表面出现圆形凹陷褪绿病斑（图版-f），病斑逐渐变 成橘黄色（图版-g，h），随着果实成熟黄色病斑突 起，呈灰白色，形成溃疡斑，其上着生分生孢子器 （图版-i）。dimidiatum）、软腐病（Enterobactercloacae），病毒病（CactusvirusX）等[5-9]。然而，2012年春夏，我国南方降雨较多，日照偏少，广东省火龙果种植区大面积爆发一种未知病害，在清远种植区株发病率高达60%。为了更好的识别和防治该病害，我们详细描述了病害的症状表现，对其病原菌进行了分离鉴定。以期引起种植者重视，便于识别和控制该病害的发生。 1 1.1材料和方法病害调查及症状观察2.2病原菌分离与培养性状通过组织分离，得到1个菌株。该菌株在PDA平板上培养4d后，菌丝白色稀疏，辐射状扩展（图 版-j）；培养6d后，菌落转为灰绿色（图版-k）；培养2012年4—12月，在广东清远火龙果园对火龙 果病害的发生情况进行调查。采集具有典型特征的 火龙果肉质茎，观察并记录病害症状。10d后，菌落逐渐变成黑绿色，贴近培养基的菌丝致密，气生菌丝长而稀疏（图版-l）。 2.3病原菌的致病力 将此菌株的孢子悬浮液喷到盆栽苗的嫩茎上，51.2病原菌的分离培养在病斑的病健交界处切取大小为5mm×5mm 的组织块，采用组织分离法进行病原物的分离培养， 通过单孢分离得到纯培养物。置4℃冰箱中保存备 用[10]。d后观察到圆形褪绿病斑（图版-m），3个月后即9月1日病斑突起或呈干腐状（图版-n，o），9月10日观察到受侵染部位与其他菌复合侵染呈软腐状（图 版-p）。从发病的茎上可再分离到原病菌。喷清水的 对照未见发病（图版-q），且未分离到病原菌。人工接 种的发病症状与田间相同，由此进一步确定其对火 龙果的致病性。将接种的离体嫩茎置于34℃的人工 培养箱中，24h后即可观察到病斑，可见此病害在高 温高湿的环境中发病只需24h。1.3病原菌致病性测定根据柯赫氏法则，将纯化的菌株配成浓度为1×104个·mL-1的孢子悬浮液，喷雾接种到健康的火龙果盆栽苗上，以茎部布满小水珠但不下滴为宜，保湿24h后，室温（24~31.8℃）下正常管理，待植株发病后，观察症状，再次分离培养病原菌。以清水接种作 为对照。2.4 将病原菌移接于PDA培病原菌形态学鉴定病原菌有3种类型的孢子，分别是节孢子1.41.4.1病原菌鉴定病原菌形态观察（arthrospore）、厚垣孢子（chlamydospore）和分生孢子 （conidia）。在PDA培养基上，初生菌丝为无色，成熟 后变成褐色；在马尾松水琼脂和PDA培养基上，菌 丝断裂成节孢子链（图版-r），产生具0~2个隔膜的养基平板上，28℃培养4~10d后，记录菌落形态及颜色。1.4.2病原菌分生孢子诱导将病原菌接种到马尾 856果树学报30卷节孢子，节孢子无色到浅褐色，形态多样，杆状，柱状或腰鼓状（图版-s），节孢子细胞壁加厚，形成厚垣孢子，深褐色，球形，大小5.48±1.40μm×5.16±1.25μm（图版-t）。在马尾松水琼脂培养基上，产生分生孢子器，黑色（图版-u），分生孢子器遇水喷射出分生孢子；产孢细胞桶形，无色（图版-v），分生孢子单生在产孢细胞顶端（图版-w），无色单孢，卵圆形，大小4结论火龙果溃疡病是我国大陆火龙果产区发生的一种新病害。根据症状表现和试验结果，查阅相关文献，将该病害病原菌鉴定为Neoscytalidiumdimidia-tum，并首次明确了Neoscytalidiumdimidiatum对我国大陆火龙果茎部和果实均造成危害。（本文图版见 插2） 参考文献References: [1]http://en.wikipedia.org/wiki/Pitaya [2]MASYAHITM，SIJAMK，AWANGY，SATARMGM.Firstreport occurrenceofanthracnosecausedbyColletotrichumgloeosporioides（Penz.）Penz.&Sacc.ondragonfruit（Hylocereusspp.）inPenin-sularMalaysia[J].AmericanJournalofAppliedSciences，2009，6（5）:902-912. 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