两种不同离心方法对脐血单个核细胞回收率的影响

两种不同离心方法对脐血单个核细胞回收率的影响 作者：罗伟琼　李沈容　邹翠贤　罗小珍　朱美玲 【关键词】 脐血 　　【摘要】 目的 探讨不同离心条件下对脐血造血细胞回收率的影响。方法 运用6%羟乙基淀粉（HES）沉降，二次离心法可离心脐血浓缩单个核细胞（MNC），此法具有不受标本体积大小的影响、无细菌污染的优点。结果 通过分析两种离心方法发现制备MNC时，离心力与MNC回收率有密切关系。结论 加大离心力可增加MNC的回收率。 　　【关键词】 脐血;造血细胞/单个核细胞;离心法;回收率 　　【Abstract】 Objective To investigate the effect of different centrifugal methods on returns-ratio of Mononuclear cell（MNC） in umbilical cord blood.Methods After sedimentated with 6% hydroxyethyl starch（HES）,two centrifugating processes was employed to separate and concentrate MNC,which was not affected by specimen volume and not polluted by bacterium.Results There was significant relationship between different centrifugal force and recovery rate of MNC.Conclusion Recovery rate of MNC will increase by increasing centrifugal force. 　　【Key words】 fetal blood;mononuclear cell;centrifugation;retrieving rate 　　造血干细胞移植（HSCT）已经成为迄今为止医治各种恶性血液病、肿瘤、遗传性疾病、重度放射病及重症联合免疫缺陷等顽症的最有效方法之一［1,2］，而采用脐血替代骨髓及外周血进行HSCT已成为近10年来HSCT领域的最重大进展之一［2,3］。最初的脐血HSCT使用的均为未经分离的全血，这种全脐血移植虽然能减少造血干/祖细胞的损耗，但因含有大量的红细胞等成熟血细胞，不但给冷冻保存带来困难，同时还可能会给移植病人造成严重的不良后果。因此，对脐血库来讲，高效快速分离脐血造血细胞,对单个核细胞（MNC）进行分离浓缩,最大限度地降低其终体积显得尤为重要。这不仅涉及到尽量减低造血细胞的丢失问，而且还牵涉到降低脐血库库容的成本问题。所以，探索出一种行之有效理想的分离方法就成了该领域研究的热点。为此，笔者做了一些探索，现如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 6%羟乙基淀粉（HES）购自美国Dupontpharma公司;无菌、无热源，含有ACD保养液三联采血袋（长春泰尔茂医用器具公司）;落地式低温离心机（SORVALL-PC3C plus）;血细胞计数仪：2%冰醋酸结晶紫染色，计数有核细胞数。 　　1.2 MNC的制备方法 　　1.2.1 脐血来源 40份脐血均无菌，采自深圳市宝安区西乡人民医院妇产科，均为足月产，胎儿无窒息。供者均为身体健康、发育良好的非高龄产妇。 　　1.2.2 分离提取 将采集的脐血留样1ml用计数仪将MNC计数。参照纽约脐血库操作规程［4］按6%HES∶脐血=1∶5的比例加入，并充分混匀10min,两次离心法。第一种方法以10℃ 430r/min离心6min做第一次离心；第二种方法以10℃ 460r/min离心6min做第一次离心；利用三联袋将上层富含MNC的血浆及少许RBC移入转移袋内，去除剩余的RBC，再次以10℃ 1300r/min离心12min。去除上层血浆获得脐血有核细胞悬液18~22ml，留样1ml计数MNC。 　　2 结果 　　两种离心转速与离心时间见表1；两种离心方法制备MNC获得率的比较见表2。 表1－表2 （略） 　　3 讨论 　　脐血与骨髓及外周血相比有诸多优点［5~7］：富含更原始的造血细胞，增殖能力强；可进行HLA 1~3个抗原不合的同胞或无关者的移植；单份脐血中的造血细胞量可满足65%的儿童（