银黄颗粒微生物检查方法

银黄颗粒微生物检查方法 　　摘 要：对银黄颗粒进行微生物检查的时候，要注意检查方法的应用，还要考虑银黄颗粒的药理药性，采用限度检查方法。在检查方法建立之后，要对其方法进行验证，根据有代性的接种阳性菌株，然后利用常规法和薄膜过滤法验证，还可以采用稀释法验证。其中，常规法的利用能达到一些效果，在金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌以及大肠杆菌这些菌株的回收率上都超过了七层，而在白色念珠菌以及枯草杆菌的回收率上都在七层以下，对控制菌进行检查的时候也可以利用常规法，它是比较常用的一种检查方法。本文分析了银黄颗粒微生物实用的检查方法。 　　关键词：银黄颗粒;检查;微生物 　　银黄颗粒是一种中成药剂，其中含有的复合制剂是有很多种成分的，而且这里面的每一种成分都成起到抑菌的作用，在进行微生物的限度检查时这些成分也都会对检查准确性有一定的影响。银黄颗粒的主要功效是清热、消炎和解毒，在很多临床医疗和日常实用上都会应用这一药剂。在对银黄颗粒进行微生物的心腹检查时，首先要确定检查的方法，然后再验证检查方法，这样做主要是证明这个检查方法对于药品的酵母菌数、霉菌等的测定检查和控制菌的检查能不能适用。结合权威的检查提示，在对银黄颗粒进行微生物检查的时候可以采用的方法并不是只有一种，下面详细介绍一下。 　　一、仪器和材料 　　1.1 在选择仪器的时候，要依据各项检查来定，在我国通常都会选择特定厂家生产的仪器，例如HTY-III型的智能集菌仪，这个仪器能很准确检查出相关的数据，有很大的实用价值。 　　1.2 在选择检查药品上面，也有一定的要求，这里选择的是每袋4g规格的银黄颗粒。 　　1.3 培养基的选择，针对不同的参数的检查，选用的培养基也有不同，通常都是胆盐乳培养基、营养肉汤培养基等等。 　　1.4 菌种的选择，主要有大肠埃希氏菌、黑曲霉、金黄色葡萄球菌等。 　　二、方法验证 　　2.1 菌液制备 　　在选取菌液的时候，要选择1ml的大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的肉汤液体、金黄色葡萄球菌，在温度为34℃的条件下进行培养，培养的时间要在18小时到24小时之间，培养完成后还要在这些液体中加入0.9%氯化钠溶液，加入的容量大约为9ml，再进行10倍的稀释，达到10-5到10-7左右，用于备用。下一步要选取1ml的白色念珠菌霉菌液体，在唯独为24℃的条件下进行培养，这个培养的时间也要控制在18小时到24小时之间，培养完成后再在这些液体中加入0.9%氯化钠溶液，加入的容量大约为9ml，再进行10倍的稀释，达到10-5留于备用。最后，还要选取黑曲霉菌斜面物，选取的是要经过一周的培养之后的霉菌，然后在其中加入3ml的0.9%氯化钠溶液，将孢子给洗下去，然后将其转移到另一个空管中，进行标准比浊，这一步完成之后，再选取1ml的黑曲霉菌，将其放在0.9%氯化钠溶液中进行10倍稀释，达到10-4的标准，留于备用。 　　2.2 检验菌液 　　在菌液制备的过程中，对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌，还有大肠埃希菌都进行了稀释，现将这些溶液的的10-5到10-7之间的稀释液分别取出1ml，然后将它们放置在营养琼脂培养基中进行测定，对于这一培养基的温度要求为45℃，选取的容量为20ml，这些要求都达到之后在注皿中进行平行测定，要对两个皿都测定，在温度上的要求为30℃到35℃之间，培养的时间应该在48h左右，应约为50cfu到100cfu之间。然后再选取之前稀释过的白色念珠菌稀释液，标准在10-5到10-6之间，还要选取之前稀释国的黑曲霉菌孢子悬液，标准在10-4左右，这两种液体都选取1ml就可以，然后将它们放置在虎红琼脂培养基的注皿中进行测定，温度要控制在45℃左右，培养基容量要求是20ml，然后对两个注皿进行平行测定，完成后在进行培养，温度上的要求为23℃到28℃之间，并每天你都对其进行观察，大概要达到50cfu到100cfu这个标准。 　　2.3 供试液制备 　　取样品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100mL，混匀，作为1∶10的供试液。 　　2.4 回收率测定 　　2.4.1 细菌数霉菌数的常规法测定。首先进行试验，选取1ml的供试液，含量比例在1：10左右，然后将50cfu到100cfu的试验菌也一起添加到平皿中，紧接着就要将琼脂培养基导入里面，等到其凝固之后，将其放到规定的培养温度中进行培养，培养时间要在24小时到72小时之间，每天都要仔细观察结果。其次进行菌液测定，对每一个实验菌株都进行测定。供试品对照组：取1∶10供试液1mL加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24～72h逐日观察结果，测定供试品本底菌数。 　　2.4.2 细菌数霉菌数稀释法测：①试验组：取1∶10供试液0.2mL/皿、50～ 100cfu试验菌同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24～ 72h逐日观察结果。②菌液组：测定每一菌株所加的试验菌数。供试品对照组：取1∶10供试液0.2mL加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24～72h逐日观察结果，测定供试品本底菌数。 　　2.4.3 霉菌数薄膜过滤法测定。取1∶10的供试液1mL，注入开放式滤器，用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每次100mL共4次留少量缓冲液加1mL(50～100cfu)试验菌混匀，滤干后取出滤膜菌面朝上贴入规定琼脂平板培养基中，置规定温度培养4天并逐日观察。 　　2.5 回收率的计算 　　按如下公式计算试验组的加菌回收率： 　　试验组的加菌回收率=(试验组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数)/菌液组的平均菌落数×100% 　　2.6 控制菌检查方法的验证 　　取1∶10供试液10mL加入100mL胆盐乳糖培养基中，同时加入上述大肠埃希菌液1mL，置35℃培养24h，为试验组;取供试液10mL加入100mL胆盐乳糖培养基，同时加入金黄色葡萄球菌液1mL，置35℃培养24h，作为阴性菌对照组。另取1∶10供试液1mL加入10mL胆盐乳糖发酵培养基中，同时加入上述大肠埃希菌液1mL，置35℃培养24h;取1∶10供试液1mL加入10mL胆盐乳糖发酵培养基中，同时加入金黄色葡萄糖球菌液1mL，置35℃培养24h。 　　三、结果 　　从上述的检验结果可以看出：该供试品接种5株阳性试验菌株，常规法对枯草杆菌、白色念珠菌回收率均底于70%，对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉菌回收率均高于70%;稀释法对枯草杆菌回收率均高于70%;薄膜过滤法对白色念珠菌回收率高于70%。 　　四、讨论 　　银黄颗粒首先采用常规法进行验证，枯草杆菌、白色念珠菌回收率均底于70%，该样品具有抑菌活性，第二步采用稀释法进行测定，枯草杆菌回收率高于70%，而白色念珠菌回收率仍低于70%，第三步采用薄膜过滤法冲洗量为400mL/筒进行测定，白色念珠菌回收率高于70%，控制菌大肠埃希菌采用常规法进行检查。从而确定建立了银黄颗粒微生物限度检查方法细菌数需采用稀释法进行测定，霉菌数、酵母菌需采用薄膜过滤法冲洗量为400mL/筒进行测定;控制菌大肠埃希菌采用常规法进行检查。 　　五、结束语 　　在对银黄颗粒进行微生物检查的时候，采用科学的方法是非常重要的，在检查的过程中要注意各个菌液的稀释和试验，只要在试验成功之后才能进行检查，这样能减少误差，也能保证检查的准确性。 　　： 　　[1]解翠珠.银黄颗粒微生物检查方法学验证[J].海峡药学，2007.