Rta蛋白与鼻咽癌

鼻咽癌肿瘤标志物Rta-IgG在临床检验中的应用 谢小兵 245026207@qq.com 解决六个问题 1. 2. 3. 4. 5. 6.Rta是鼻咽癌特异性肿瘤标志物的科学依据？检测鼻咽癌灵敏度和特异性的临床证据？Rta与其他EBV标志物联检的好处？为什么要做鼻咽癌筛查？Rta抗体阳性怎么办？Rta定量检测的临床意义？ •一、Rta是鼻咽癌特异性肿瘤标志物 基础研究的几件大事 •20世纪70年代曾毅博士与法国巴斯德病毒研究院合作，首创使用细胞免疫酶法检测血清EBV衣壳抗原（CA，capsid antigen）抗体IgA，证明病毒活跃复制，间接推断鼻咽癌。 •1984年Baer在《Nature》杂志发表了EBV基因组序列，为阐明EBV和鼻咽癌发生的关系奠定了基础。Zalani等（1996）首先发现EBV immediate early gene（立早基因）BRLF1仅在上皮细胞中被激活表达编码蛋白Rta；其后，Yoshizaki等（吉崎, 1999）证明了编码蛋白Rta是诱导鼻咽癌上皮细胞分裂癌变的元凶。为研究鼻咽癌标志物奠定了基础。 基础研究的几件大事 •中国旅美科学家胡怀忠博士及其团队首先证明检测血液中Rta抗体能特异性地检测出鼻咽癌（2000, 2001）。 •同昕“站在科学巨人的肩膀上”，将Rta的研究成果在中国实现产业化，研制出独家专利产品Rta-IgG抗体ELISA法检测试剂盒，2009年获得CFDA产品注册证，成为首个被药监局批准在书上写明可用于 “鼻咽癌辅助诊断及相应临床管理”的产品。 EB病毒感染 •1964年Epstein\Achong\Barr在《The Lancet》报告发现于非洲的一种新的非常小的γ疱疹病毒，命名为Epstein-Barr Virus（EBV）。 •EBV的结构特征：极具粘附力的囊膜，极易合成的衣壳，双链DNA基因组 •唾液传染，全球95％以上的成人携带此病毒，主要侵犯并潜伏在B淋巴细胞内。一旦被激活，EBV基因组呈现两种感染转归(Ganem, 2007; Rickinson and Kieff, 2007) ：–Productive Infection（病毒裂解复制）: DNA extrachromosomal genomes replicate to produce mature progeny viruses, leading to the formation of benign warts. –Non-Productive Infection（致癌因子表达）: DNA integrates into the host genome, it chronically expresses its oncogenic early proteins, fails to replicate, and elicits cancers (Moody and Laimins, 2010). EB病毒基因谱：Rta 蛋白是进入裂解期的启动蛋白Rta has the potential to activate EBV gene expression broadly during infectionFeng & Hu,J General Virol (2000) 81:2417–2423 HuAmon & Farrell,Rev Med Virol (2005) 15:149-156 Guito & Lukac,Frontiers in Microbio (2012) 3:1-21 EBER1, -2 BARF0Latency Lytic CycleLatent GenesBRLF1RtaImmediate Early EAEarly Genes “VCA is a true late gene” CALate Genes by Sun & Miller.Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A. (1998)95:10866–10871 EBV的立即早期裂解基因BRLF1表达编码蛋白Rta Rta •BRLF1基因：1818bp，由Rp启动子启 动，转录成3.3kb的mRNA直接翻译出 Rta蛋白 •Rta蛋白由605个氨基酸组成，分子量大 （66,594 Da）,化学成分复杂，抗原表 位表露，具有很强的抗原性，引发人体 产生相应的免疫球蛋白抗体。Hu, et al.J Gen Virol 2000, 81:2417-23 EB病毒感染:B淋巴细胞宿主 病毒病 病毒裂解复制 B淋巴细胞 鼻咽粘膜上皮 致癌因子表达 BRLF1基因突变 Rta编码蛋白 诱导癌变鼻咽癌上皮感染Nature Review，2004 Rta改变细胞周期，促进细胞癌变的作用 EBV1234 增加P53与P21蛋白表达水平S期诱导协助病毒复制 增加ATF2的磷酸化水平 可能导致细胞膜成分改变 病毒复制关键基因增多Rta启动FAS基因表达态由转隐换性形状成态癌向变裂解状 Epstein-Barr virus immediate-early protein Rta activates 14-3-3 σ expression to regulate cell cycle progression. EBV Rta Enhances Micronucleus Formation, DNA Strand Break and Accelerates M Phase Progression in Human Epithelial Cells •鼻咽部细胞分裂发生癌变时，EB病毒BRLF1基因特异性地表达Rta蛋白，诱发机体产生Rta蛋白抗体，成为检测鼻咽癌的特异性血清学指标( Klein et al, 2007). EB病毒Rta蛋白与鼻咽癌的检测: 科学家胡怀忠的研究 胡怀忠:1994荷兰Utrecht University获博 士学位。后在美国NIH做博士后训练。 证明BRLF1基因在NPC活检组织中 特异性表达，产生具抗原性的Rta蛋白1997年被新加坡国立大学聘为教授，专门从事鼻咽癌分子生物学的研究工作。2006年受聘于美国COVINCE公司任R&D高级研究员。 2005年8月至今，领导“EB病毒Rta蛋白抗体IgG检测试剂盒”的研发工作。 验证NPC患者血液中存在 抗BRLF1产物Rta蛋白的抗体 确认Rta蛋白最强抗原簇部位： R185I+R150I两个多肽片段 BRLF1基因在NPC肿瘤中特异性表达：标志物的明确根据 nasopharynx biopsies • • •用RT–PCR的方法对主要的EBV裂解基因在鼻咽部活检组织（包括肿瘤组织和正常组织）当中的表达情况进行研究，发现在NPC样本和对照样本中BZLF1、BALF2和BCLF1均能检出，而立早基因BRLF1只在NPC肿瘤样本中检测到，在正常组织中未能检出。这一结果说明BRLF1基因编码蛋白Rta是在NPC特异性肿瘤标志物。® (P：阳性对照取自鼻咽癌B95-8细胞系；N：阴性对照，在PCR反应中不加cDNA) 二、检测鼻咽癌灵敏度和特异性 的临床证据 创新产品Rta/IgG引发一系列临床研究 •Rta/IgG试剂盒的问世，引起了新一轮用EB病毒抗原检测鼻咽癌的临床应用研究热潮，除了前述的很多Rta/IgG效果验证的成果发布以外，研究课题在不断地深入扩展，包括Rta/IgG在自然人群中筛查鼻咽癌的前瞻性研究、监测治疗效果和预后判断、与其他靶标联合检测的研究、以及与其他不同的检测方法比较研究， 等等。 Rta/IgG检测鼻咽癌受到两岸三地的广泛关注 2012年海峡两 岸鼻咽癌高峰 会演讲“Rta： 一个新的鼻咽 癌肿瘤标记物 在第八届全国鼻咽癌学术会议上 大会演讲“Rta：鼻咽癌新靶标”参加2011年卫生部早诊早治项目鼻咽癌班，介绍Rta/IgG检测 2013年香港癌症诊断与治疗研讨会，UCLA翟教 授大会发言： Rta - a blockbuster biomarker of the nasopharyngeal carcinoma 各种鼻咽癌会议期间，介绍 Rta/IgG检测的展台受到同行关注 技术人员应用 户要求做 Rta/IgG检测技 术培训 2013年11月澳门卫生局临检中心主办癌症诊断 新趋势讲座，UCLA翟教授主讲：Rta - 鼻咽癌 最新一代標誌物 2012年1月Rta抗体检测列入卫生部临床检验目录中 国家卫生计生委公布 2013版医疗机构临床检验项目目录 再次收录Rta为独立临床检验 新项目（#1122） Rta发明专利成果应用于临床，在国际上首先研制出检 测鼻咽癌的产品：Rta/IgG抗体检测试剂盒 适于高发区大规模筛查 被药监局批准在产品“产品适用范围”一 项里明确标明：“本试剂盒主要用于鼻咽癌的 辅助诊断及相应临床管理” 质量通过欧盟CE认证 生产体系通过ISO13485认证 创新点： 早 - Rta 蛋白是细胞刚刚开始分裂癌 变时表达出的分子靶标，因此检测血 液中Rta抗体IgG，可以在癌肿出现之 前早期作出诊断。 准 -Rta 仅在鼻咽癌细胞中高量表达， 因此对诊断鼻咽癌具有特异性。 三、Rta与其他EBV标志物 联检的好处 全方位覆盖 提高检测灵敏度，特别适于筛查 Rta-IgG联合VCA-IgA提高了高危人群筛查的阳性预测值 收集2010年3 月至2011年10月广西某社区体检的企事业职工的血清共6201份，先用VCA/IgA检测，阳性样品用Rta/IgG检测。 •郭丽萍 等.EB病毒抗体联合检测在筛查鼻咽癌高危人群中的应用价值[J].中国医药指南,2012,10(10):26-27. • Rta-IgG联合VCA-IgA，EA-IgA大大提高了鼻咽癌诊断的灵敏度，特异性 蔡永林等.EB病毒抗体联合检测在鼻咽癌血清学诊断中的价值.南方医科大学学报,2010,30(12):2746-2748. 华南肿瘤学国家重点实验室 中山大学肿瘤防治中心检验科 •中心主任刘万里教授的研究组通过检测 131例治疗前的鼻咽癌患者、52 例非鼻 咽癌的头颈部相似症状病例和148例健 康体检者的血清和血浆评价Rta/IgG、 VCA/IgA、EA/IgA和EBV-DNA四种指 标在诊断鼻咽癌中的临床应用价值。 结论： –四项联合检测灵敏度97.7%，阴性 预测值98.2%。 –EBV-DNA、Rta-IgG抗体对患者临 床分期有重要意义，能很好反映肿 瘤消长，有助于评估鼻咽癌患者病 程和有望成为分期系统的分子指标• 中山医大肿瘤检验科：联合检测EB病毒不同抗体及EB病毒DNA在鼻咽癌血清学诊断中的价值 联合检测结果判读卡 Rta检测与鼻咽癌病理诊断的关系 科学提示：Rta/IgG—鼻咽癌肿瘤标志物与检测EB病毒的抗体有根本概念的不同EB病毒抗体检测 VCA-既往和新近感染标志物 EA-早期抗原 晚期表达 NA1-潜伏感染标志物 鼻咽癌检测Rta/IgG 检测CFDA批准用于鼻咽癌早期辅助诊断 不是所有的EB病毒感染都会引起鼻咽癌鼻咽癌检测不等于EB病毒感染检测 四、为什么要做鼻咽癌筛查？ • •早期诊断、早期治疗：存活率90%以上，无需漫长的放疗化疗，有较好的生活质量鼻咽癌没有特殊症状，误诊率高 鼻咽癌：“中国癌”，发病广• •WHO統計，鼻咽癌病人雖然見於五大洲的許多國家和地區，但鼻咽癌80%發生在中國，，成为“China Cancer”，與食道癌、肝癌、结肠癌等並列中國八大腫瘤之一。　在中国以南方地区高发，威胁人口达四亿之多！尤以广东为最，湖南在哪儿？ 中國鼻咽癌發病率和死亡率的地理分佈圖 湖南是鼻咽癌多发区！ • 2013年04月20日 第八届泛珠区域肿瘤放射治疗学术大会暨肿瘤放射治疗多 中心协作研讨会上，专家认为湖南与广东、广西、福建等南方省份一样，被列入了我国鼻咽癌的多发区。 • •根据湖南省肿瘤医院的数据，从2011年至2012年，该院接诊鼻咽癌人数增长了近两成，排在了所有肿瘤住院人数顺位的第7位。湖南鼻咽癌死亡率为3.44/10万，占全省癌亡构成的6.29％，每年约有两千多人死于鼻咽癌。 • •“湖南之所以鼻咽癌多发，或许与气候环境和我们爱吃腌制食品有关。”大会组委会主席、省肿瘤医院院长刘景诗介绍，还有一种致病因素是EB病毒，而南方人比较容易感染EB病毒，随后鼻咽部的上皮细胞发生病变。省人民医院耳鼻咽喉、头颈外科主任肖旭平教授指出： • • • •患鼻咽癌与不良的饮食和生活习惯密不可分，“湖南人爱吃烟熏和腌制的食物，像腊鱼、腊肉、咸菜、酸菜等，这些食物中都含有大量的致癌物质——亚硝酸盐”。发病也与抽烟、喝酒、环境污染等因素有关。只要及早发现和治疗，鼻咽癌的治疗效果还是比较理想的。鼻咽癌的早期临床表现主要有以下三点：回吸涕中带血；一侧耳鸣耳背；单侧鼻塞。一旦出现这些情况，则应及时到大医院就诊。 解放军第303医院开展鼻咽癌筛查的前瞻性研究宣传 本报记者 王莹/文 赵含章/图 单位名称：解放军第303医院健康体检中心 体检特色：诊断方便快捷 特色项目丰富 EB病毒Rta抗体检测：广西人高发鼻咽癌的“报警器” 　 张利萍表示，因为地域、遗传基因等原因，南方人跟北方人的鼻咽部有所不同。 南方天气炎热，所以南方人鼻道短、鼻孔大，可以有较好的散热功能。 　　“虽然我们没有做过流行病的调查，不能确定广西人容易比北方人出现鼻咽癌，但是从数据上来看，两广人确实容易比北方人易得鼻咽癌。这可能跟两广人的饮食、体质有关。”张利萍表示。 　　因此，针对鼻咽癌的EB病毒Rta抗体检测，可以说是广西人必检的项目之一。研究发现，Rta抗体检测对诊断早期鼻咽癌具有高灵敏度和高特异性，同以往的EB病毒抗体检测相比，准确度更高。 鼻咽癌：誤診率高    鼻咽癌發病部位隱蔽，原發癌往往不大就已經有淋巴結轉移，造成頸部淋巴結腫大，病人常以耳或頸淋巴結腫大為首發症狀而就醫；或者轉移至顱底侵犯腦神經導致劇烈疼痛或口眼歪斜，才去就診，而此刻鼻咽癌本身多半已發展至中晚期，喪失了最佳治療時間。鼻咽癌早期症狀無特點，鼻塞、頭痛、甚至涕血與鼻炎鼻竇炎相似，極易延誤診斷。常誤診頸部腫塊、耳部疾病（而悶、耳鳴、耳塞感、聽力下降）、鼻和鼻竇疾病（涕血、頭痛、面麻、鼻塞）、眼部疾病（複視、視力下降）等。有文獻報告曾鼻咽癌早期被誤診的高達20.45%！更加要強調的是上述誤診患者曾作鼻咽CT檢查報告陰性，過度相信影像檢查結果也是導致延誤診斷的原因！ 鼻咽癌診斷金標準：在鼻咽癌早期，鼻咽部粘膜變化並不明顯，病變局限，通過鼻咽窺鏡剪切下來的組織樣本裡亦有可能沒有採取到癌細胞，所以對於早期鼻咽癌來說，活檢病理檢測也有誤診的風險。 抽血做个Rta-IgG检测可有效避免误诊！ 1.殷海．136例鼻咽癌誤診．齊齊哈爾醫學院學報，2010，31（11）：1723—1724 2.郭翔，向燕群，閔華慶：鼻咽癌的篩查及早診早治研究，中國癌症研究進展，2007，8:401 鼻咽癌肆虐，警鐘長鳴！ 體檢-應主動篩查鼻咽癌 著名電影演員李雪健 2001 年 11 月發現並確診為鼻咽癌，經過综合治療，已經痊癒。 •李雪健：“…久違的話劇舞臺可能還是上不了，因為我的治療留下了一些神經和唾液腺上的後遺症，大段說臺詞很花氣力，簡單點的電視劇什麼的還湊合。” 著名演員“大傻”成奎安2004年由於“突然吐血才發現並確診為鼻咽癌晚期，並於2009年8月27日去世，終年54歲。 前亞洲第一中鋒、香港足球名將尹志強，因鼻咽癌於2010年大年初三去世。終年53歲。 內蒙姑娘張仲培，職業學院07級學生，2008年因為頭疼在被確診為鼻咽癌晚期。2009年剛滿20歲，9月9日因鼻咽癌去世。 • - 中央電視臺《道德觀察》報導 北京姑娘李蕾，1999年6月，就讀首都經貿大學二年級時因“頭疼、牙疼”被誤診為“長智齒”，2000年4月被確證為鼻咽癌晚期骨轉移。 • - 中央電視臺《半邊天》報導 南京航空航天大學本碩連讀的19歲女生楊玉瑩，2010年10月在脖子上發現腫塊卻被誤診一直貼藥膏消炎治療。半年後才被確診為鼻咽癌晚期，氣管被轉移的淋巴結壓迫了一半，呼吸非常困難，已經錯失最佳治療時機 。 • -《揚子晚報》報導 鼻咽癌發病對於個體而言並無概率之分， 有條件的應主動篩查 我们应该给谁做筛查？ 最近，西安交大一附院耳鼻喉科门诊使用Rta-IgG检测出两例阳性，其中一位公务员，男，40岁，没有明显临床症状，活检确诊，现在北京肿瘤医院接受放射治疗。 五、Rta-IgG检测结果阳性怎么办？ 香港鼻咽癌救助基金会发布的检测流程请加关注www.npcancer.org 六、 Rta定量检测的临床意义一个兼具基础和临床意义的重大课题 可以动态监测治疗效果 动态分析用于健康管理 通过量变发现早期癌变 动态监测的工具：Rta-IgG 定量检测试剂盒Rta定量检测试剂盒，会更精确地测出血液中Rta抗体的含量及微小的变化。 2013年4月获证 6个标准品 实际检测OD值可以根据标准曲线直接读取Rta抗体的含量 试剂盒性能优异，批内精密度和批间精密度很高，多次检测CV≤7.3%，优于国际标准（ CV≤15% ） 。 放射治疗与Rta抗体的关系 高黎、徐国镇主编：鼻咽癌， 北大医学出版社，2007 •一个有巨大临床意义的研究课题： 放射治疗对BRLF1 基因表达的影响® Rta/IgG浓度在治疗 过程的变化李军等，肿瘤2013年7 月第33卷第7 期 Rta-IgG定量用于健康管理，实时动态监测Rta-IgG 量的变化，及早发现异常，预警鼻咽癌风险 Rta指标的定量动态监测是 鼻咽癌临床管理的有效手段 Rta指标的定量动态监测可 作为健康管理的要素之一 开展Rta指标检测给临床诊断保驾护航 （提高早诊率、避免误诊） 使用Rta-IgG筛查给广大群众的健康多一份保障为了提高诊治水平，引进使用国际先进产品Rta-IgG是我 们医务工作者的光荣责任！