尿绒毛膜促性腺激素检查与临床意义

尿绒毛膜促性腺激素检查与临床意义 　　【摘要】探讨尿绒毛膜促性腺激素检查方法及临床意义。免疫学方法简便、快速、灵敏、特异性强。人绒毛膜促性腺激素(hCG)可用于早孕诊断。正常育龄妇女hCG升高提示早孕。作为绒毛膜上皮细胞癌、葡萄胎的早期诊断指标。可用于对绒毛膜上皮细胞癌、葡萄胎手术后化疗效果观察，是有效随访监测的手段。 　　【关键词】尿绒毛膜促性腺激素;临床意义;检查 　　血液和尿液hCG检测方法非常多，如酶联免疫吸附试验(ELISA)、电化学发光免疫试验、放射免疫试验、乳胶凝集抑制试验、血凝抑制试验等。而目前临床上应用最为普遍的是尿液的单克隆抗体胶体金试验[1]。对2012年～2013年检测100例尿绒毛膜促性腺激素临床检查及临床意义。 　　一、与方法 　　1.1 一般资料 对2012年1月～2013年12月尿绒毛膜促性腺激素检测100例。均为女性，年龄22～46岁，平均28岁。尿液以1500～2000r/min离心10min。晨尿hCG水平最高，接近血清水平，通常收集晨尿送检。 　　1.2 方法 酶联免疫吸附法，包被固相载体用的β-hCG基McAb。根过氧化物酶(HRP)标记的β-hCG基的McAb。在HRP反应体系中作底物(供氢体)的四甲基联苯胺(TMB，目测呈兰色或邻苯二胺(OPD，呈现黄色)。在已包被抗β-hCG亚基McAb的聚乙反应板微孔中加最适浓度(说明指定)酶标记抗β-hCG亚基McAb 0.1ml，立即加尿或血清0.1ml。轻轻抖动反应板，或于混匀器上混匀30s，再置37℃20min。甩去孔内反应物，以蒸馏水冲洗6次，晾干。加底物溶液0.1ml，室温放置5min，观察。蓝色(底物为TMB-H2O2时)或黄色(底物为OPD-H2O2时)为阳性，无色为阴性。如需定量，可同时做一标准系列浓度，结果以IgC对吸光度值作图，待测样本浓度可从曲线中查出。 　　二、结果 　　HCG<5mIu/mL18例，HCG 5.1～2000mIu/ml58例，HCG2001～5000 mIu/ml23例，5001～1000 mIu/mL1例。 　　三、讨论 　　HCG检测的方法早期应用生物学检测，目前正被简便、快速、灵敏、特异性强的免疫学方法代替。胶乳凝集抑制试验(LAT)以HCG作为抗原注入兔子体内，使其产生相应抗体，当这种抗体与HCG抗原相遇时发生免疫反应，但此反应不能为肉眼所见。利用化学方法将HCG抗原交联在聚苯乙胶乳颗粒上，制成HCG胶乳抗原，此胶乳抗原与HCG抗体结合，产生肉眼可见的胶乳颗粒状凝集。本法操作简便、价格便宜、快速(5min)、试剂易得[2]。但因灵敏度低(100～500IU/L)、特异性不高而趋淘汰。单克隆双抗体酶免疫法首先将β-HCG单抗包被聚乙酶标板小孔底部，加入被检尿液(或HCG的标准品)，被检样品中HCG抗原与包被在小孔底部的抗体结合，再加入特异性的酶标β-HCG抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。洗去过量的未结合酶标抗体，加入酶作用底物及显色剂显色，颜色的深浅与被检尿液中HCG含量成正比。此法灵敏度(20～50IU/L)高，可定量，临床常用，适合批量检测。不足是操作较复杂，所需时间较长。单克隆抗体胶体金标记免疫层析法，在试带(纤维素膜)的特定位置，分别包被羊抗鼠IgG抗体、羊抗人HCG抗体，呈上下两条线排列;另外试带上还含有均匀分布的胶体金标记人β-HCG单抗、胶体金标记的鼠IgG抗原。检测时将试带浸入被测尿液后迅速取出，由于层吸作用，尿中的HCG抗原先与胶体金标记的人β-HCG单抗结合，移行至特定位置即羊抗人HCG抗体检测线时，形成金标记β-HCG单抗-β-HCG抗原―羊抗人HCG抗体的双抗体夹心式复合物，试带即显1条紫红色线为阳性;同时金标记鼠IgG抗原随尿上行至羊抗鼠IgG抗体时，形成金标记鼠IgG抗原与羊抗鼠IgG抗体复合物，试带也显1条紫红色线，为阴性对照即质控线。本法简便快速(1～15min)、特异性强、灵敏度高(10～25 IU/L)，可半定量，在受精后7～10d即可作出诊断，故临床应用广泛。试带显红色是由于胶体金的作用，胶体金是氯化金与还原剂反应形成的一种胶体颗粒，其面带有负电荷，能吸附带正电荷蛋白质，被吸附在胶体金颗粒表面的蛋白质(抗体)活性不会改变，它的颜色随颗粒大小呈红色到紫色变化[3]。放射免疫用闪烁计数器测定，灵敏度可达<21U/L，如果用于血清中HCG含量的测定，其结果比尿液标本更准确、更稳定。由于放射免疫测定需放射性核素标记，且放射性核素易污染环境，所需时间长(2h)，本法只适用于研究工作，临床不常用。 　　妊娠后尿液hCG浓度增高，一般妊娠后35～40天时，hCG浓度可达到200ng/L以上，常用的尿hCG检查即可得到阳性结果。滋养层细胞肿瘤如葡萄胎、恶性葡萄胎、绒毛膜上皮细胞癌患者尿中hCG含量明显高于正常孕妇;滋养层细胞肿瘤治疗后，尿内hCG含量明显下降。流产诊断和监察，自然或非自然原因终止妊娠后，检测结果仍然提示弱阳性，先兆流产和不全流产呈阳性。完全流产呈阴性。诊断异位妊娠和宫外孕：hCG多为阳性，宫外孕破裂后大部分患者转为阴性。非滋养层肿瘤如畸胎瘤、睾丸间质细胞癌、卵巢癌、子宫颈癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌同样会引起hCG浓度增高，因此检测结果必须由医生综合其他临床症状及其他实验室指标后方可进行综合分析鉴别。 　　采集hCG阳性且尿蛋白定性为阴性的尿液3～4份，混合后存放在4℃冰箱内保存过夜。取出后离心，取上清液以化学交联抗原和配套的抗血清做稀释试验，测定hCG的效价。按所测定效价低1倍的稀释度为准，以生理盐水稀释尿液到此浓度，作为阳性对照质控物。每批试验应该设定阳性和阴性对照，对照试验达到预期的结果时才能使用该批号尿试带，进行检测和签发报告。阳性对照也可采用质控液。每份尿液最好做双份检查，即以原浓度尿液和倍量稀释后的尿液同时检查，两者同为阳性时为真阳性，可发结果;原浓度阳性，稀释尿液为阴性时，可能为弱阳性反应或促黄体生成激素(LH)增高等引的假阳性反应。 　　： 　　[1] 郎江明.临床免疫诊断学.广州：广东科学技术出版社，2003，497-498. 　　[2] 张迎春，贾翠英，王娟.血清β-HCG检测异位妊娠的诊断意义.放射免疫学杂志，2001，14(6)：167. 　　[3] 林敏.人绒毛膜促性腺激素检测及临床应用.检验医学与临床，2009，6：281-282.