超临界CO2萃取技术在云南红豆杉化学

超临界CO2萃取技术在云南红豆杉化学 ・化学成分 超Ｉ临界Ｃ０２萃取技术在云南红豆杉化学成分研究中的应用 广州市医药工业研究所（广州５１０２４０） 史庆龙林秀仙 葛发欢 华安超｝Ｊ缶界萃取有限公司（江苏海安２２６６８２）全雪松 摘要采用超临界００２萃取技术对云南红豆杉化学成分进行了研究，从中分离鉴定了肛谷甾醇和紫杉醇两种成分。其中用超临界（］吐萃取可直接得到阻谷甾醇单体。紫杉醇的分离虽然结合了传统的柱层析方法，但分离步骤较纯传统法大为简化。 关键词超临界ｃｑ萃取云南红豆杉紫杉醇ｐ符甾醇 超临界ｃ０２萃取分离技术已在天然产物提取中广泛应用，该技术用于植物化学研究具有容易分离到单体等优点【Ｉ＇２Ｊ。１９７１年，ｗａｎｉ及其同事从欧洲ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）中分离得到一种具有细低，在当时并未引起人们的注意。直到１９７７年，Ｈｏｒｗｉｔｚ博上发现其抗癌机理是抑制癌细胞的快速繁殖。这一机理与纺锤体毒性的抗癌药物（如长春认为紫杉醇是近年来已发现的最好的抗癌药物之一。其独特的抗癌机制和抗癌效果引起了随后２０多年对该属植物的深入研究。但由于紫杉醇在植物中的含量极低，提取工艺ｆ１分复杂和要用氯仿等有足临床用药。 云南红豆杉为红豆杉科（Ｔａｘａｃｅａ）红豆杉属（Ｔａｘｕｓ）植物（ｒ．ｙｍｕ＂ｎｓ／ｓ）的ｆ燥树皮。为了更好地开发利用，我们用超临界ｃ０２萃取技术对该植物进行化学成分的研究。本文主要报道Ｂ．谷甾醇和紫杉１材料和仪器 红南红豆杉，采自云南；ｃ０２，纯度卯％（广州气化工Ｊ）；药用酒精（９５％），甲醇（ｃｐ、Ａｒｔ），二氯甲烷（ＣＰ、ＡＲ），正已烷（ＡＲ），均为市售；５Ｌ超临界Ｃ啦萃取装置（自行设计，由华安超临界萃取有限公司加工，ＨＡ．９５０８型）；红外光谱仪：岛津Ｖ１１Ｒ－８１０１；显微ＤＲＸ ４００核磁共振 仪。 将云南红豆杉的干燥树皮粉碎成１０～２０目，称取ｌｋｇ投入超临界ｃ０２萃取釜中，开始升温加压，当温度及压力达到设定参数时，开始循环，同时加入９５％乙醇作为夹带剂，有关萃取参数见表。 ・３３８・ 万　 方数据表云南红豆杉树皮的超临界００２萃取参数 系统 压力（ｍ）温度（℃）ｃ０２流速（ｋｇＶｈ）萃取时间（ｈ） 分离柱收集的萃取液，放置，析出结晶，过滤，洗涤，用乙醇重结晶，最后得白色粉末状结晶Ｉ，经薄层检验为单一斑点。 解析釜Ｉ收集到的萃取物，行硅胶Ｇ（１００～２００目）常压柱层析，以正已烷一丙酮．甲醇进行梯度洗脱。收集流份并经薄层检验，合并相同组分。组分９浓缩后，行硅胶ｃ（２００～３００目）加压柱层析，以二氯甲烷一甲醇洗脱，收集洗脱液，组分５浓缩至适量，放置，白色晶体析出，用含水甲醇重结晶得白色结晶Ⅱ。经薄层检验为单一斑点。３鉴定 ３．１ 结晶ｌ为白色粉末状结晶（乙醇），易溶于 氯仿，难溶于乙醚、甲醇和水，与标准品争谷甾醇进行薄层层析对照，两者斑点位置一致；熔点为１３８—１４０℃，与标准品进行混台熔点测定，混合熔点不下降；并进行红外光谱检测，与标准品红外光谱一致，证明结晶Ｉ为Ｂ＿谷甾醇（ｐ－Ｓｉｔｏｓｔｅｒ０１），结构见图１。 圈１结晶Ｉ ３．２ 结晶Ⅱ为白色晶体（含水甲醇），易溶于氯 仿，难溶于水；熔点为２１４～２１６℃，与紫杉醇标准品的混合熔点不降；将结晶Ⅱ与紫杉醇标准品进行红外光谱及ＴＬＣ对照，结果两者红外光谱一致，ＴＬＣ显 示相同的斑点；将其与标准品进行１删懈图谱比 中药材第２４卷第５期２００１年５月 短叶红豆杉（Ｔａｘｕｓ胞毒性的新化合物，命名为紫杉醇，由于天然含量极新碱和秋水仙碱）的作用机制恰好相反。肿瘤学家毒的有机溶剂，且资源短缺和水溶性很差，远不能满醇的分离鉴定。体厂）；硅胶Ｇ（１００～２００目；２００—３００目）（青岛海洋熔点仪：１３本ＭＰｌ２型。Ｂｒｏｋｅｒ２提取分离 较，两者完全一致，确证该结晶为紫杉醇（７ｌ＇ａｘ０１）。结 构见图２。 肾埭Ｉｓ ＾ｃＯ ｏ 圈２结晶Ⅱ ４讨论 用超临界ｃ０２萃取技术从红豆杉树皮中提取紫杉醇，国外亦有报道。１９９２年，Ｊｅｎｎｉｎｇｓ等【３］利用ＳＦＥ筚取技术进行提取紫杉醇的研究，树皮中大部 万　 方数据分紫杉醇都能得到有效的提取。此后，Ｎａｉｒ等“１用含０．００ｌ％一１５％丙酮或乙腈的超临界Ｃ０２有效地提取出东北红豆杉中的紫杉醇，但用超临界ｃ０２萃 取技术进行云南红豆杉化学成分的研究束见报道，特别是用超临界ｃ０２萃取技术从红豆杉树皮中直接提出融谷甾醇结晶在国内外尚属首次。 参考文献 １葛发欢，等．天然产物研究与开发，２０００，１２（３）：８８ ２葛发欢，等．中药材，１９９４，１７（８）：３１３Ｊｅｍｍ》ＤＷ，ｅｌ ａ１．Ｊ．Ｓｕｐｅｍｉ６ｃａｌｌ，ｌｕｉｄｓ，１９９２，５：Ｉ ４ ＮａｋＪＢ．Ｅ．ＥｕｒｏｐｅａｎＰａｔｅｎｔ，０５２１６７５，１９９３４１７一０１ （２００１—０３—１２收稿）