HPLC法测定注射用复方甘草酸苷中甘草酸单苷的含量

HPLC法测定注射用复方甘草酸苷中甘草酸单苷的含量 　　摘 要：注射用复方甘草酸苷通常是应用在慢性肝炎和肝功能异常的治疗和改善当中，注射用复方甘草酸苷中甘草酸单苷是最为主要的成分，其含量对于药品的有效会产生非常明显的影响，所以其含量的测定就显得格外的重要。本文主要了HPLC法测定注射用复方甘草酸苷中甘草酸单苷的含量，希望能够给相关的研究人员提供一定的参考和借鉴。 　　关键词：HPLC法;含量测定;甘草酸苷 　　注射用复方甘草酸苷当中主要有甘草酸单铵盐、甘草酸和L-盐酸半胱氨酸三种物质，它对慢性肝炎有着十分有效的治疗效果，而这种药物的疗效和主要成分甘草酸单苷的含量有着十分密切的关系，所以我们在研究的过程中对注射液中的甘草酸单苷的含量进行测定是有着十分重大的现实意义的，在测定的过程中最为常用的就是HPLC法，以下本文对其进行研究。 　　一、仪器与试药 　　高效液相系统(Waters2695泵，Waters2996二极管阵列检测器，WatersEmpower色谱工作站);乙腈为色谱纯。样品来源：江苏扬州中宝药业有限公司;样品批号：20030729、2003073、20030731。参比样品来源：日本米诺发源制药株式会社(进口注册证号：H20030185)，参比样品批号：00344。甘草酸单铵对照品：成都圣诺科技发展有限公司，HPLC纯度99.5%。 　　二、方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱：KromasilC18，5μ，4.6×250mm，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长254nm，流动相：乙腈-0.01mol/L磷酸溶液(38∶62)，流速1.0ml/min，在室温下操作，理论板数按甘草酸苷计算应不低于2000。 　　2.2 供试品溶液的制备 　　精确称取本品10mg，将其用适量的注射水溶解，用5ml的胡涉水将其放置在25ml的容量瓶当中，加入适量的流动相到刻度的位置，使溶液的浓度能够达到400μg/ml的溶液，这样就完成了供试品溶液的制备。 　　2.3 对照品溶液的制备 　　精确称取甘草酸单铵对照品适量，将其用注射水进行溶解处理，加入适量的流动相将溶液制成甘草酸单苷铵，其浓度为530μg/ml的对照溶液。 　　2.4 线性关系考察 　　用天平精确称取甘草酸单苷铵对照品54.6mg，也就是41.2mg的甘草酸单苷对照品，将其放置在容积为50ml的容量瓶当中，用水将其定溶到刻度的位置，分别量取4.0、4.5、5.0、5.5、6.0ml溶液，将其放置在容积为10ml的容量瓶当中。加入适量的流动相将其定溶到刻度的位置，每一毫升的溶液当中应分别有329.6μg、370.8μg、412.0μg、453.5μg494.4μg的溶液。分别称取10μl的溶液放入到液相色谱仪当中，对不同溶液的主峰面积进行全面的测定，同时还要将浓度当做是横坐标，主峰面积当做是纵坐标对其进行线性回归返程的计算，在研究的过程中发现甘草酸酐在329.6-494.4μg的范围之内都能体现出非常好的线性关系。 　　2.5 重复性试验 　　取线性测定过程中浓度为420μg/ml的样品，放入到液相色谱仪当中，连续对其进行进样处理6次，检测到的主峰面积平均值达到了4092，RSD达到;额0.06%这也充分的证明这种检测方法的重复性非常好。 　　2.6 稳定性试验 　　取线性测定中浓度为412.0μg/ml样品，将其分别在0、4、8、12、24h进行进样处理，对其峰面积进行详细的记录，峰面积的平均值达到了4084552，RSD达到了0.10%，这一样品在24小时之内进行测定，RSD数值为0.10%，这也充分的标明样品在24h之内的稳定性比较强。 　　2.7 回收率试验 　　在研究的过程中主要要按照高、中、低三个浓度梯度对其进行分类处理，同时在这一过程中还要精确称取甘草酸单铵对照品10.6、13.25、15.9mg每个准备3份，将其放置在容积为25ml的容量瓶当中，加入0.2ml的氨试液和少量的水，使药品充分的溶解，加入适量的水将其稀释到刻度的位置，此外还要充分的摇匀，将其当做是对照品溶液，严格按照甘草酸苷测定的方法对其进行处理和操作，对回收率进行全面的计算。计算的结果如1所示：从表1当中我们也可以看出这种方法在回收率方面符合相关的和。 　　表1 甘草酸苷回收率试验结果 　　2.8 甘草酸苷的含量测定 　　精密称取本品10mg，用5ml注射用水溶解，置25ml量瓶中，加流动相至刻度，制成甘草酸苷400μg/ml溶液，作为供试品溶液;精密量取供试品溶液2.5ml置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成甘草酸苷100μg/ml溶液，作为预试液。取预试液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰峰高约为满量程的80%～90%，再取供试品溶液10μl，注入液相色谱议，记录色谱图。另取甘草酸苷对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。依本法测定三批样品，结果为，其标示量(%)分别为20030729，101. 　　10;20030730，103.29;20030731，100.02。其参比样品为103.19。 　　三、讨论 　　注射用复方甘草酸苷为甘草酸单铵盐、盐酸半胱氨酸、甘氨酸制成的注射用粉剂，主要用于治疗慢性肝炎，改善肝功能异常，也可用于治疗湿疹、皮肤炎，荨麻疹，目前广泛地应用于临床。本文所讨论的用高效液相色谱法对注射用复方甘草酸苷中甘草酸单苷含量进行测定方法的准确度和精密度良好，专属性强，能有效控制样品中甘草酸单铵的含量符合含量测定的方法学要求，适用于本品的测定。 　　高效液相色谱的分离过程。同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。 　　开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。 　　不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。 　　高效液相色谱分析的。由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。 　　： 　　[1]徐蓉.HPLC测定止咳祛痰灵中甘草酸、甘草苷的含量[J].首都医药，2014(22). 　　[2]徐嵘，霍炎，万丽丽，陆瑶华，郭澄.复方甘草酸苷注射液与甲磺酸加贝酯存在配伍禁忌[J].药学实践杂志，2011(2).