ATP-TCA法检测乳腺癌细胞对化疗药物敏感性的研究

ATP-TCA法检测乳腺癌细胞对化疗药物敏感性的研究 作者;唐永梅，苏承武，蔡捷，唐东，李佳荃，李梅，田海梅，张伟 ［摘要］ 目的 探讨体外ATP法化疗药物敏感试验在乳腺癌细胞中的可行性。方法 以ATP-TCA法，检测37例乳腺癌患者的癌细胞对6种常用化疗药物的敏感性。结果 ATP-TCA法的可评估率为91.89%；6种试验用化疗药物的敏感率分别为：足叶乙甙14.71%，紫杉醇20.59%，丝裂霉素32.35%，5-氟尿嘧47.06%，草酸铂58.82%，阿霉素67.65%。结论 ATP-TCA肿瘤细胞化疗药敏试验可作为乳腺癌患者个体化疗中化疗药物敏感性的预测。 ［关键词］ ATP-TCA法；乳腺癌；化疗药物 Application of ATP?bioluminescence assay for screening chemotherapeutic agents of breast tumor ［Abstract］ Objective To study the application of the ex vivo ATP?bioluminescence assay(ATP-TCA)in the chemotherapy of breast tumor.Methods The surgical specimens of 37 patients were tested by the ATP-TCA.Results Evaluable test results were achieved in 34 of 37 patients，the evaluability rate was 91.89%.The sensitive rates of etoposid(Vp-16)，paclitaxel(TXL)，mitomycin(MMC)，5-fluoruracil(5-FU)，oxaliplati(OXA)，epirubicin(EPI)was 14.71%，20.59%，32.35%，47.06%，58.82%，67.65%，respectively.Conclusion ATP?bioluminescence assay is a good option in the chemotherapeutic agents screening of breast tumors. ［Key words］ ATP?bioluminescence；breast tumor；chemotherapy drug 选择针对个体有效的药物进行化疗是治疗乳腺癌的重要手段之一。由于同一化疗对不同个体的类同肿瘤的疗效存在差异，化疗前对药物进行体外敏感试验，预测出有效的单药或有效（或敏感）联合药物组成的化疗方案，是提高化疗药物疗效的潜在方法之一。ATP-TCA法（三磷酸腺苷-肿瘤细胞药敏试验）是近年发展起来的敏感而稳定的药敏检测方法［1］。本文应用ATP-TCA法对37例乳腺癌患者的乳腺癌细胞进行6种化疗药物的药敏试验，以探讨ATP-TCA法用于乳腺癌患者体外化疗药物检测在方法学方面的可靠性。 1 与方法 1.1 一般资料 收集2003年3月～2005年5月在本院手术治疗的乳腺癌（经病理确诊）患者37例标 本。37例患者最小年龄25岁，最大年龄65岁。 1.2 材料 ATP-TCA试剂盒（包括改良PRMI-1640培养基）由北京金紫晶生物技术有限公司提供。MPL-1型自发光仪为德国Berthold公司产品。化疗药物：5-氟尿嘧（5-FU，南通制药总厂），表阿霉素（EPI，浙江海政制药），足叶乙甙（VP-16，江苏恒瑞），紫杉醇（TXL，澳大利亚FH科贸有限公司），丝裂霉素（MMC，日本明治药厂），草酸铂（OXA，法国Sanofi Winthrop公司）。 1.3 方法 ATP-TCA操作步骤（按试剂盒使用说明操作）：取肿瘤组织标本，在无菌条件下，剥离肿瘤组织的纤维、脂肪及结缔组织，然后用剪刀将肿瘤组织尽可能剪成小碎块，过200目钢网后放入肿瘤组织解离酶液中，置37℃、5%CO2、95%湿度下孵育1.5～3h。在室温下，以1500r/mim条件下离心20min，弃上清液，用Hanks洗2次，以PRMI-1640制成癌细胞悬液，取35μl用台盼蓝染色，显微镜下计数，并观察细胞活性。调整细胞浓度至20～40万/ml，以每孔0.1ml接种至96孔培养板内。按400%、200%、100%、50%、25%和12.5%的血浆峰值浓度，将药物加入培养孔每孔0.1ml，每个浓度3个平行孔，并设最大抑制（MI）和无药物（MO）对照孔，于5%CO2、37℃、95%湿度下孵育6～7天。加入肿瘤细胞ATP提取液0.1ml，混匀后室温下15min，取0.05ml混合液置微板荧光分析仪检测。