乳凝集透射终点法测定糖化血红蛋白

文章编号!"##" $#%&’$##"(#) #$*" #$ 胶乳凝集透射终点法测定糖化血红蛋白 郑 彤"+刘洪斌$+戴友良"+王 峰" ’",宁波市李惠利医院检验科+浙江 *"-#)#.$,宁波大学医学院生化教研室+浙江 *"-$""( 关键词!胶乳凝集.透射终点法.糖化血红蛋白 中图分类号!/))0,0" 文献标识码!1 糖化血红蛋白’23456(是血红蛋白的成份之 一+其含量不受血糖浓度暂时波动的影响+可反映测 定前 %7"$周血糖的平均水平8测定 23456作为糖 尿病的诊断和糖尿病的控制+是一项具有重要 意义的实用指标9":8我们应用胶乳凝集透射终点法+ 在自动生化分析仪上测定 23456的百分含量+得到 满意效果+现报道如下8 材 料 和 方 法 一;仪器和试剂 ",1<6=>?@公司的AB@6CDE@FG-全自动生化 分析仪.HIJ0)#自动全波长分光光度仪8 $,23456胶乳凝集法测定试剂由卫生部临床 诊断试剂实验中心提供+试剂K甘氨酸缓冲液悬浮 胶乳.试剂L冻干抗人 23456鼠单克隆抗体和羊抗 鼠 MNO抗体’临用时用甘氨酸缓冲液稀释溶解+低 温 $7%P避光保存(.标本制备用溶血液.不同 23456百分浓度的液’#Q7"),&Q(8 *,23456离子捕捉免疫分析法’MFM4法(测定 试剂由 433ERR公司提供且推荐为参考方法+适配 其 MSG免疫分析仪8 二;方法 ",原理 利用抗原抗体反应原理直接测定 23456的百分含量的方法8样本中总 23和 23456 与胶乳有相同的非特异性吸附而固相化8当加入 23456的特异性鼠单克隆抗体后形成胶乳J23456J 抗人 23456鼠单克隆抗体的复合物+此复合物由于 羊抗鼠 MNO抗体而形成凝集+凝集量因胶乳面固 相化的 23456量的不同而异8通过测定透射吸光度 的变化来表示凝集量+与 23456百分浓度的标准曲 线比较后+求出样品中 23456的百分含量8 $,标本制备 采用肝素抗凝+从*###DT>U@$ >U@离心分离后的血红细胞层中取样"#V5+加入">5 溶血液溶血+溶血后标本$7%P条件下保存待测8 *,操作参数 反应类型为双试剂终点法.反应 温度 *&P.主波长 0-#@>+副波长 -$#@>.样品 0 V5+试剂K $$-V5+反应 ->U@+再加试剂L &-V5+立 即读吸光度+以此吸光度为空白吸光度+->U@后反 应停止+再读终点吸光度+根据终点吸光度和空白吸 光度的差值+对照标准曲线’仪器不同浓度梯度 的 -个标准品后自动回归计算+曲线参数贮存于仪 器数据库中(+得出结果8 结 果 一;空白吸光度测定时间的选择 通过 HIJ 0)#自动分光光度仪全程监测反应过程+当样本和 试剂K’胶乳液(反应完全后+吸光度呈稳定状态+当 加入试剂L后+因稀释效应+吸光度立即有较大的变 动+而此时胶乳化的 23456和检测抗体还没有立即 反应+故利用加入试剂L后的瞬间测空白吸光度+既 可减去样品空白+又可消除因加入试剂L后引起吸 光度较大变动而造成的系统误差8 二;线性范围 取高 23456浓度样本 "份+按 梯度’#Q+-Q+"#Q+W"##Q(用溶血液依次稀释后 分别测定+在 $,*Q7"-,)Q范围内 23456的检测 浓度和百分稀释度呈良好线性关系’XY#Z[0"+\] #,#"(8 三;重复性试验 选择正常’),0Q(和异常 ’"#,&Q(样本各 "份+在 "次实验中测 $#次+批内 F^ *,$Q和 ),"Q.每天不同时间测 $次+连续测 "#_+批间 F^ ),*Q和 -,)Q8 四;比较试验 取 *#例临床样本’23456含量 *,%Q7"),$Q(+分别用本法’‘(与 MFM4法’G(同 时 测 定+‘Y #,[0%Ga #,)"$Q+XY #,[[%+\ ]#,#".MFM4法bcde为-,)%Qd$,#0Q+本法为 ’下转第 $*)页( f"*$f上海医学检验杂志 $##"年第 "0卷第 )期 万方数据 细胞因子!通常认为病原体反复感染!血中免疫复合 物的长期刺激以及肝硬化失代偿期所产生的门脉高 压!肠道缺血缺氧等等原因可以导致 "#$%&水平蓄 积而升高!因此!同正常对照组相比!肝硬化失代偿 期组 "#$%&水平升高!而细菌感染所释放的 ’() 应是引起 "#$%&水平升高的最主要原因!所以!如 果肝硬化失代偿一旦合并细菌感染!"#$%&水平又 呈现数倍的大幅度上升*作为白细胞共同抗原的 +,-.!既可以存在在淋巴细胞上!又可以存在在粒 细胞上!其中的 +,-./0是由幼稚细胞 +,-./1 衍生而成!在一定程度上也可以反映出炎症反应的 过程和严重程度*从以上的结果可见!在肝硬化失代 偿 期 组 和 肝 硬 化 失 代 偿 期 合 并 细 菌 感 染 组 +,-./02粒细胞数和 +,-./02淋巴细胞数呈现 不同程度的提高!其中!因 +,-./02粒细胞数在细 菌感染时变化更加显著!因此!+,-./02粒细胞数 和血清 "#$%&浓度的变化对辅助判断是否合并细 菌感染有一定帮助*此外!"#$%&本身在促进肝硬 化方面也起着十分重要的作用!例如!它能刺激储脂 细胞转化为肌纤母细胞样细胞并合成胶原!并且通 过刺激成纤维细胞增殖!以参与慢性肝病纤维化过 程*所以!血清 "#$%&浓度在一定程度上又可以反 映出疾病的严重程度!因此!通过对血清 "#$%&水 平和 +,-./02粒细胞数的检测!对了解炎症反应 和肝硬化严重程度也有一定的临床意义* 参 考 文 献 345丁一娟6腹水 "#$%&!7’%8!7’%9测定及其临床价知值 3:56中国现代医学杂志64;;;!4<=>?@;A45谢元林6肝纤维化相关性细胞因子研究进展3:56国外医 学6生理D病理科学与临床分册64;;9!49A>BC<9>%<9.6 3-5李东复6慢性肝病肝癌患者 7’%4D7’%9及 "#$<活性测 定3:56中国免疫学杂志64;;8!44页B .=>.HI<=<9H!JK?=><;!LM?=?.* 五D 回收试验 在浓 度 为 >==< SSTPU’及胆红素浓度达 <<.VSTPU’时!对本法无 明显干扰* 八D参考值 健康体检正常者 448例!男 8F 例!女 -;例!年龄 4;W8?岁!用本法测血浆 NO1PQ! 平均值 .=?HI?=8H!按 XYI=9HI8=!48A;BC4-?9%4-?;= A收稿C%4;B A本文编发C龚晓霖B n->