凝血四项检测原理培训知识

血凝应用血凝应用主要原理主要原理 吴子权吴子权 止血分析概述止血分析概述止血分析概述止血分析概述 正常情况下血液在动脉 静脉和毛细血正常情况下血液在动脉、静脉和毛细血 管中持续流动. 当上述情况受到损伤、凝块等影响后, 诸多因素会共同作用使之恢复. 凝血机制的瀑布学说凝血机制的瀑布学说:: 内源性凝血途径激活 外源性凝血途径激活 凝血机制的瀑布学说凝血机制的瀑布学说:: XIXI XIaXIa VIIaVIIa XIIXII XIIaXIIa VIIVII XIXI XIaXIa IXIX IXaIXa XX VIIaVIIa VIIIVIII VIIIVIII XaXa 纤维蛋白原纤维蛋白原 VIIIVIII VIIIaVIIIa 凝血酶原凝血酶原 (II(II因子因子)) 凝血酶凝血酶 ((活化的活化的VaVa(II(II因子因子)) ((活化的活化的 IIII因子因子)) 纤维蛋白纤维蛋白 VaVa 纤维蛋白纤维蛋白 凝块凝块 PTPT试验（凝血酶原时间）试验（凝血酶原时间）PT PT 试验（凝血酶原时间）试验（凝血酶原时间） 促凝血酶原激酶促凝血酶原激酶 VIIVII VIIaVIIa IXaIXa XX XaXa 纤维蛋白原纤维蛋白原VaVa 凝血酶原凝血酶原 (II(II因子因子)) 凝血酶凝血酶 ((活化的活化的(II(II因子因子)) ((活化的活化的 IIII因子因子)) 纤维蛋纤维蛋测定时间测定时间((秒秒)) 纤维蛋纤维蛋 白凝块白凝块 测定时间测定时间((秒秒)) PT PT 试验试验 ISIISI INR =INR = 样本样本PTPT秒数秒数 当地正常人均值当地正常人均值当地正常人均值当地正常人均值 INR: INR: 国际标准化比率国际标准化比率((International Normalized Ratio)International Normalized Ratio) ISI: ISI: 国际敏感指数国际敏感指数((International Sensitivity Index)International Sensitivity Index) 每 批每 批 试剂的试剂的 都不同都不同通过上述计算使通过上述计算使 值得值得每一批每一批PTPT试剂的试剂的ISIISI都不同都不同,,通过上述计算使通过上述计算使INRINR值得值得 到全球范围内统一到全球范围内统一.. PTPT当地正常人均值当地正常人均值:: 每个实验室自己测定得到的当地正每个实验室自己测定得到的当地正PT PT 当地正常人均值当地正常人均值: : 每个实验室自己测定得到的当地正每个实验室自己测定得到的当地正 常人群常人群PTPT均值均值. . PTPT试验试验PT PT 试验试验 测定凝血酶原时间PT测定凝血酶原时间PT 临床应用临床应用:: ••术前监测术前监测 ••口服抗凝剂治疗口服抗凝剂治疗 ((OAT)OAT) ••外源性凝血因子缺乏外源性凝血因子缺乏外源性凝血因子缺乏外源性凝血因子缺乏 ••肝脏疾病肝脏疾病 ((肝硬化肝硬化)) ••维生素维生素KK缺乏缺乏••维生素维生素KK缺乏缺乏 PTPT试验试验PT PT 试验试验 报告参数报告参数 SS：秒数：秒数 报告参数报告参数 秒数秒数 RR：比率：比率RR：比率：比率 INRINR：国际标准化比率：国际标准化比率INRINR：国际标准化比率：国际标准化比率 %% 百分活动度 以当地人群的正常值调百分活动度 以当地人群的正常值调%%：百分活动度，以当地人群的正常值调：百分活动度，以当地人群的正常值调 整定标血浆，用于口服抗凝剂治疗的监控整定标血浆，用于口服抗凝剂治疗的监控 通常同时治疗，干扰须消除通常同时治疗，干扰须消除 PTPT试验试验PT PT 试验试验 PTPT试剂试剂 PT FIB HSPT FIB HS PTPT试剂试剂 PT FIB HSPT FIB HS ••ISIISI在在 1.31.3--1.51.5，来源于兔脑组织，来源于兔脑组织 ••为冻干粉试剂，需要使用蒸馏水溶解为冻干粉试剂，需要使用蒸馏水溶解 ••正常参考值约为：正常参考值约为：1111--1515秒秒 PTPT试验试验PT PT 试验试验 PTPT试剂试剂 RPTRPT PTPT试剂试剂 RPTRPT ••ISIISI在在 1.01.0以下，来源于重组以下，来源于重组 ••为冻干粉试剂，需要使用配套的缓冲为冻干粉试剂，需要使用配套的缓冲 液溶解液溶解液溶解液溶解 ••正常参考值约比前者短正常参考值约比前者短1.51.5秒秒 PT试验PT试验 过• 反应过程： 血浆样本(50uL) + PT试剂(100uL) = 纤维蛋 白形成白形成 APTT APTT 试验试验 脑磷脂脑磷脂 + + CaCl2CaCl2 XIXI XIaXIa XIIXII XIIaXIIa XIXI XIaXIa IXIX IXaIXa XX XaXa 纤维蛋白原纤维蛋白原 VIIIaVIIIaVIIIaVIIIa 凝血酶原凝血酶原 (II(II因子因子)) 凝血酶凝血酶 ((活化的活化的VaVa ((活化的活化的 IIII因子因子)) 纤维蛋纤维蛋测定时间测定时间((秒秒)) VaVa 纤维蛋纤维蛋 白凝块白凝块 测定时间测定时间((秒秒)) APTTAPTT试验试验APTT APTT 试验试验 活化部分凝血酶原时间活化部分凝血酶原时间活化部分凝血酶原时间活化部分凝血酶原时间 临床应用临床应用:: ••术前监测术前监测 肝素治疗肝素治疗••肝素治疗肝素治疗 ((UFH)UFH) ••内源性凝血因子缺乏内源性凝血因子缺乏 ((XII, XI, IX, VIII)XII, XI, IX, VIII) 狼疮抑制物狼疮抑制物 抗磷脂抗体抗磷脂抗体••狼疮抑制物狼疮抑制物 ((抗磷脂抗体抗磷脂抗体)) APTTAPTT试验试验APTT APTT 试验试验 APTTAPTT试剂试剂APTTAPTT试剂试剂 ••APTT LyAPTT Ly：冻干粉试剂，需要加入蒸馏水：冻干粉试剂，需要加入蒸馏水 溶解溶解溶解溶解 APTT SAPTT S 液体试剂 无须配制 直接使液体试剂 无须配制 直接使•• APTT SysAPTT Sys：液体试剂，无须配制，直接使：液体试剂，无须配制，直接使 用用 ••都含氯化钙试剂都含氯化钙试剂都含氯化钙试剂都含氯化钙试剂 APTT试验APTT试验 过• 反应过程: 血浆样本(50uL) + APTT试剂(50uL) + 氯化钙 试剂(50 L) 纤维蛋白形成试剂(50uL) = 纤维蛋白形成 TTTT试验试验TTTT试验试验 凝血酶时间凝血酶时间 牛凝血酶牛凝血酶* * + + 稀释液稀释液 凝血酶原凝血酶原 凝血酶凝血酶凝血酶原凝血酶原 凝血酶凝血酶 纤维蛋白原纤维蛋白原 纤维蛋白纤维蛋白 ((凝块凝块)) TT试验TT试验 凝血酶时间凝血酶时间 临床意义 肝素治疗控制肝素治疗控制 播散性血管性凝血播散性血管性凝血((DIC)DIC)播散性血管性凝血播散性血管性凝血((DIC)DIC) 凝血酶缺乏凝血酶缺乏 纤维蛋白原缺乏纤维蛋白原缺乏纤维蛋白原缺乏纤维蛋白原缺乏 TT试验 试剂 •纯化的凝血酶试剂，冻干粉；浓缩缓冲液纯化的凝血酶试剂，冻干粉；浓缩缓冲液 •配制的容量不同，有2、5、8 mL三种，2mL 专用于肝素治疗的监控 5 8mL用于常规筛专用于肝素治疗的监控，5、8mL用于常规筛 查。 正常参考范围 11 18秒 (5 mL)正常参考范围：11-18 秒 (5 mL) 16-27 秒 (8 mL) 配制时先配缓冲液 比例为1 4（1 L浓缩•配制时先配缓冲液，比例为1：4（1mL浓缩 缓冲液 +4mL 蒸馏水） 再分别取 加入冻干粉试剂中即可再分别取2、5、8mL加入冻干粉试剂中即可 TT试验TT试验 过• 反应过程： 血浆样本(75uL) + TT试剂(75uL) = 纤维蛋白 形成形成 FIB-Clauss法 牛凝血酶 (过量) + 稀释液 Fibrinogen (纤原) Fibrin (纤维蛋白)(纤原) (纤维蛋白) FIB-Clauss法FIB-Clauss法 纤维蛋白实测法纤维蛋白实测法 临床意义 •纤维蛋白先天缺乏 获得性•获得性 DIC •系统性纤溶 胰腺炎及重症肝病•胰腺炎及重症肝病 FIB Cl 法FIB-Clauss法 •纯化的凝血酶 •需要定标需要定标 •线性范围好0 7 7 0 g/L•线性范围好0.7-7.0 g/L FIB Cl 法FIB-Clauss法 试剂:试剂: 冻干粉,需要蒸馏水溶解冻干粉,需要蒸馏水溶解 定标及检测需要因子稀释液定标及检测需要因子稀释液 纤维蛋白测定法纤维蛋白测定法 纤维蛋白测定法纤维蛋白测定法 定标血浆中含有 知浓度的纤维蛋白在仪 上稀• 定标血浆中含有已知浓度的纤维蛋白,在仪器上稀 释后检测，得到一条定标曲线，是关于浓度与检 测值之间的定标曲线测值之间的定标曲线 • 注：在血凝分析中 所有浓度（活性）的检测需• 注：在血凝分析中，所有浓度（活性）的检测需 要定标，而秒数的分析无须定标 PT衍生法PT衍生法 • 定标血浆每一个稀释度的光散差 (delta)和相应的纤维蛋白浓度成正(delta)和相应的纤维蛋白浓度成正 比 衍生法测定纤维蛋白原衍生法测定纤维蛋白原PTPT衍生法测定纤维蛋白原衍生法测定纤维蛋白原 光散度光散度光散度光散度 100%100% 与纤维蛋白原 浓度成比例 50%50% ΔΔ 50%50% 25% 时间时间时间时间 PTPT反应定标曲线反应定标曲线PTPT反应定标曲线反应定标曲线 PT衍生法PT衍生法 mg/dL or g/L Delta PT衍生法PT衍生法 PT衍生法的优点: • 样本无需稀释 • 无需试剂和测试成本• 无需试剂和测试成本 • 报告时间最快 纤维蛋白原实测法纤维蛋白原实测法 ((FibrinogenFibrinogen--ClaussClauss)((FibrinogenFibrinogen--ClaussClauss) 牛凝血酶牛凝血酶 ((过量过量)* + )* + 稀释剂稀释剂 纤维蛋白原纤维蛋白原 纤维蛋白凝块纤维蛋白凝块 ••在过量凝血酶作用下在过量凝血酶作用下, , 凝固反应的发生必定是纤维蛋白原引起的凝固反应的发生必定是纤维蛋白原引起的 纤维蛋白实测法纤维蛋白实测法 • 定标血浆每一个稀释度的凝固秒数 (s)和相应的纤维蛋白浓度成正比(s)和相应的纤维蛋白浓度成正比 纤维蛋白实测法纤维蛋白实测法 mg/dL or g/L s 纤维蛋白原实测法纤维蛋白原实测法 和和PTPT衍生法的比较衍生法的比较 演算法演算法 实测法实测法 血浆血浆 不稀释不稀释 1:101:10机上自动稀释机上自动稀释 线性线性 0.0.80 80 –– 88..00 g/L00 g/L 0.700.70 –– 7.7.00 g/L00 g/L FDPFDP敏感性敏感性 敏感性低敏感性低FDP FDP 敏感性敏感性 ((干扰干扰)) 敏感性低敏感性低 ((Δ based)Δ based) 敏感性高敏感性高 OAT OAT 病人病人 PT PT 演算法结果比实测法稍高演算法结果比实测法稍高(5%(5%--10%)10%) 成本成本 免费免费 消耗试剂消耗试剂成本成本 免费免费 消耗试剂消耗试剂 目前PT试剂的分组目前PT试剂的分组 前有 种 剂 剂• 目前有2种PT试剂: PT HS及RPT试剂 • 2种试剂正常参考值不一2种试剂正常参考值不 • 仪器系列多: ACL100-9000, ACL ADVANCE ACL TOPADVANCE,ACL TOP • 从仪器检测原理及试剂适用范围考虑,配对从仪器检测原理及试剂适用范围考虑, 配对 为: ACL100 9000使用PT HS试剂ACL100-9000 使用PT HS试剂 ACL ADVANCE,ACL TOP使用RPT试剂, 目前APTT试剂的更换目前APTT试剂的更换 从今年起所有APTT L 试剂停止使用代之以• 从今年起所有APTT Lyo试剂停止使用,代之以 APTT SYS液体试剂 • APTT SYS优点在于更高的稳定性、无须配制、 对因子的缺乏更敏感对因子的缺乏更敏感 • 两者的正常参考范围不同，APTT SYS液体试剂两者的正常参考范围不同，APTT SYS液体试剂 正常参考范围比APTT Lyo试剂短6秒左右 • 项目的使用上，ACL100-7000无变化， ACL8/9000需要更新项目名称