血清蛋白电泳资料

） 1） 如果使用 6 条带的电泳缓冲液，则β1> β2 纤维蛋白原→ 通过定量分析确认 If β1= β2 可疑的单克隆成分 → 免疫固定确认 If β1< β2 →可疑的单克隆成分 → 免疫固定确认 2） 如果β2 的百分比为 8-12%,平均百分比为 10%，其β2 为纤维蛋白原(即纤维蛋白原的浓 度为 5-8g/l) 3） 直接检测纤维蛋白原的浓度 血浆中的纤维蛋白原含量一般为 5-8g/l 血清中的纤维蛋白原的含量为≤0.2g/l 2. 血清蛋白电泳的优越性在于血清蛋白总浓度定量实验相同的病人，可现出血清蛋白电泳 带型不同。 3. 如果使用做 5 条带血清蛋白电泳（所使用的标本已经明确为血清），但仍然出现六条带现象， 原因何在？ 1） 出现β2 可能是由于 C3 引起的，由于血清样本在体外放置时间过长而导致 C3 的降解， 最终引起 C3 结构的改变 2） 体内的抗凝系统发生了异常改变 4. 在划分γ区带时应特别注意从β区带的最低点开始划分 5. 在血清蛋白电泳图谱中，区带间如α1 到α2 间，α2 到β间出现的成分是脂蛋白 有些客户认为醋纤膜的效果不如琼脂糖的效果，其中一点认为醋纤膜的电 泳效果是区带间分离的不清楚，而琼脂糖的效果区带间分离的界限清楚。他 们甚至认为血清蛋白电泳的各区带间无任何着色的成分。当遇到此客户时， 我们应该如何回答？ 1) 首先要明确此客户对电泳知识的了解肯定是甚少。 2) 血清蛋白区带电泳各区带间的成分是脂蛋白，因此在图谱中表现出染色 轻，带型弥散的现象。无论是醋纤膜电泳还是琼脂糖凝胶电泳都会有此 2 现象。但由于醋纤膜电泳是用丽春红染色而琼脂糖凝胶电泳是用氨基黑 染色，由于视觉效应，造成在蓝色染色背景下条带间分离度显得比红色 染色背景下清楚，但实质是一样的。 6. 做血清蛋白电泳时，如果结果峰形图中基线整体偏高即各区带间很难划分，需要怎样处理 标本？（做血清蛋白电泳前应最先知道何种信息）。 稀释样本，将高浓度的血清样本稀释在 7－9g/dl。做血清蛋白电泳前应改先了解总蛋白的浓 度，这是做好血清蛋白电泳的前提。 高分辨率尿蛋白电泳理论部分 1. 如何解释高分辨率电泳？在 696PC 中，有些体液的蛋白质可用到高分辨率电泳技术。 高分辨率是指将每个蛋白条带清楚的分离出来即将普通区带电泳中不能分离清楚的蛋白条 带用高分辨率技术则很清楚的分离出来。 在 696PC 中，血清样本、尿液标本、脑脊液标本可用到高分辨率技术。 2. 尿蛋白电泳结果的是什么？（即是以诊断形式报告还是以带型描述形式报告） 当报告尿蛋白电泳结果时，使用者只报告所看到的带型结果即描述带型即可，勿加入带有 主管观点的以诊断形式的报告。 如：可见到宽的白蛋白带；高β区带；介于α2 和β区域间的成分；β2 区带 3. 当尿液中出现大分子量蛋白，则说明肾脏哪部分的损害，当有小分子量的蛋白质出现时， 则说明肾脏哪部分的损害？请简要描述原理 尿液是由肾小球毛细血管对血浆过滤形成超虑液而形成的。肾小球可过筛大分子的血浆 蛋白。肾小球屏障做为一种功能可对带电不同，大小和结构不同的蛋白进行过筛。肾小球对于 大分量的蛋白来说是启到超滤的作用。肾小球滤过膜上有很多固定大小的小孔，这些小孔可保 留和容许通过一定的大分子片断。 肾小球的损害将会导致肾小球的通透性的损害。这将会引起尿蛋白分泌的增多。在正常情况 下，这些蛋白是不被肾小球滤过的。象这样的蛋白包括白蛋白和其他蛋白质（在血浆中浓度较 高且分子大小与白蛋白相当）如：转铁蛋白、α1 抗胰蛋白酶、α1 酸性糖蛋白。这些蛋白的分 子范围是 39，500daltons 到 76，500daltons。即便是在肾小球损害的情况下，大分子量蛋白如 α1 巨球蛋白（820，000daltons）和β脂蛋白（2,400,000daltons）一般不会出现在尿中。一些分 子量很低的蛋白会通过肾小球如β2 微球蛋白（11,800daltongs）。在肾小管重吸收能力处在危险 阶段前，肾小球损伤的早期阶段，尿液中一般无此类蛋白。 在正常的肾脏中，肾小球启到了分子筛的作用。可阻止大分子的蛋白通过而容许分子量 <15000daltons 的蛋白自由通过。95-99%这样的小分子蛋白被肾小管重吸收和代谢。 肾小管疾病能引起肾小管重吸收和代谢小分子蛋白的能力下降。因此可导致尿液分泌的蛋白 增多。肾小管性蛋白尿经常要与肾小球性蛋白尿作比较。因为低分子量的蛋白在血浆中的浓度 很低。因此，肾小管性蛋白尿的相应的血清蛋白带型无明显变化。 正常尿液中白蛋白和转铁蛋白含量非常低。生理性蛋白尿大约 150mg/24h。尿蛋白电泳是检 测尿液中蛋白质的最好方法，异常条带的出现（甚至出现转铁蛋白条带）需要辅助方法的鉴定 （如用免疫固定的方法来鉴定 B-J 蛋白）。 3 4. 肾小球滤过膜过滤蛋白分子是否和下列因素有关 1） 蛋白分子的大小 2） 蛋白分子的形状 3） 蛋白表面电荷的分部 如果α1 区带的成分从肾小球滤过膜漏出，则任何成分都有可能很容易的通过肾小球滤过 膜。（因为α1 区带成分中含有带电荷的分子） 5. proteinuria（蛋白尿）概念： proteinuria： 1）代表随机的尿蛋白浓度≤10mg/l 2) 代表 ≤150mg/24h Proteinuria 是代表正常现象。 6. 根据培训间做的尿蛋白电泳图谱，哪种带型表现为肾小球性蛋白尿，哪种带型表现为混和 性蛋白尿。 混合性蛋白尿 肾小球性蛋白尿 过载性蛋白尿 此带成分为纤维蛋白原 此带为β区域的转铁蛋白 7. 如果晨尿的总蛋白量在 300mg/l，则可会有以下 3 种情况出现（根据图谱指出其带型） 1） overload proteinuria (表现为正常人) 2） 肾小球性蛋白尿 3） 多发性骨髓瘤病人 8. 描述高分辨率尿蛋白电泳流程（从收集样本到电泳结束） 随机尿蛋白定量>10mg/L→搜集 24 小时尿→测定尿蛋白总量（如果尿蛋白总量>200mg/24h） →做高分辨率尿蛋白电泳→描述电泳带型结果出报告 根据报告形式如“可见到宽的白蛋白带；高β区带；介于α2 和β区域间的成分；β2 区带”， 临床医生可进一步进行其他的定量分析如特定蛋白定量分析和免疫固定实验做出明确的诊 断 4 9.. 做高分辨尿蛋白电泳时是否同加入血清标本和血浆标本，Why? 用血清样本和血浆样本执 行高分辨率尿蛋白电泳时样本的稀释比率是多少？ 在高分辨率尿蛋白电泳时用血清和血浆标本的目的是将血清和血浆的高分辨率蛋白电泳的 结果做为带型位置的参照，用血浆的目的是因为血浆中含有纤维蛋白原，其在图谱中的位 置是在β2 至γ区域之间。 10. 做高分辨率尿蛋白电泳时，以下软件中的脱色顺序是否正确？ A Clean-discharged B Clean-discharged C Clean-discharged 11 做高分辨率尿蛋白电泳时，染色瓶需用标有哪个标签的瓶子。 标有“washing solution” 标记的瓶子 SDS 尿蛋白电泳 此方法的特点 z 可以很清楚的鉴定尿液中低分子量蛋白成分 z 评估肾脏功能的好坏较容易 z 灵敏度相对高 尿蛋白电泳小结 高分辨率尿蛋白电泳是对尿液蛋白成分进行初筛实验的一个很好的方法。根据高分辨率尿蛋 白电泳的带型，临床医生可进一步做其他的定量分析和免疫固定实验，这才是科学并且合理的 尿液蛋白的分析过程。为什么在临床上要开展高分辨率尿蛋白电泳？原因在于此电泳形式可看 到尿蛋白分布的全貌，避免临床医生对尿蛋白成分的漏检。定量分析只能对某种成分的蛋白进 行定量，然而定量分析尿液蛋白应以尿蛋白电泳做为基础。如果不做尿蛋白电泳而只做尿蛋白 的定量分析，往往会造成临床上的漏检。 针对 SDS 尿蛋白电泳，西方发达国家很少做。虽然他能够较容易的评估肾脏功能的好坏，但 由于此方法周期长（Sebia 3 小时，696PC 1.5 小时），成本昂贵，不适合用于临床的常规检查。 相对于高分辨尿蛋白电泳其检测周期为 47 分钟（696PC），成本便宜，非常适合临床的初筛检 测。 其他国家的临床电泳使用情况 意大利、加拿大、葡萄牙、希腊、西班牙、奥地利、法国、墨西哥普遍开展血清蛋白电泳、免 疫固定、高分辨率尿蛋白电泳、碱性和酸性血红蛋白电泳。 美国和德国的医院对所有的样本都做血清蛋白电泳和免疫固定 葡萄牙、西班牙、德国、奥地利、美国、墨西哥仍做脂蛋白电泳 5 免疫固定基础理论部分 1. 做免疫固定电泳时，如何考虑样本稀释问 1） 根据总蛋白浓度，做血清蛋白电泳实验 2） 如果血清蛋白电泳出现了单克隆峰，通过 Elfolab 软件 SMC 功能计算单克隆峰的浓度 3） 单克隆峰的浓度应在 5－7g/l，如果超过 5－7 g/l 则需将样本稀释在此范围内。 4） 做免疫固定时，SPE 泳道的样本不需稀释，而其他泳道需加稀释的样本 2. 如果样本中的单克隆峰的浓度>5-7g/l, 为什么只稀释 IgG/ IgA/ IgM /κ/λ泳道的样本而不稀 释 SPE 泳道的样本 SPE 泳道只是做为血清蛋白电泳的参照，如果含有单克隆带如 IgG 单克隆则蛋白电泳图谱 中只是含有 IgG 分子。而其他泳道加了相应的抗血清，由于抗原抗体反应具有高度的特异 性且形成了抗原抗体大分子复合物，造成在免疫固定的结果中单克隆带型变宽，如果不稀 释“标有 IgG “泳道的样本则会造成免疫固定中的单克隆带型宽于 SPE 中单克隆的带型，这 种情况很容易出现口形。 3. 免疫固定出现口形结果的后果？ 很难区分是多个单克隆还是单个单克隆？ 4. 当血清蛋白电泳图谱中出现了可疑的单克隆成分，但免疫固定的结果确不是阳性，应如何解 决此问题 a) 回顾和分析所做的实验步骤，必要时需重新做此实验 b) 此种样本可能会有纤维蛋白原出现 c) 细菌污染 d) 样本反复冻溶导致蛋白质的结构发生破坏 e) 高水平的 CRP f) 特殊病例：如果出现高γ区域成分，类似单克隆成分，则要检测类风湿因子 IgG or IgM 5. 如果在血清蛋白电泳的峰型图谱中出现了两个单克隆峰，最高的单克隆峰 20g/l(>10g/l)，小 的单克隆峰为 2g/l，其稀释样本的原则是什么？ 最终的稀释比例依赖于小的单克隆峰的蛋白最终浓度（因为要保证低浓度的单克隆峰在稀释 后其灵敏度仍落在 IFE 检测的灵敏度范围内） 一般情况下，依据下列步骤进行 1）先计算最大高峰的稀释比例 2）根据稀释比例观察第二个高峰的稀释比例是否低于其免疫固定的灵敏度，如果可以则此 稀释比例成立，如果不可以则以第二个峰的稀释比例为主。 6 碱性血红蛋白电泳基础理论 1. 处理样本时为何要反复洗涤 RBC? 最主要的原因是应为血浆里有结合珠蛋白，他可以结合血红蛋白。 2. 清洗 RBC 时，应以什么原则来区分 RBC 洗涤的好与坏？ 直至上清液为无色为止。 3. 血红蛋白电泳中最终的裂解环境中的 Hb 的浓度控制在 2-4g/dl 4. 临床上为何要做碱性血红蛋白电泳？ 1） 检测 HbA HbA2 HbF 百分比变化 HbA 有携带 O2 和结合 NO 的能力，HbA 与 NO 结合有疏通血管的作用，如果 HbA 比例急剧降低，则可能会造成血管堵塞最终导致冠心病。 所以 HbA 的生理作用是很重要的。 因此血红蛋白电泳的重要性在其于可用于产前的筛选。HbA 的任何改变都会引起临床 上的异常改变 2）检测异常的 Hb 如 HbS, Fast Hb 5. 当做血红蛋白电泳时应注意哪些？ 1）要有质控做对照 2）全血标本的储存不要超过 2 周 3) 标本溶血后要在当天做实验 6 碱性血红蛋白电泳的带型 血红蛋白类型 占血红蛋白浓度百分比 HbA or HbA1 95-98% HbA2 1.5-3.5% HbF ≤2% HbF 在低浓度范围内（≤6-7%），在图谱中的带型弥散 HbF>7%，在图谱中可表现出完整的带型 因此，利用碱性血红蛋白电泳技术来测定 HbF 浓度含量是不合理的。 HbA2 与 HbF 也可用 HPLC 方法实现。 血清蛋白电泳的质控 1. 血清蛋白电泳的质控与 calibrator 的区别 蛋白电泳的质控结果只是某个范围，实际测定结果只要落到此范围即表明此实验是成功的； calibrator 是含有特定靶值的，实际测定结果应与靶值一致。 2. 血清蛋白质控品 z 来源于群体的人血清 z 主要含有的是人血清中的蛋白成分，脂类物质已经除去。 为什么要用质控品 z 检查蛋白电泳分离蛋白的好与坏 z 检差各成分是否在可容许范围内 7 3. 当用户怀疑厂家的质控值的准确性时应怎么办？ 1) 取正常人的血清样本 10 个 2) 用定量分析方法测定出白蛋白和总 Ig 的浓度做为准确值 3) 将此 10 个血清样本做 SPE 4) 将白蛋白和γ区域的百分比×总蛋白浓度 5) 比较白蛋白的计算值与准确值的差异，计算出校正系数，并将校正系数输入到 elfolab 软件中 为什么只计算白蛋白和γ区域的值？ 1) 白蛋白代表的是单一成分即均一成分，γ区域代表的是非均一成分，都具有代表性 2) 相对α1，α2，β区域所代表的不仅仅是一种成分，很难将计算值与准确值比较。 3) alb 与γ区域分别在峰型图的头部和尾部，这两个波形很容易划分