蛋白质Z及凝血因子在恶性实体瘤患者中的变化

·101· ·论 著 · 蛋白质2及凝血因子在恶性实体瘤患者中的变化 关则兵，潘学谊’.蔡小燕(广东药学院附属第一医院血液科，广州 510080) 摘 要:目的 研究蛋白质2(proteinZ，Pz)在恶性肿瘤患者中的变化，并探讨其临床意义。方法 对86例恶 性肿瘤患者的PZ、FVll:C、F珊:C、FX:C、FXI:C进行测定。PZ用ELISA法，血浆F珊:C、FVlll:C、FX:C、FXI:C用一期法 与ACL一2000全自动凝血仪进行测定。45名健康人作为对照。同时对复发转移组与未复发转移组作分析比较。结果 恶性肿瘤组的Pz水平(1210。89ng/ml士251.13n岁ml)明显下降(对照组为2378.83n酬ml土429.sing/ml)，FVll:C、F 姗:C、FX:C、FXI:C水平明显升高，分别为162.42%上36.57%、201.95%士77.54%、120.27%士77.54%、145.88%士 56.48%(对照组分别为116.70%士28.80%、70.15%士21.28%、76.13%上19.26%、77.23%士16。22%)，p值均< 0.01。相关研究中，发现恶性肿瘤组及对照组中的PZ水平与F姐:C、F姗:C、FX:C水平之间均存在明显负相关(尸值均 <0.001)，而Pz与FXI:C无相关性(尸>0.05)。对肿瘤的病情研究发现，复发转移组Pz、FW:C、F珊:C、FX:C、Fxl:C 与未复发转移组比较，转移组的咒更低，FVll:c、F姗:C、FX:C、FXI:c水平更高(尸<0.01)。结论 Pz水平在恶性肿 瘤患者中明显减低，且与病情有关。Pz与F邓:C、F姗:C、FX:C存在明显负相关。提示Pz缺乏可能是恶性肿瘤患者获 得性易栓症的一个新的发病因素。 关键词: 恶性肿瘤; 蛋白质Z; FVll:C; F珊:C; Fx:C; FXI:c 仁中图分类号]R73.3 [文献标志码〕A [文章编号〕1009一6213(2007)03一101一04 TheChangeofProteinZandPlasmaCoaguIantFactorsin玫tients初th Malignant Tumors GUANZe一bing，PANXue一yi，CAIXiao一yan (DepartmentofHematolo群，theFirstAffiliatedHospitalofGuangdongUniversityofPharmacy，Guangzhousl0080，China) Abstrac‘，objectiveTOs，udyclinicalsignificanceofpro‘einz(pZ)inpa，ie平swi，hmalignan， tumors.Methods PZwasdetectedwithELISAmethod，plasmaFVll:C;F孤:C;FX:CandFXI:Cwere testedbyALC一ZO00fullyautomaticcoagulant一meterin86patientswithmalignanttumors.Thecorrelationbe- tweenrelapsedandun一relapsedpatientswasanalysed.45healthypeoPlewereascontrol.Results Thelevel ofPzwereremarkablylower(1210.89n岁ml士251.13n岁mlvs2378.83n留ml士429.sln岁ml，p< 0.01).FVll:c.FVlll:c，rx:c.FXI:Cweremuchhigherinmalignanttumorsroupthanthoseincontrol group(162.42%士36.57%vsll6.70%士28.80%，201.95%士77.54%vs70.15%土21.28%，120.27% 士77.54%vs76.13%士19.26%，145.88%士56.48%vs77.23%士16.22%，respectively，P<0.01). ThelevelofPzintumorgroupandcontrolgrouphasasignificantne色ativecorrelationwithlevelofFVll:C、 F恤:C、FX:C(P<0.001)，PZhasnoCorrelatiQnwithFXI:C(P>0.05).ThelevelofPZ waslowe rand theplasmaFVll:C，rVlll:C，FX:C，FXI:Cwashigheringroupofrecurmetastaticpatientsthanthosein groupofnon一recur一metastaticones(P<0.01).Conclusion PZwassignificantlylowerandpethapswasa newmechanism Keywords oftheacquiredhypercoaguIabIestateinpatientswithmalignanttumor. Malignanttumors; ProteinZ; F珊:C; F珊:C; FX:C; Fxl:C 蛋白质2(proteinz，Pz)是近年来发现的一种新 的抗凝因子，为蛋白2依赖性蛋白酶抑制性抑制凝血 因子Xa的辅因子，其临床上意义正在评估。新近文 基金项目:广东省自然科学基金资助项目(。5002857) *通讯作者:xypanss@163.com 献报道表明，PZ缺乏与缺血性脑卒中和急性冠脉综合 征的危险性明显增加相关，但其确切机制不明。对恶 性实体瘤的陀水平至今未见报道。为此，我们对86 例恶性肿瘤患者观察了Pz及其相关凝血因子珊:C、 珊:C、X:C、Xl:C含量的变化，藉以探讨PZ在恶性肿 ·102 ChineseJoumalofThrombosisandHemostasis2007Voll2No3 瘤中的变化以及其与血栓性疾病的关系。 1 资料与方法 1.1 研究对象 恶性肿瘤组86例，男性45例，女性 41例，中位年龄59.8(33一82)岁。其中肺癌组34 例，肠癌组24例，乳腺癌组12例，恶性淋巴瘤组18 例;复发转移组39例，未复发转移组47例。全部病例 均经病理或细胞学诊断。正常对照组45例，男性25 例，女性20例，中位年龄57.5(28一71)岁，均为门诊 正常体检者，且证实其身体健康，未患高血压、高脂血 症、冠心病、短暂性脑缺血、糖尿病、尿毒症、周围血管 疾病。两组人员受试前2周均未吸烟或使用抗凝、溶 血栓剂。 1.2 样本采集与保存 两组人员在空腹条件下于前 肘静脉采血4ml。血液与0.13moFL构椽酸钠9:1 于试管内混合、抗凝，室温下放置不超过lh，即以 3000r/min离心ZOmin，收集血浆置于一40℃冰箱保 持测，在3个月内完成血浆FVll:c、F姗:c丫Fx:c、F Xl:C指标的测定。 1.3 主要试剂和检测方法 咫 用EHSA法检测，试 剂盒由法国Stag。公司提供，在Moded680酶标仪上 扫描测定。F珊:C、F孤:C、FX:C、FXI:C用一期法在 ACL一2000全自动凝血仪上进行测定。所有血浆标本 都在试验前由冰箱内取出，37℃水浴，romin内融化， 如发现凝块或絮状沉淀则弃用。各项试剂、正常人血 浆(标准血浆)均由美国BioMefieux公司提供。 1.4 统计学处理 用SPSSVH.0进行数据处理，实 验结果用无士、表示。以健康体检者作为对照，各组差 异采用方差分析，若F>0.05则采用t检验，以p< 0.05具有统计学意义。 2 结 果 2.1 恶性肿瘤组Pz、凝血因子活性水平测定结果见 表1。 表1 恶性肿瘤组PZ、凝血因子水平(无士5) 组别 例数 PZ(n岁ml) 姐:C(%) F珊:C(%) FX:C(%) 对照组 2378.74士271.93 116，70士28.80 70.15士21.28 76 13士1926 恶性肿瘤组 1210.89士251.13* 162.42士36.57* 201.95土77.54* 120.27士7754* 申恶性肿瘤组与对照组比尸<0.01 由表1可见恶性肿瘤组Pz低于对照组，血浆凝血 2.2 86例不同种恶性肿瘤Pz及各凝血因子活性水 因子活性明显高于对照组(尸<0.01)。 平测定结果见表2。 表2 86例不同种恶性肿瘤组蛋白质2、血凝因子水平(无士，) 组别 例数 Pz(n留ml) FVll:C(%) F姗:C(%) FX:C(%) FXI:C(%) ??????? ? ?? ?? ? ?? ? ?? ? 肺癌组 74士 27193 161.52士34.12 214.74士76.48 06士60.7 肠癌组 1159 1277 1295 1038 .48士247.10 .08士214.89 24士40.60 67士67.40 145.58士3881 125.52士35.23 81士72.33 乳腺癌组 50士26.12 08士130.39 139.25士38.35 126.08士34.47 ??????? ? ? ? ，?? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 淋巴瘤组 .68士178.81 16116土34.16 180.84士35.69 113.84士39.95 159.53土38.51 注:肺癌与乳腺癌比尸<0.05 由表2可看出，除肺癌F孤:C比乳腺癌增高外(尸 <0.05)，其余各组间Pz及凝血因子比差异均无显著 性(P值均>0.05)。 2.3 复发转移组与未复发转移组恶性肿瘤Pz及各 凝血因子活性水平测定结果见表3 ·103· 表3 复发转移组与未复发转移组恶性肿瘤PZ、凝血因子水平标士:) 组别 例数 PZ(n『1111) Vll:C(%) F恤:C(%) FX:C(%) FXI:C(%) 未复发转移组 复发转移组 1352.08土194.89 136.09士26.63 160.90土26.80 117.31土26.43 99夕.56土22。63* 20676士28.63申 237.82士75.94. 101.89士23.44 162.53土32.92. 187.61士32.73. ? ? ? ?? ? 申复发转移组与未发转移组比尸<0001 由表3可见，PZ在复发转移恶性肿瘤组较未复发 转移恶性肿瘤组降低，而血浆凝血因子活性明显增高 组(P<0.001)。 2.4 Pz与4种凝血因子的相关性结果见表4 表4 PZ与4种凝血因子的相关性 组别 Pz与FW:CPZ与F姗:CPZ与FX:CPz与FXI:C 对照组 一0.414. 一0.315. 一0.361. 一0.026 恶性肿瘤组 一0.572水 一0.32申 一0465. 一0.031 注:*尸<0.01 相关性分析显示Pz与F珊:C、F珊:C、Fx:C水平 在健康人和患者中均有明显负相关(尸均<0.001)， 而PZ与FXI:C相关性不明显(P>0.05)。 3 讨 论 恶性肿瘤患者常存在血液高凝状态，而高凝状态 对肿瘤的生长和转移具有重要意义。sun等〔’〕指出大 约50%以上的肿瘤病人发生凝血机制异常。血栓形 成是一类多因素疾病，近年Pz在血栓形成的作用引 起了人们的兴趣。PZ是由肝脏合成的一种维生素K 依赖的血浆蛋白，人蛋白质2的分子量为62ku，其基 因定位13934，结构上与其他维生素K依赖性F姐、F R、FX及Pc相似【’一4〕，但缺乏活化点及催化的组氨酸 残基及丝氨酸残基，故无蛋白水解作用。在蛋白质2 依赖性蛋白酶抑制剂(proteinZ一dependentproteas。in- hibitor，ZPI)抑制FXa的作用中，PZ作为一种辅助因 子使zPI对FXIa的抑制作用增强1000倍以上[’一5〕。 Pz在临床上的意义尚不清楚，近年来的文献中 开始有了一些报道。PZ与血栓的关系现有两种不同 的观点，一种认为PZ升高与血栓形成有关，另一种认 为Pz降低与血栓形成有关，但都认为Pz血浆浓度变 化是血栓形成的因素。PZ含量在恶性实体肿瘤中的 变化至今尚无报道。unda:等[’]有关恶性血液肿瘤中 的报道发现。急性白血病和非何杰金氏淋巴瘤患者 血浆Pz水平与白细胞介素一6水平呈负相关。我们在 86例恶性实体肿瘤患者的研究中，发现患者PZ含量 明显低于对照组(尸<0.001)。恶性肿瘤中PZ水平 减低的机制尚不清楚。 最近Gamba等〔’“〕报道了在体外纯化系统中观察 当zPI抑制FXa活性时PZ水平对其影响，结果显示 PZ水平与Fxa呈负相关。为此，我们在恶性肿瘤患 者中检测PZ水平的同时也平行检测了其他维生素K 依赖的凝血因子F姐:C、F现:C、FX:C，FXI:C。发现 F珊:c、F珊:c、Fx:c、Fxl:c明显提高，即在Pz下降 同时其FVll:C、FVlll:C、FX:CJXl:C升高。为此，我 们对PZ水平与F珊、F珊、FX、FXI活性之间的关系采 用Spearman等级相关法进行相关性分析，结果显示， Pz与FVll:c、F孤:c、Fx:c水平在健康人和患者中均 存在明显负相关(尸均<0.001)，而PZ与FXI:C相关 J性不明显(尸>0.05)。这表明在患者中所见到的血浆 F珊、F姗、Fx活性升高可能与Pz水平的降低有关。 目前的研究巳证明FVll、F恤、FX 水平升高与血栓性疾 病有关，是血栓形成的一个危险因子。F姐作为凝血 瀑布的起始酶，Fx作为凝血过程的关键酶，近年来被 视为高凝状态的危险因子。临床和实验证明，恶性肿 瘤是高凝状态的常见病理过程。有人认为肿瘤患者 血液高凝状态为扩散和转移的癌细胞聚集提供了机 会，使之停留在局部组织，加之血液淤滞，携带免疫防 御因素减少，更有利于癌细胞的生长，这可能是恶性 肿瘤疗效不佳的原因[z0，川。因此有理由推测F姐、F 现、Fx水平可能与恶性肿瘤，特别是肿瘤转移有密切 关系〔’“，2‘了。为此我们提出，Pz’水平下降所致的F珊、 F姗、FX活性和水平的升高可能是Pz下降导致恶性 肿瘤高凝状态形成的一个新的机制。这在目前的文 献中尚未见类似报 恶性肿瘤高凝状态 。我们首次观察并提出了PZ在 的意义。 此外，我们也分析了PZ水平与疾病发病间的关 系，结果显示咒水平与病情间存在密切关系。在复 发转移组Pz、FW:C、FVlll:C、FX:C、FXI:C与未复发 转移组比较，有明显差异(尸<0.01)。Pz水平的下降 (下转第106 页) ·106· ChineseJournalofThrombosisandHemostasis2007Voll2No3 并DVT或PE，下肢DvT病人在外科取栓或介人溶血 栓治疗前。 3.3 DVT介人治疗的原则 急慢性DVT的普通治 疗是静脉内注射肝素和口服华法林进行抗凝治疗，但 肝素和华法林很难防止进一步的血栓形成和降低肺 栓塞的可能。文献报道有大约10%的患者在抗凝治 疗的10d内血栓溶解，而有40%的患者尽管增加肝 素用量栓塞仍然加重[’〕。以笔者的经验，发生在骼静 脉、锁骨下静脉、股静脉等主干的大血栓和急性血栓 用全身抗凝治疗很难完全溶解，经3一sd抗凝治疗 症状无缓解应选择介人溶血栓治疗。从本组病例来 看，主干深静脉(骼、股、锁骨下静脉)的DVT溶血栓 疗效明显优于非主干静脉DVT者。这主要是因为病 变的静脉内腔越大，血流恢复后流速越快，保持管腔 内持续通畅的可能性就越大。选择介人治疗必须严 格遵循以下原则:①主干静脉急性DVT患者，经抗凝 治疗无效，可选择腔内插管溶血栓、球囊PTA，支架置 人仅限于骼静脉病变;②血栓位于静脉瓣处不能采用 球囊扩张，静脉瓣损伤后血液返流会加重DvT。③胭 静脉水平以下的深静脉栓塞范围较大，抗凝治疗无效 时，可选择局部插管或足背静脉置管持续溶血栓;④ 溶血栓术前应有清晰的深静脉造影，明确阻塞的部位 和程度。⑤慢性DVT或范围广泛(涉及整侧肢体全 程静脉)者，不主张插管溶血栓治疗。 总之，腔静脉滤器保护下的介人治疗使栓塞的血 管迅速开通，恢复血流;其肺动脉栓塞和出血的并发 症可控制到最低限度的，故本是DVT的一种有效 而安全的治疗手段。 参考文献 〔1〕 兰锡纯，冯卓荣.心脏血管外科学[M].北京:人民卫生出版社， 2002:1295 [21 BARRITTDW，JORDANSC.Anticoa子11antdru邵inthetreatment。f pulmon叼 embolism:acontrolledClinicaltrial[J]，压ncet，1960，1: 1309一1313. 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(收稿日期:2007一03一20) (上接第103页) 程度也反映了疾病的病理过程，PZ水平随着疾病的反 复发作转移而下降更为明显。所以Pz水平下降不仅 与动脉血栓形成相关，还可能是恶性肿瘤发病的一个 危险因子。因此定期复查Pz、FVll:c、F珊:c、Fx:c、 FXI:C对于及早发现高凝倾向，并加以预防和治疗均 具有一定参考价值。 参考文献 [1〕 SUNNCL，BOWIEEJW，KAzMIERFj，etal.Bloodco卿iation studiesinpatientswithcancer[J].M盯oClinP， ，1974，49:365 [2〕 FUJIMAKIK，YAMAzAKIT，TANIWAKIM，etal.Thegenefor humanproteinZislocalizedtochromosomel3atband够4andis codedbyeightre即larexonsandonealtemativeexon[J].Biochem- istI’y，1998，37:6338一6346. [3〕 ICHINOSEA，TAKEYAH，ESPLINGE，etalAmin。acid，- quenceofhumanproteinZavitaminK一dependentplasmaglyc叩ro- Commun，1990，171:661一668 仁5〕 熊石龙，文志斌.新近发现的一种天然抗凝蛋白:蛋白质2依赖 性蛋白.酶抑制物[J]血栓与止血学，2001，7:173一175. 仁6] HANX，FIEHLERR，BROZEGJ.Characterizationoftheprotein 2一dependentproteaseinhibitor仁J」.Blood，加00，96:3049一055. [7〕 HANX，FIEHLER，BROZEGJ.lsolationofap以einZ一depend- entplasmap呱aseinhibitor[J].ProcNailAcadsciUSA，1998， 95:9250习255. [8] HANX，HUANGZF，FIEHLERR，etal.Theproteinz一dependent proteaseinhibitorisase甲in[J」Biochemist叮，1999，38:11073- 11078. 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