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葡萄球菌血浆凝固酶试验的探讨

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葡萄球菌血浆凝固酶试验的探讨 ·270· 四JI『医学 2001年 3月第 22卷(第 3期) SichuanMedical J吲r靠Ⅱ ,2001,Vot 22,No 3 建立一套指导化疗药物选择和预测化疗方案效果的办 法,化疗的体外药敏试验由此应运而生 。 据细胞生物学研究,在细胞中毒的过程中,线粒体 呼吸链上的琥珀酸脱氢酶能脱下琥珀酸的氢原子,使 之氧化成延胡索酸,而染料 MTT作为脱下氢原子的 接受剂,被还原成蓝紫色的产物,通过分光光度计检测 颜色的深浅变化,能定量的反映细胞效和/或活性的变 化。具有代谢活性的细胞,无论处于静...
葡萄球菌血浆凝固酶试验的探讨
·270· 四JI『医学 2001年 3月第 22卷(第 3期) SichuanMedical J吲r靠Ⅱ ,2001,Vot 22,No 3 建立一套指导化疗药物选择和预测化疗效果的办 法,化疗的体外药敏试验由此应运而生 。 据细胞生物学研究,在细胞中毒的过程中,线粒体 呼吸链上的琥珀酸脱氢酶能脱下琥珀酸的氢原子,使 之氧化成延胡索酸,而染料 MTT作为脱下氢原子的 接受剂,被还原成蓝紫色的产物,通过分光光度计检测 颜色的深浅变化,能定量的反映细胞效和/或活性的变 化。具有代谢活性的细胞,无论处于静止期,还是分裂 期,都有还原 MTT的作用,还原程度与细胞活性有 关。MTT法反映了肿瘤细胞群体对药物的敏感性,具 备了简便,快速,与临床疗效相关性好的特点“。“。因此 MTT法药敏试验近几年较广泛应用于临床恶性肿瘤 (白血病,胃癌,肺癌,脑胶质瘤,乳腺癌)的化疗药敏检 测“ ,指导部分肿瘤的预见性化疗已取得了可喜的 效果,但专就乳腺癌化疗药敏的报道并不太多。 我们用 MTT法检测了 3O例 I~ Ⅲ期首次治疗 的乳腺癌病人肿瘤细胞化疗药药敏,结果显示对 50 以上的乳腺癌病人肿瘤细胞能达到有效抑制的药物 有:CBP、BLM、5-Fu、DDP、MMC、HCPT、MTX。能有 效 抑制 4O 病人肿瘤细 胞的药物有:EPI、DTIC、 ADM、THP。说明乳腺癌对上述 u种化疗药物敏感; 其中CBP、HCPT、DDP、BI M 4种药物对乳腺癌细胞 达到中度以上抑制的比率最高,说明乳腺癌对这 4种 药物较为敏感。以上结果可供临床参考。从本结果还 可以看到,即使上述对乳腺癌较敏感的药物中也存在 不敏感的个体,如:CBP(7/30)例不敏感)、BLM(8/30 例不敏感)、5一Fu(10/30例不敏感)、DDP(11/30例不 敏感)、MMC(1l/30例不敏感),而不敏感的药物中也 有较敏感的个体,如:VM一26(6/30,2O 敏感),由此 可见:不同个体对相同药物的敏感性差异很大,盲目化 疗实在不可取,进一步说明了化疗个体化的重要性和 必要性。 参 考 文 献 1 BeLLamy W T.Prediction of response to drug therapy of caDcer:a review ofin vitro assays.Drugs,i992,44:690 2 徐建明.等 .^ 乳腺癌原代培养体外药敏试验的 .中华肿瘤杂 志,1995,17:100 3 辛华雯t等 .MTT法在恶性肿瘤体外药戢试验中的枯床应用 .宴用 癌症 杂志 ,l994,9(2);73 4 韩硗风,等 MTT法体外药敏试验研究进展 肿瘤,1999.19(1);55 S CampLing BG,et a1.Chemosenskivtty test of small cell lung cance~ using the MTT assay.Brit】Cancer,1991. (1):75 6 王本忠 等 .改盎MTT法检捌胃癌乳腺癌体外药物敏感性 .临床 外科杂志 ,1998,6(5);258 7 姜 曙,等 .MTTj击检捌神经腔质寝对化疗药物敏癌性的研究 华 西医科大学学报 .2000,31(2):191 葡萄球菌血浆凝固酶试验的探讨 刘 华,江 艳,周学燕 (四川省人民医院,四川 成都 610072) 【摘要】 目的 比较葡萄球茸凝固醇试验 的两种:玻片法和试管法,拟证明此两种方法不能相互替代。方法 采 用玻片法和试管法,用四种抗凝荆(枸椽酸蚺、EDTA、肝素、赋革酸盐)抗凝的人血浆和 EDTA抗凝的鬼血荣对 42株葡萄 球茴进行凝固酶试验。结果 玻片法凝固酶试验假阳性率琦41.67 ,试管法凝 固醇试验元假阳性和假明性}用直接玻片 法测定凝策 目子假 阳性 高达 35.5 。结论 证明 了凝策 因子 和凝 固醇 试验是 两种 不相关的试 验 ,凝 固酶试验不能用玻 片 法代替试管法,井且凝聚因子应按玻 片问接法操作。四种抗凝荆人血浆和兔血荣凝固试验结果一致。 【关蕾词】 血荣凝固醇试验 葡萄球茸 【中田分类号】 R446.5 【文献标识码】 B 【文章编号】 1004-0501(2001)03—0270 02 为了进一步弄清葡萄球菌凝聚因子试验(即玻片 法)与血浆凝固酶试验(即试管法)问的相互关系,和临 床常规实验采用何种抗凝血浆替代 EDTA抗凝兔血 浆,以及探讨凝聚因子易出现假阳性的原因,我们收集 了42株葡萄球菌,严格按《全国临床检验》进 行操作,结果报告如下。 l 材料与方法 1.1 菌株来源:从住院和门诊病人的痰、咽拭子、分泌 物、脓 等标 本 分离 出 42株 葡 萄球 菌,标 准菌 株 ATCC25923由天坛生物制品鉴定所提供。参考菌株 溶血葡萄球菌由卫生部临检中心提供。 1.2 血浆来源:抽取健康体检者的血,一份血分别打 人四种抗凝剂的抗凝试管中(7 EDTA、1.25U/ml肝 素、1.09枸椽酸钠、1o 双草酸盐的抗凝管)。 1.3 试验方法:以 EDTA抗凝的兔血浆做为对照。 , 用四种抗凝人血浆,按《全国临床检验操作规程》推荐 的凝固酶试验方法(玻片法与试管法)对 42株葡萄球 维普资讯 http://www.cqvip.com 四}ll医学 ZOO1年 3月第 22卷(第 3期) SichuanMedical-,删~ ,Z001.V 22tⅣ。.3 ·27l· 菌进行凝固酶试验。同时,用标准菌株 ATcc25923和 参考菌株溶血葡萄球菌来质控整个试验。 I.4 结果 :见表 。 1.4.1 从表中可见 42株葡萄球菌玻片法阳性 25株, 试管法阳性 l5株,如仅以玻片法阳性就判断为凝固酶 阳性葡萄球菌,假阳性率为41.67 (见表)。 1.4.2 42株葡萄球菌严格按《全国临床检验操作规 程》推荐的凝聚因子试验(简称间接玻片法)方法操作, 结果有 17株阴性,如直接挑该血浆置于洁净玻片上,, 挑取菌落与血浆一起制成菌悬液,观察是否出现明显 凝块(简称直接玻片法)的方法操作,却有 6株为阳性, 直接玻片法假阳性率高达 35.3 。 1.4.3 四种抗凝剂抗凝的人血浆,无论是玻片法还是 试管法,凝固酶试验结果一致;试管法中各种不同抗凝 剂人血浆与EDTA抗凝的兔血浆结果一致}玻片法中 有2株菌人血浆与兔血浆结果不符(表 1)。 表 葡萄球菌凝固酶玻片法与试管法结果比较 2 讨 论 2.1 传统概念葡萄球菌血浆凝固酶用玻片法检测,而 现代概念玻片法是检测葡萄球菌的凝聚因子、试管法 检测血浆凝固酶。凝聚因子阳性的细菌有金黄色葡萄 球菌、里昂葡萄球菌、施莱福葡萄施莱福亚种及部分中 间型葡萄球菌。血浆凝固酶试验阳性的葡萄球菌只有 金黄色葡萄球菌(两个亚种)、中间型葡萄球菌、海豚葡 萄球菌和部分猪葡萄球菌,本文研究结果显示以玻片 法代替试管法凝固酶试验假阳性率达 41.67 ,同时 《全国临床检验操作规程》“ 也提出,有 1O ~15%金 黄色葡萄球菌凝聚因子星假阴性,故凝聚因子和葡萄 球菌血浆凝固酶是两个不相关的试验 ,凝固酶试验 不能用玻片法代替试营法,否则将会把凝固酶阴性的 葡萄球菌鉴定成凝固酶阳性的葡萄球菌,同时也会漏 检凝固酶阳性的葡萄球菌,但到目前为止,仍有不少医 院微生物实验室对葡萄球菌的鉴定凝固酶试验只采用 玻片法,笔者希望不断更新知识,改进试验方法。 2.2 国内不少实验室简化操作,用直接法做凝聚因子 试验,本文结果显示假阳性率高达33.3 。例如:表皮 葡萄球菌、溶血葡萄球菌、腐生葡萄菌等被错误鉴定为 施氏葡萄球菌或里昂葡萄球菌,所以要正确掌握凝聚 因子试验方法,即间接玻片法,取 1环蒸馏水于洁净的 玻片上,用接种环挑取待检菌于蒸馏水中,制成浓的菌 悬液,无自凝现象,然后加一环家兔血浆混台,10秒内 观察结果,出现明显凝块为阳性,否则为阴性。:。 2.3 在一些没有动物实验的中、小型医院,用 EDTA 抗凝的兔血浆根困难,故它能否用人血浆替代 ,用什么 抗凝剂抗凝的人血浆最佳,一直是人们关注的重要问 题,本文设计了一般临床实验室常用的四种抗凝剂: EDTA、枸椽酸钠、肝素、双草酸盐,并为了消除不同健 康体检者血浆中纤维蛋白原对试验结果带来的不可比 性,我们抽取一个健康体检者的血分别打人四种抗凝 管中,用这四种人血浆来检测同一株菌,实验结果表 明,人血浆与兔血浆无论是凝聚因子还是凝固酶试验, 符合率都很高(P<0.05),各种不同抗凝剂抗凝的人 血浆结果一致,因此在临床工作中,完全可以根据医 院、本科室的实际情况选择抗凝血浆。 参 考 文 献 i 叶应妩,等主编.全国牺床检验操作规程 .第 2版 .南京 东南太学 出版牡 .1997.478 2 高 屹 .鲴茁血浆凝固爵试齄有几种?如何使用 中华医学检验杂 志,1998.9(22)增刊 ,35 3 高 屹 .如何做好葡萄球苗的凝聚因子试验 .中华医学检验杂志. i 999,8(22)增刊 :43 围围岛围 回国回围 维普资讯 http://www.cqvip.com
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