不同抗凝剂,血浆影响葡萄球菌玻片法血浆凝固酶试验的评价

f 第一军医大学学报 1999年第19卷第4期 不同抗凝剂、血浆影响葡萄球菌玻片法血浆凝固酶试验的评价 王露霞I石凌波I徐德兴’ 刘 刃 陆 勤 (’广州军区广州总医院检验科，广州，51 001O； 解放 蕊 院检验科，广州，510602) —— 脚 R~7g,ll 摘要： 目的 探讨玻片法血浆葡萄球菌凝固酶试验的最佳血浆、抗凝剂和稀释度并解决假阳性问题，提高其检测的敏感性 和特异性。方法 用 EDTA、肝素钠及以草酸盐抗凝及稀释度不同的人、兔血浆对 200株葡萄球菌试管法进行玻片法血浆 凝固酶试验，以试管法为金标准作分析比较 结果 分别用 EDTA抗凝的兔血浆、肝素钠抗凝的兔血浆及草酸盐抗凝的人 血浆，在不同的稀释度时其诊断的敏感性和特异性各不相同，以EDTA抗凝的兔血浆为最佳，但是 EDTA抗凝的兔血浆原 渣和最佳稀释度无明显差异 结论 血浆浓度及采用何种血浆、何种抗凝剂直接影响玻片法血浆凝固酶试验的诊断效率。 三种抗凝血浆最佳稀释度范围均为l：16～1：32。 关键词：堕童蔓堕! 鲞堑旦堕 苎 塑L 吱畸 中国分类号：R446．5 血浆凝固酶试验是鉴定金黄色葡萄球菌的主 要试验，其优点是快速、简便，但易出现假阳性。 试管法虽然准确可靠，但繁琐复杂、反应时间长。 为此，我们用人、兔的不同抗凝血浆和稀释血浆 对临床分离的 200株葡萄球菌进行玻片法血浆凝 固酶试验，以试管法为金标准，探讨玻片法血浆 凝固酶试验的晟佳血浆、抗凝剂和稀释度，从而 解决了假阳性问题。 I材料与方法 I．1材料 I．I．I茼株来源 200株葡萄球菌从本院临床病人的 血、伤口分泌物、前列腺液、引流液、脑脊液、 尿及咽拭子分离所得。 I．I．2参考茼株 金黄色葡萄 球菌A T C C 25923， 皮葡萄球菌A2 T C C 26069。 I．1．3仪器与试剂 Vitek．AMS 自动微生物分析 仪．法国Bio Meriec公司制造：AMS专用革兰氏 阳性菌鉴定卡 (GPI卡)；混合人血浆、家兔血浆； 1％草酸盐 (北京生化试剂厂)：250 U／ml肝素钠 (上海生物化学制药厂)：108 m L EDAT．Na2(北 京化工厂)。 1．1．4 医学试验评价系统软件 由本科研制提供。 1．2 方法 1．2．I常规茼株鉴定 革兰氏染色镜检， 触酶试验， 菌落形态，溶血状态，葡萄糖 O．F试验，甘露醇 发酵试验，耐热D N A及生化反应。菌落鉴定按 《全国临床检验操作规程》(第二版)。 1．2．2玻片法 血浆原液、1：2、I|4、I：8、1：16、1：32、 王露箍．女．I 960年出生；主管技师 I：64和 I：128于清洁玻片上，各挑取2个葡萄球菌 落与上述血浆混合，10 s内观察结果，出现肉跟可 见的粗大颗粒或小凝块为阳性，否则为阴 性。以 标准株金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球作阳性与阴 性对照，并以同样的方法用生理盐水作空白对照。 I．2．3斌管法 取无菌试管7支，分别加血浆原液、 I：2、1：4、1：8、1：I6、1：32、I：64稀释血浆各0．5 ml， 各管加待检的生理盐水菌悬液O．5 ml(菌液的浓度 为一个麦氏单位)。实际的稀释度分别为 I：2、I：4、 1：8、 1：I6、I：32、I：64和 I：I28，混匀后放置 37℃ 水浴中，每30rain观察一次结果，阳性多在30rain 到2 h出现凝固。阴性均在24 h内仍不出现凝固。 同样以标准菌株金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌 作阳性、阴性对照，并以同样的方法用生理盐水 作空白对照。 2结果 2．1在200株葡萄球菌中EDTA抗凝的兔血浆、肝 素钠抗凝的兔血浆和草酸盐抗凝的人血浆在不同 的稀释度，其诊断的敏感性和特异性各不相同。 EDTA抗凝血浆原液敏摩性94％、特异性93％，1：I6 和 I：32敏感性 100~,6，特异性99％：肝素钠抗凝 血浆原液敏感性94％、特异性78％。I：16和1：32敏 感性 1 00％，特异性99％{草酸盐抗凝人血浆原液 敏感性 94％，特异 性48％，1：l6和 I：32敏感性 1 00％，特异性99％。可见不同抗凝剂的人、兔血 浆最佳稀释范围均在I：16I：32。 3讨论 玻片法血浆凝固酶试验是鉴定金黄色葡萄球 菌应用已久的方法。虽然此法快捷、简便、直观， 但由于各实验室所用的血浆来源、抗凝剂不一致， 维普资讯 http://www.cqvip.com 第一军医大学学报 1999年第 l9卷第4期 使试验结果存在一定的差异。本实验室结果表明， EDTA抗凝的免血浆，肝素钠抗凝的兔血浆与草酸 盐抗凝的人血浆原液诊断的特异性分别为 93％、 78％和48％。这可能与不同的血浆中所含凝固酶反 应因子 (CRF)不同有关【l1。不同血浆、抗凝剂在 同一稀释度下，其诊断的敏感性、特异性有很大 的差别 即使是同一血浆，稀释度不同．其诊断 的敏感性、特异性也有较大差别。但用 EDTA抗 凝的兔血浆做玻片法凝固酶试验，血浆原液与血 浆最佳稀释度没有明显的差别。由于兔血浆的收 集较人血浆的收集繁锁，大多数实验室都采用人 血浆。然而，草酸盐抗凝的人血浆和肝素钠抗凝 的兔血浆假阳性为51．5％(85／I65)、22．4％(37／]65)， 故不应该用血浆原液来做玻片法凝固酶试验．应 选用最佳稀释度，以降低假阳性。三者最佳稀释 度范围均为 1：16～1：32。有文献报道嘲，用肝素抗 凝的兔血浆做凝固酶试验无假阳性结果．本实验 与文献报道有差异。近几年来许多文献都报道玻 片法凝固酶试验用新鲜的兔血浆或人血浆．没有 注重强调血浆所用的抗凝剂，只有在 《全国临床 检验操作规程》上强调用 EDTA抗凝的兔血浆为 最好。从本实验结果来看，草酸盐抗凝的人血浆 和肝素钠抗凝的兔血浆原液玻片法凝固酶试验都 存在假阳性。 本试验中观察到兔血浆要比人血浆凝集模式 好，且出结果快。但兔血浆凝固酶试验在时间观 察上也是非常关键的，必须在 1 0 s内观察结果， 如超过 10 s可出现假阳性。建议：用草酸盐抗凝 的人血浆及肝素钠抗凝的免血浆做玻片法凝固酶 试验时，最好将血浆稀释到 1：16～I：32范围。 参考文献 1 【英V r麦克{击丁主编 医学细菌生化实验鉴定手册，北京 人民卫 生出版牡 1985 53454 2 革得恩．王秀磅，张金艳 不同种属加不同抗凝剂的血浆对金黄色 葡萄球苗凝固酶试验结果的影响 河北医学院学报．1994．15(1 j： 恶性肿瘤病人自体骨髓移植采髓术麻醉体会 罔 健 招伟贤 (第一军医大学珠江医院麻醉科，广州-510282 ) 关键词：自体骨髓移植；采髓术；席醉 中图分类号：R614 本文总结了 l8倒恶性肿瘤病人 自体骨髓移植前 白体 采髓术麻醉的体会 1临床资料 1．I病人膏料 18例 ASA I1一 III衄痛人，男性 10例， 如蛙8倒；年龄 (42．8±13．7)岁，体质量 (56．6±9．5)kg； 肺癌 7例．鼻咽癌 6例．乳癌术后转移 2倒，何杰金氏 淋巴瘤颅内转移 l倒，恶J挂淋巴瘸 l倒，精原细胞瘤术后 1倒．I8倒病人中8倒曾行肿瘸切晗术，l4倒有明确的转 移病灶．1倒 7O岁鼻咽癌颅内转移志者术前有频发室性早 搏．另l倒何杰金氏淋巴瘸颅内转移志者拌有癫痫发作史． 1．2麻醉麓术中处理 病人术前自体采血300—600 ml，用 于术中回输；术前肌注安定 l0 mg．阿托品 0．5 mg．八手 术室后 l7制痛人选择 L2—3或 Ll～2间隙行硬膜外穿刺 置管作持续硬膜外麻醉，1倒采用布比卡圄柞蛛网膜下腔 阻滞麻醉；麻醉平稳后病人取俯卧位．髂后上坪多点穿刺 轴取骨髓：其中l6倒术中培烈安定5—10 nag或莽太尼一 氟哌啶合剂I一2 ml；17倒持续硬膜外麻醉中16例麻醉效 果满意，1倒因硬膜外导管中回抽有血，麻醉建果差 政 局 健．男．i％3年出生：1995年毕业于第一军医大学：硬士，主 治医师．{}}师：电话85i43672 收稿日期 1998-04-08) 用氯胺酮麻醉下完成手术．本组平均采骨髓时间 (I54±33) rain：采取骨髓悬液 (795±276)m1．输液 (1 000±290) m1．回输 自捧血 (433±108)ml，其中 3倒麻醉后血压 心率下降明显，静脉注射麻黄素和阿托品后 ．恢复平稳． 所有痛人术后无麻醉并发症． 2讨论 2 I本组自体供髓者均为恶性肿瘸病人，病情复杂，了解 病情及预后．部分病人有手术史，对手术及麻醉恐惧 理 较重甚至拒绝治疗．术前应磬以言语安慰和药物镇静。术 前凝血功能异常、脊拄穿刺区域有骨转移灶者及循环．呼 吸功能不奎者，应避免椎管内麻醉。 2 2本组病人麻醉后俯卧杖髂后上嵴轴取骨髓，政变体拉 应待麻醉平面出现．循环稳定后，缓慢、轻柔翻身，以免 翻身后血压骤降，同时应防止压估肢体和神经；俯卧住对 通气影响较大，尤其在椎管内阻滞范围过广及应用呼吸抑 制作用强的药物时．术中麻醉平面应尽量控制在胸 l0以 下．常规监洲脒搏氧饱和度，及时了解氧合情况．适当应 用神经安定药物 慎用对呼吸卸艄强的吗啡类药物． (下转387页) 维普资讯 http://www.cqvip.com