熟地黄清蒸和九蒸九晒炮制品中还原糖含量测定

2005年7月第4期 河 南 中 医 学 院 学 报 J(XX'4AL0F呱N UNIVERSITYOF田I MEDICBE 第 20卷 总第 119期 V(】1．20 Serial No．119 ·中药研究Research into Traditional Chinese Medicine‘ 熟地黄清蒸和九蒸九晒炮制品中还原糖含量测定 Determination oftheReducing SugarContentinRadix rehnmnniae Steamed and SteamedforNineTimes and ShinedforNineTimes 张丽萍Zhang Lipiog，李 军Li Jun，张振凌Zh~ng Zhe~ing，白 雁BaiYan，王 磊Wang Lei，王晓阁Wang xia0ge 河南中医学院 Henan College of Traditional Chinese Medicine 摘要：目的：考察地黄清蒸和九蒸九晒炮制品中还原糖含量变化规律。方法：用80％甲醇溶液回流提取，全自动还原糖测定仪 测定熟地黄样品中还原糖含量。结果：还原糖在 0．002 g--0．012 g(r=0．9999)有良好的线性关系；平均回收率为 100．6％ (RSD 1．31％)，重复性 RSD 0．74％。结论：地黄在清蒸和九蒸九晒过程中，还原糖含量在一定时间和蒸晒次数范围内随着蒸 制时间的延长和蒸晒次数的增 多而增加 。 Abstract：Objective：To find the changing regularity of reducing sugar content in Radix rehmanniae steamed and steamed for nine times and shined for nine times．Methods：The analyzer of reducing sugar was used to determine the content of reducing sugar with reflHX exgraction with 80％ CH3OH．Results：The linear range was from 0．002 to 0．012 g(r 0．9999)；the average recovery rate wasl00．6％ (RSD 1 31％)；the RSD of repeatalelity was 0．74％．Conclusion：The reducing sugar content increases． 关键词 ：熟地黄；蒸晒；还原糖 ；含量 Key words：Radix rehmanniae praeparata；steamed and shined ；red ucing sugar；content 中图分类号CLC number：R283．3；R927．2文献标识码 Document code：A文章编号 Article ID：1672—6839(2005)04—0022—02 熟地黄⋯为玄参科植物地黄 Rehmannia glubinosa Lib— asch的根茎经炮制加工而成。生地黄加工成熟地黄后，其化 学成分、药理作用均发生了变化_2 J，其中还原糖含量的变 化较显著_7]。传统熟地黄炮制方法有清蒸法 和蒸晒法 ]。 本研究建立了一种新的熟地黄还原糖含量测定方法，并对生 地黄清蒸不同时间和蒸晒不同次数的样品进行含量测定，为 熟地黄炮制工艺及质量研究提供参考依据。 1 仪器与材料 SGD一111型全自动还原糖测定仪(山东省科学院生物技 术研究中心)；FA2004A型电子天平(上海精天电子仪器有限 公司)；1810一B型石英自动双重纯水蒸馏器(江苏大地仪器 厂)；RT一01中药粉碎机(浙江省温岭市大海药材器械厂)； HH一6型数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)；GX15ML 离心沉淀器(江苏江阴科研器械厂)；移液器(上海雷勃 100～ 1000／A)10．45 tan微孑L滤膜。无水葡萄糖(上海化学试剂公 司)，甲醇，硫酸铜，次甲基蓝，氢氧化钠，酒石酸钾钠，亚铁氰 化钾 ，盐酸等试剂均为纯。 地黄药材由河南省焦作市武陟县永盛药材加工厂怀药 种植基地提供，经河南中医学院中药标本馆刘若庸教授鉴定 为玄参科植物地黄 R．glubinosa。 各种熟地黄样品均由河南省焦作市武陟县永盛药材加 工厂提供 *基 金项 目：国 家科 技部 “十五”科技 攻 关 重大科 研项 目 (编号：2o01BA701A55—22) · 22 · 2 全自动还原糖测定仪工作原理 根据斐林试剂滴定原理，测定仪分别自动定量加入斐林 试剂甲液、乙液和葡萄糖校准液，加入样品液后 自动定时加 热反应，用特定波长的光电转化装置，检测滴定过程中透光 率的变化，根据电压变化曲线由仪器控制系统 自动采样、记 录、确定滴定终点。根据滴定终点时消耗标准还原糖的量， 由控制系统 自动计算出样品中的还原糖含量，并显示和打印 结果。 3 实验部分 3．1 斐林试剂和葡萄糖校准溶液的配制 斐林试剂甲液的配制：称取硫酸铜35．0 g，取 1％次甲基 蓝溶液 5．0 ml，加蒸馏水溶解后定容至3 000 ml备用。 斐林试剂乙液的配制：称取氢氧化钠 126．4 g，酒石酸钾 钠 117 0 g，亚铁氰化钾 9、4 g，加蒸馏水溶解后定容至 2 000 ml备用。 1％葡萄糖对照品溶液的配制：取无水葡萄糖(105℃干 燥至恒重)约 5．0 g，精密称定，加蒸馏水溶解，加 0．5 ml盐 酸，加蒸馏水定容至 500 ml容量瓶中备用。 0．45％葡萄糖校准溶液的配制：吸取 1％葡萄糖对照品 溶液 45 rnl，加蒸馏水定容至 100 ml。 3．2 熟地黄样品的制备 ①清蒸样品：取生地黄，洗净，置蒸锅内，加热蒸制，分别 蒸制不同时间，取出。放人干燥箱内干燥至不粘手，切厚片， 干燥即得。②九蒸九晒样品：取生地黄，洗净，置蒸锅内，反 复蒸晒9次，取出。放入干燥箱内干燥至不粘手，切厚片，干 维普资讯 http://www.cqvip.com 2005年7月第4期 河 南 中 医 学 熟地黄清蒸 院 学 报JOURNALOFHENANUNI＼TRSITYOFCHINE~MEDICINE Detemaination of⋯ 张丽萍⋯Zhang Liping’ 第20卷 总第 ll9期 Vo1．20 Serial No．1l9 燥即得。 3。3 线性关系的考察 取干燥至恒重的无水葡萄糖2．0 g，精密称定，置 lO0 mI 容量瓶中，加 0．1 ml盐酸，加蒸馏水溶解至刻度，摇匀，分别 精密吸取上述葡萄糖溶液 l ml，2 mI，3 ml，4 mI，5 ml，6 ml， 于6个 10 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度。每次进样0．5 ml， 用还原糖测定仪测定上述标准液中还原糖含量。以测定值 Y为纵坐标，还原糖含量 X为横坐标，绘制标准曲线，得回归 方程 Y：1．0157X一0．0127，r=0、9999，明标准液中还原 糖在 0．002 g～0．012 g具有良好的线性关系。 3．4 精密度试验 取样品(清蒸 22 h)，按 3．8．1项供试品溶液的制备方法 制成供试品溶液 l份，每次吸取0．5 ml，连续测定 6次，计算 还原糖含量 ，求得 RSD 0．76％。 3．5 重复性试验 取同一批(清蒸22 h)样品 6份，精密称取，按 3．8．1项 供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，测定还原糖含量 ， RSD 0．74％，说 明方法重现性 良好。 3．6 稳定性试验 取样品(清蒸 22 h)，按 3．8．1项供试品溶液的制备方法 制成供试品溶液，分别在 0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，10 h，12 h测 定还原糖含量，RSD 2．25％，结果表明在 12 h内供试品溶液 中还原糖的含量稳定 。 3．7 加样回收率试验 精密称取 6份已知含量的样品 1．0 g，每份加入无水葡 萄糖对照品0．4 g，按 3．8．2项样品测定方法测定。还原糖 平均回收率为 100．6％，RSD 1．31％。结果见表 l。 表 1 熟地黄中还原糖 回收率测定结果 注 ：加 入量 均为 0．3996 g。 3．8 供试 品溶液的制备及含量测定 3．8．1 供试品溶液的制备 取各熟地黄样品适量，8(】℃干 燥，粉碎，过筛，得供试品粉末。取每个供试品粉末约 2．0 g， 精密称定，加 80％甲醇60 ml于烧瓶中，在 80℃水浴上回流 提取 3 h，过滤，用80％甲醇液洗涤药渣 3次，合并滤液，回收 溶剂，定容至 100 ml容量瓶中，摇匀。精密移取上述甲醇提 取液 50 ml，置蒸发皿中，在通风厨内 8(】℃水浴上挥干甲醇， 用蒸馏水溶解，转移至50 ml容量瓶中，用少量蒸馏水洗涤蒸 发皿数次，定容至刻度，摇匀。取上述水溶液 10 ml置离心管 中离心，取上清液用0．45,am微孔滤膜过滤，作为样品溶液， 备用 。 3．8．2 样品含量测定 分别精密吸取样品溶液各 0、5 ml， 注入还原糖测定仪反应池中，测定，即得。测定结果见表2。 表 2 熟地黄样品中还原糖含量测定结果 ％ 4 结果与讨论 通过样品的测定结果可知，地黄在蒸制过程中，还原糖 含量在一定时间和一定蒸晒次数范围内随着蒸制时间的延 长和蒸晒次的增多而增加。清蒸 22 h和反复蒸晒 7次含量 最高，随后含量有所降低。 本研究建立了熟地黄药材中还原糖含量测定的新方法， 经方法学考察和样品的测定，表明该方法可靠、便捷。此方 法克服了手工滴定人为造成的误差，可作为控制熟地黄药材 质量的方法 。 曾分别用 60％、80％及无水甲醇作提取溶剂，采用不同 时间(1 h，2 h，3 h，4 h)的水浴回流提取样品，考察提取条件。 结果表明，用80％甲醇回流提取3 h，样品中还原糖含量提取 率最高，故以此条件作为熟地黄样品的提取条件。 由于熟地黄粉末极易吸潮，因此在还原糖含量测定过程 中应同时测定样品中的含水量，在计算还原糖含量时应除去 水分含量。 参考文献： [1]叶定江，张世臣．中药炮制学[M]．北京：人民卫生出版社，1999． 289 [2]温学森，杨世林，马小军，等．地黄在加工炮制过程中 HPLC图谱 的变化[J]中草药，2004，35(2)，153 [3]边宝林，王宏洁，王宏生 地黄及其炮制品中总糖及几种主要糖的 含量测定[J]．中国中药杂志，1995，20(8)：469 [4]汤建芳，茹祥斌，顾国明，等．地黄低聚糖对小鼠免疫和造血功能 的作用[J]．中药药理与临床，1997，13(5)：19 [5]刘福君，赵修南，汤建芳，等．地黄寡糖对SAMP8小鼠造血祖细胞 增殖的作用[J]中国药理学与毒理学杂志，1998，12(2)：127． [6]张汝学，顾国明，张永祥，等．地黄低聚糖对实验性糖尿病与高血 糖大鼠糖代谢的调节作用[J]．中药药理与临床，1996，12(1)：14． [7]刘中煜．生地黄与熟地黄含单糖量比较[J]中药通报，1984，9 (1)：17 [8]国家药典委员会．中国药典 ·一部 [M]．北京 ：化学工业 出版社， 2000 94． [9]河南省卫生厅．河南省中药材炮 制规范[M]第 2版，郑州：河南 科学技术出版社 ，2003 83 编辑 ：韦大文 收稿 日期 ：2005—02—23 作者简介：张丽萍(1964一)，女，河南郑州人，讲师，从事药用 植物学教学及科研工作。／／Add：450008河南省郑州市 · 23 · 维普资讯 http://www.cqvip.com