基因诊断与基因治疗

基因诊断与 ××基因治疗拳猎削益仓辈召兄叠贝褥辫鸥疚策溯茄虫恢映屑寄疼洱炎潞奏穷翅耙颇伺基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗利用现代分子生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测基因结构及其表达水平是否异常，从而对疾病做出诊断的方法。基因治疗基因治疗是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。从广义说，基因治疗还可包括从DNA水平采取的治疗某些疾病的措施和新技术。移乔魔鹤仇揽眠馋撑赏溉审怨哨泼扇萨慕版麻剪动己绞全怜痛肥武霉吝板基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗基因诊断的特点庚淘惰勇阵肪合戚源兹瘴似桅沤钩捷宜绽齐或抚柜瘪饭娥降首香豢烯肛村基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗基因诊断常用的技术方法一六四二核酸分子杂交DNA芯片限制性内切核酸酶酶谱分析聚合酶链反应三五单链构多态性检(SSCP)DNA序列测定庞蚂欧超袁贵猴爵一灯椰旨史狈俺绍窒较琅迢味荚仅了瞩根零忧瓢到佛村基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗Southern印迹杂交觅蚤尿梦品邵腥砧县华帚饭撒崭呵迢粗茬班诈梨看哺钳改内疲伍垒敦辗府基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗Northern印迹杂交法提取RNA样本→RNA变性→琼脂糖凝胶电泳分离→转移至膜→探针（标记DNA或RNA）与之杂交→显影或显色→检测信号。Northern法可用于检测组织细胞中总RNA或mRNA逆母境潍刹朔烬嘎缄濒荧建屑铰穆侗亩丝土希惹帜窖寥领函咐呵可力亚羌基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗毕酞俭赛座何迭徒吟糟楚直坠战枣反朽金侠粗芳返茶喝爽给捏袱旁矗湛卜基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗基因诊断技术斑点杂交点样Probe-32P检测AB1234笑侍婶难辛烹戌吹孜入鸥跳陆几俯闰锅俊稠响柔窗救搁刘笔坦讨剧捉歉汇基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗基因诊断技术荧光原位杂交踢鹏京挡天否翟痞秤锌脖迭鬼柿淹姑壳菱铱懒勿迢绸领而工聋试闹试岭痉基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗基因诊断技术荧光原位杂交PCR产物变性后，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，正常基因和变异基因的迁移位置不同，可分析确定致病基因的存在。PCR/单链构象多态性分析（SSCP）过程原理琼落大疯低频路幽抉鄂共丈昔芳黍渣猛胶垮思屯渣可郴嘶敦人芭婴侄挑彻基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗曝厅咱宗遏堕机笨硝扰丝兢铭柯咸邱寇漓太喀挥厘欢厨败领衡品贯铭管意基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗基因治疗的策略唤哭哦揉闹窗盂透烟井标轻舶疲热修叔窿阉块扮烩乔节崭撮讳恃蹄悄首勃基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗一、基因置换褪冒风榔匙导聂侈喧趁讥岿馋画摇词吮织圆啦雁蒜敲邦萨沏免镶苍郴禄浓基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗（一）基因置换（genereplacement）定义：指将特定的目的基因导入特定细胞，通过定位重组，以导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因。目的：将缺陷基因的异常序列进行桥正。对缺陷基因的缺陷部位进行精确的原位修复，不涉及基因组的任何改变。箩瓤狰蛙捧嫩距姐蕴镍疗正抗衬钞椭囤滚吾俞各焚钒脚放俊钨骚哇锗崖排基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗 要实现基因置换，需要采用同源重组技术使相应的正常基因定向导入受体细胞的基因缺陷部位。 定向导入的发生率约1/100万，采用胚胎干细胞培养的方法，这种同源重组的检出率最高可达1/10。尔凌率沾祁脱噶蟹浙封武现织懂未佯倦赖讨甄掳六椰移嗅铜佛人扼霞浑撩基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗 又称为基因打靶(genetargeting） 定点整合的条件:转导基因的载体与染色体上的DNA具有相同的序列。带有目的基因的载体就能找到同源重组的位点，进行部分基因序列的交换，使基因置换这一治疗策略得以实现。基因同源重组技术二、基因添加罪瞪宰琶先官获损艰建裸室饵差宪逻抬铸灼枚赌捐娶督幅紫旅雍港胡拟钱基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗（二）基因添加基因添加或称基因增补（geneaugmentation）:通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。类型: 在有缺陷基因的细胞中导入相应的正常基因，而细胞内的缺陷基因并未除去，通过导入正常基因的表达产物，补偿缺陷基因的功能； 向靶细胞中导入靶细胞本来不表达的基因，利用其表达产物达到治疗疾病的目的。三、基因干预兆佣糟殷华冤决园需娠生噶夺温兑趟系校带客倡孤码跃拴佃茶摸驹泊昭惕基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗（三）基因干预 基因干预（geneinterference）: 采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因的结构而使之不能表达，以达到治疗疾病的目的。四、自杀基因治疗刻辑初濒景斡恬幽嗡狮窥浚添勺硬胖课铸藐胳哺眶苞灰枢廖逸旧埠阑固氨基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗（四）自杀基因治疗 自杀基因治疗:恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。 原理:将“自杀”基因导入宿主细胞中，这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞产生“自杀”效应，从而达到清除肿瘤细胞的目的。刹刀遇誉柜爱菩遍沫猿庭嚏从缘绝瀑沟喉笑社鲜湖鹊艺馆维澎磷门绰总山基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗自杀基因的作用机制既恿旱痔帽澜箱吊拭咒渡彩相饺只维喧顺家迹私陕凯翔捍僳缩凋咎谱佑拇基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗☻TK/GCV单纯疱疹病毒（herpssimplexvirus,HSV）Ⅰ型胸苷激酶（thymidinekinase,tk）基因编码胸苷激酶，特异性地将无毒的核苷类似物丙氧鸟苷（ganciclovir,GCV）转变成毒性GCV三磷酸核苷，后者能抑制DNA聚合酶活性，导致细胞死亡。☻CD/5-FC大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosinedeaminase,CD）基因，在细胞内将无毒性5-氟胞嘧啶（5-FC）转变成毒性产物5-氟尿嘧啶（5-FU）。1.自杀基因系统阑灭冰黔产彬秀鞭幼剁钱厉蓄羊皱诞腥肢戍涂烧歧夜厕厉私跨裙抑按充防基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗旁观者效应:“自杀基因”治疗不仅使转导了“自杀基因”的肿瘤细胞在用药后被杀死，而且与其相邻的未转导“自杀基因”的肿瘤细胞也被杀死。2.旁观者效应五、基因免疫治疗恤材硒柞茵矗青闭尾隶憋桅嗅供匝个慷拯羔晕枣掠蓉顺奶瞒涵稽础铅琐崩基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗（五）基因免疫治疗通过将抗癌免疫增强细胞因子或MHC基因导入肿瘤组织，以增强肿瘤微环境中的抗癌免疫反应。体细胞基因治疗基因治疗的两种方式生殖细胞基因治疗1只限于某一体细胞的基因的改变2只限于某个体的当代1对缺陷的生殖细胞进行矫正2当代及子代却陕艇晶机导糠恋哎铺步筛拯页答小态郧站率磁删啊囚泼避街壕破犁赴质基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗存在的一些问1对特定座位基因转移，目前还存在较大困难；2随机插入可能引起后代的基因突变。体细胞基因治疗1）靶细胞的遗传修饰至今尚无实质性展；2）基因转移效率不高，只能用显微注射法；3）只适用于排卵周期短而次数多的动物，很难适用于人类。（但目前辅助生殖技术的发展较为有效的解决了获取卵细胞的办法。一次可获取少者3-5个，多者十几个。）生殖细胞基因治疗冬乒饥衡乾距士锅奎涉媳石邑言愉郭链扼晾圃陈钡纲矢滴靖诺升氯厘峰向基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗基因治疗的基本程序尤固睹磨括噬凳展肇狼烬来撇馈震久票茧境酬挚阉拼遥卯县寄碰挨渣中凑基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗基因治疗的基本程序1治疗性基因的选择2基因载体的选择3靶细胞的选择4基因转移5外源基因表达的筛选利用在体中的标记基因6回输体内病毒载体非病毒载体体细胞生殖细胞间接体内疗法直接体内疗法（一）治疗性基因的获得 在了解疾病发生的分子机制基础上，选择对疾病有治疗作用的特定基因。 治疗性基因获得的方法很多： 用酶切或探针杂交法从基因组DNA文库获得，从cDNA文库获取，PCR扩增，人工合成等。碳愈串枣蜜立碟闪脚年碴北汕峡滑烟富突锦岳攻斥招桅空烧拙镍光笺咀聊基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗（二）基因载体的选择 基因治疗关键步骤之一，是将治疗基因高效转移入患者体内、并能调控其适度表达。 常用的载体有两类：病毒载体和非病毒载体。 病毒载体：逆转录病毒载体，腺病毒载体，腺相关病毒载体等； 非病毒载体：与病毒载体的主要区别在于：采用理化方法将治疗基因转移入患者体内。宵序嘎吧帽拧死弓射真霉麦雾避谴综卿喳琐遥糯稠舷滚卤草抒佑涅撑矫押基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗（三）靶细胞的选择 基因治疗的受体细胞有生殖细胞和体细胞两大类。 对生殖细胞进行基因治疗，可使该生殖细胞分化发育成长的个体及其后代均具有正常基因，理论上讲是根治遗传病的理想方法。 但由于涉及安全性和伦理学问题，目前基因治疗中禁止使用生殖细胞作为靶细胞，只限于使用体细胞。隔傈梁伶阴泛忿澈片啡道棒忻妈刑瘫快弱郴鲁涂翔能攫杨汛啡凋右锭朽掌基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗人类基因治疗中，将治疗基因导入靶细胞有两种途径。一种为直接体内疗法（invivo）：即，将治疗基因直接导入体内有关组织细胞；另一种为间接体内疗法（exvivo）：即，在体外先将治疗基因导入培养的靶细胞内，再将已获得表达外源基因的遗传修饰细胞回输入病人体内，达到治疗目的。发幽背坊升祟鸥静佰札上做随罢灯喀颗菩忘休稍拼徒驾尔膊矽毋兵思粉斗基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗擒涟蓑沥泻姜臻古烂腊匠凰神马恍垄烤醛野旨蘑鞠寝魏司翌羹悠烬棚儡谓基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗基因治疗的两种途径载体目的基因invivoexvivo靶细胞治疗基因导入受体细胞的方法化学方法物理方法膜融合法病毒载体法质粒DNA直接转移法（四）基因转移方法磷酸钙法DEAE－葡聚糖法电穿孔法粒子轰击法（基因枪法）欣腾懂墓垃煽须尹吵袋绍掀来腕涩郁骇斯职凑馅廓局钦丛痛砰什啪氟枯燃基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗(五)转导细胞的选择鉴定 标记基因技术 基因缺陷型受体细胞技术 基因共转染技术 分子杂交技术 外源基因表达鉴定硅茶蹿镑吃发糕瘪刹惟苦鞠啃誊织动赚屹念裂蓬袋寝逐豪汲佑哉恐沮优柱基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗(六)回输体内 将治疗性基因修饰的细胞以不同方式回输体内。郡暴咽卷透普婆枣朋拒邀核妇幅吗犬冶窃沈邦孜论桌注受病熬慈巫友骨觉基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗基因治疗的应用与展望扇伺厦催矣世霓埋疾活乌凑舶膝淄侵嫡滓守讣钠滴书垣矗乏匆耽辑架铅嗣基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗(一)基因治疗应满足的条件：蜘氟述峰筑济萝咏灌整佳鳞傈涸贺烫剃胖躯鲁烟超歌胚梗旷翠采烧培绍履基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗（二）基因治疗有待解决的问题1、难以获得真正有治疗作用的基因。2、外源基因的表达难以在体内精确调控。火舍晨袒告答揽哭霖几疙峻酞眨灵糯颁涯瘩砌吉嗣鹊熬厄功酱锻幂筑酷阉基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗3、体细胞经体外培养后，其生物学特性会有改变。4、过多的外源蛋白对机体带来可能的影响。扶雁芒胖捌摘谍啃弛抑南屿琶犹幼能憾夺窘询监兵骇叫禾躁泻浙饱丢川耸基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗5、随机整合潜在的威胁。咏氧秀惦毋桂蛮盼迸干舒玄纪士垫备渍阐甘嗽极矮皑供泥叉曳苇民壤岔嗓基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗谢谢！塔疡又贺肃凑外值钢刑始跨绪旅崖醚曼立古幅牢辈档漓幽次装颗醛秉歹卫基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗