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实验七 石蜡切片Masson 染色

2017-03-12 3页 doc 22KB 77阅读

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实验七 石蜡切片Masson 染色Masson染色一、实验目的显示病变组织纤维化程度。二、实验原理 Masson染色使胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染)或绿色被亮绿所染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染,肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。I型、III型胶原呈绿色GBM、TBM、系膜基质及肾间...
实验七  石蜡切片Masson 染色
Masson染色一、实验目的显示病变组织纤维化程度。二、实验原理 Masson染色使胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染)或绿色被亮绿所染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染,肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。I型、III型胶原呈绿色GBM、TBM、系膜基质及肾间质呈绿色),嗜复红蛋白、肾小管胞质、红细胞呈红色。三、实验材料和试剂: 一)Wigrt氏铁苏木素液可用Harris苏木素代替)甲液:苏木素1g无水酒精或95%酒精)100ml乙液:30%三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml30%三氯化铁溶液则为100ml)盐酸1ml临用时,取甲、乙液等量混合即可使用。混合时应将乙液加人甲液内,染液呈紫黑色。铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用,因铁与染色剂的色素化合生成不溶性沉淀,所以铁作媒染液时,必须与染液分别配制和分别保存,染片时临时混合应用。由于这是一种铁苏木素,它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用,且不会被光线褪色,因此比钾矾苏木素染色较为持久。二)丽春红酸性品红液丽春红SPoncauS)0.7g酸性品红acidfuchsin)0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacialacticacid)1ml三)1%磷钼酸水溶液磷钼酸phosphomolybdicacid)1g蒸馏水加至100ml四)2%苯胺蓝液苯胺蓝anilinblu)2g冰醋酸glacialacticacid)2ml蒸馏水98ml五)1%冰醋酸冰醋酸1mlL蒸馏水99ml六)1%亮绿液亮绿lightgrn)1g蒸馏水99ml冰醋酸glacialacticacid)1ml七)Bouin’s液苦味酸饱和液1.22%)75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制,对皮肤及肌腱有软化作用。四、染色步骤与方法:1.组织固定于Bouin氏液,流水冲洗一晚,常规脱水包埋。2.切片脱蜡至水:1)二甲苯中脱蜡10min×3次,用吸水纸吸干液体。2)100%乙醇5min×2次,用吸水纸吸干液体。3)95%乙醇5min×2次,用吸水纸吸干液体。4)流水2min,用吸水纸吸干水分。3.Wigr氏铁苏木素染510min。4.流水稍洗。5.0.5%盐酸酒精分化。15s6.流水冲洗3min。7.丽春红酸性品红液染8min。8.蒸馏水稍冲洗。9.1%磷钼酸水溶液处理约5min。10.不用水洗,直接用苯胺蓝液或亮绿液复染5min。11.1%冰醋酸处理1min。12.95%乙醇脱水5min×2次,用吸水纸吸干液体。13.100%乙醇5min×2次,用吸水纸吸干液体。14.二甲苯中透明5min×2次,用吸水纸吸干液体。15.中性树胶封片。结果:胶原纤维呈蓝色(用苯胶蓝液复染)或绿色(用亮绿复染)。胞质、肌纤维和红细胞红色。胞核蓝褐色。注意事项:1、组织用Bouin氏液或Znkr氏液固定为佳。如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37℃温箱内12小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。2、铁苏木素染核(见苦味酸一酸性品红法)。3、如没有丽春红染料,可把酸性品红加至1克来配制。4、用1%磷钼酸处理时可在镜下控制,见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。5、苯胺蓝或亮绿不能过染,防止掩盖红色。6、磷钼酸使绿色和蓝色鲜艳,磷钨酸增加红色。
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