霉菌的形态观察

山东大学 2014年 11 月 12 日 姓名 王海宽 班级 12级生物基地 学号 201200140099 同组者:孙梦杰、袁家奇、肖荷 科目 微生物学实验 题目 霉菌的形态观察 组别 周三第六大组 第 1 页 共 4 页 微生物实验报告·** 霉菌的培养与形态观察 一.实验目的 1、掌握霉菌的观察法:小室观察法。 2、了解四种常见霉菌形态。 二.实验原理 1. 霉菌 霉菌可产生复杂分枝的菌丝体,其菌丝分基内菌丝和气生菌丝,气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝,由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约3~10μm ),常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此,用低倍显微镜即可观察。本实验采用毛霉、青霉,曲霉,根霉四种常见的霉菌作为菌种进行观察。 毛霉是接合菌亚门接合菌纲毛霉目毛霉科真菌中的一个大属。以孢囊孢子和接合孢子繁殖。菌丝无隔、多核、分枝状,无假根或匍匐菌丝。不产生定形菌落。菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊,内有形状各异的囊轴,但无囊托。孢子成熟后孢子囊即破裂并释放孢子。有性生殖借异宗配合或同宗配合,形成一个接合孢子。 青霉菌属多细胞,营养菌丝体无色、淡色或具鲜明颜色。菌丝有横隔,分生孢子梗亦有横隔,光滑或粗糙。基部无足细胞,顶端不形成膨大的顶囊,其分生孢子梗经过多次分枝,产生几轮对称或不对称的小梗,形如扫帚,称为帚状体。分生孢子球形、椭圆形或短柱形,光滑或粗糙,大部分生长时呈蓝绿色。有少数种产生闭囊壳,内形成子囊和子囊孢子,亦有少数菌种产生菌核。 根霉的菌丝无隔膜、有分枝和假根,营养菌丝体上产生匍匐枝,匍匐枝的节间形成特有的假根,从假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗,顶端膨大形成圆形的孢子囊,囊内产生孢囊孢子。孢子囊内囊轴明显,球形或近球形,囊轴基部与梗相连处有囊托。根霉的孢子可以在固体培养基内保存,能长期保持生活力。此外有性生殖时还可以产生接合孢子囊,无性生殖时产生芽孢子。 曲霉菌丝有隔膜,为多细胞霉菌。在幼小而活力旺盛时,菌丝体产生大量的分生孢子梗。分生孢子梗顶端膨大成为顶囊,一般呈球形。项囊表面长满一层或两层辐射状小梗(初生小梗与次生小梗)。最上层小梗瓶状,顶端着生成串的球形分生孢子。以上几部分结构合称为"孢子穗"。 孢子呈绿、黄、橙、褐、黑等颜色。这些都是菌种鉴定的依据。分生孢子梗生于足细胞上,并通过足细胞与营养菌丝相连。曲霉孢子穗的形态,包括分生孢子梗的长度、顶囊的形状、小梗着生是单轮还是双轮,分生孢子的形状、大小、表面结构及颜色等,都是菌种鉴定的依据。 2. 小室培养法 观察霉菌的形态有多种方法,常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法,本次实验采用载玻片培养观察法(小室培养法)。用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上,沿琼脂边缘接种后盖上盖玻片培养,霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后,将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态,还便于观察不同发育期的培养物。 三.实验器材 1、 菌种: 曲霉(Aspergillus sp.),青霉(Penicillium sp.),毛霉( Mucor sp. )和根霉(Rhizopus sp.)培养48h 的马铃薯琼脂(PDA )斜面培养物。 姓名王海宽班级12级生物基地学号201200140099 同组者:孙梦杰、袁家奇、肖荷 科目微生物学实验题目霉菌的形态观察组别周三第六大组 2、培养基及试剂: 马铃薯琼脂(PDA),20%甘油(无菌),乙醇。 3、仪器及其它用品: 无菌操作台,解剖刀,镊子,无菌吸管,U型玻璃棒,普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿等。 四.操作步骤 1. 培养基的配制 马铃薯培养基(PDA)配方: 马铃薯:20g;葡萄糖 2g;琼脂 2g;水100mL;pH:7.2~7.4。 按如上所示配方称取PDA各组分,先将马铃薯去皮,切成小块称取2g煮沸半小时,然后先用1层纱布滤去未溶解的固体,再用8层纱布过滤,将滤液转入100ml蒸馏水中,然后再加入糖及琼脂,加塞后用牛皮纸包好,准备灭菌。 2. 培养基及装置的灭菌 a) 灭菌准备 制作八个平皿,在每个平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片,再放一U形玻棒,其上放一洁净载玻片和四块盖玻片,盖上皿盖、再与两个空平皿一起用牛皮纸包好;在100mL锥形瓶中用甘油配制20%的甘油,加塞包好;最后取10mL移液管两支用牛皮纸包好。 b) 灭菌 将上述用牛皮纸包好的仪器与试剂连同配好的PDA培养基一并放入灭菌锅中110℃灭菌30min(由于培养基中有葡萄糖,为防止由于高温而使糖发生糊化而变质,灭菌温度不宜过高)。 3. 制作琼脂薄片 将制作琼脂薄片与接种所需的培养基,仪器,以及菌种放入无菌操作台,打开紫外线照约5min,然后打开照明与风,使无菌风吹入操作台,开始实验操作。分别取已灭菌并溶化冷却至约50℃的马铃薯琼脂培养基6~7mL 注入两个灭菌空平皿中,使之凝固成薄层。在两个凝固后的平板背部用记号笔画下约1~1.2cm ×1~1.2cm的方格,通过无菌操作,用解剖刀沿画下的方格线将其切成方形的琼脂块。(注:解剖刀使用前应先在酒精中浸泡,然后在酒精灯上灼烧,冷却后再进行切割操作)。 4. 接种 在无菌操作台上,先用镊子将载玻片放于U型玻璃管上,然后用解剖刀取一小块儿琼脂块,置于载玻片上(注意:镊子与解剖刀每次使用前都应先在酒精中浸泡,灼烧冷却后再进行下一步的操作),用接种环分别从斜面培养物上挑取很少量的4种菌的孢子,分别接种于培养小室中琼脂块的边缘上,用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。最后用移液管在培养小室中的圆滤纸上加3ml 灭菌的20 %的甘油(用于保持平皿内的湿度 ) ,盖上皿盖并贴标签,每一种菌接种两个小室。 5. 恒温培养 将接种后的平皿正置于28℃培养箱中恒温培养一周。 6. 镜检 在显微镜下直接观察小室培养后的载玻片,用低倍镜即可较为清晰的观察到霉菌的菌丝体及孢子,根据所学的四种菌的基本特征对四种菌进行观察比较与区分,必要时可以采用高倍镜对菌进行观察。 姓名 王海宽 班级 12级生物基地 学号 201200140099 同组者:孙梦杰、袁家奇、肖荷 科目 微生物学实验 题目 霉菌的形态观察 组别 周三第六大组 五. 实验结果与分析 1. 实验照片: 图1 根霉菌观察结果示意图 图2 黑曲霉菌观察结果示意图 图3 青霉菌观察结果示意图 姓名 王海宽 班级 12级生物基地 学号 201200140099 同组者:孙梦杰、袁家奇、肖荷 科目 微生物学实验 题目 霉菌的形态观察 组别 周三第六大组 图4 毛霉菌观察结果示意图 六.思考题 黑曲霉和黑根霉在形态特征上有何区别? 答:黑根霉菌丝无隔,有匍匐菌丝和假根,假根着生处有直立的向上孢子囊梗,其顶端膨大成孢子囊,孢子囊底部有半球形囊轴。黑曲霉菌丝有隔,气丝分化成分生孢子梗,顶端膨大形成球形顶囊,顶囊表面辐射出状生出一层或两层小梗,小梗上有一串串分生孢子。