血液凝固和影响血液凝固的因素

血液凝固和影响血液凝固的因素 xxx (xxxxxxxx    xxxxxxxx  xxxxxxxxxxxxxxx) 【摘要】目的  通过测定某些条件下的血液凝固时间，加深理解影响血液凝固的因素。方法  将家兔的颈动脉血分别加入到装有生理盐水、肺组织浸液、肝素、草酸钾等物质的十支试管中，分别记录凝血时间。结果    除了加有生理盐水、肺组织浸液、棉花的试管中血液凝固了外，其他试管中的血液在实验时间内，均未发生凝固。结论  棉花、肺组织浸液、生理盐水可以促进血液凝固，石蜡、肝素、草酸钾、低温有抗凝作用。 【关键字】内源性凝血、外源性凝血、肝素、组织因子、抗凝作用 【Abstract】Objective, by measuring blood clotting time under certain conditions, deepen our understanding of the factors that affect blood coagulation. Methods, the rabbit carotid blood were added into ten test tubes with physiological saline, lung tissue extracts, heparin, potassium oxalate and other substances, respectively record the coagulation time. Result, except the blood in the test tubes with physiological saline, lung tissue extracts, cotton, others didn’t clot in the experiment period. Conclusion, cotton, lung tissue extracts, physiological saline can promote blood coagulation, and paraffin, heparin, potassium oxalate, low temperature has anticoagulant effect. 【Key words】intrinsic pathway of blood coagulation, extrinsic pathway of blood coagulation, heparin, tissue factor, anticoagulant effect 【引言】血液凝固过程是由许多凝血因子参加的酶促反应。根据血液凝固过程中凝血酶原激活途径不同，可将血液凝固分为内源性激活途径和外源性激活途径。内源性凝血是指参与血液凝固的凝血因子全部存在于血浆中；外源性凝血是指在组织因子参与下的血凝过程。本实验采用动物颈动脉放血取血，血液几乎未与组织因子接触。因此，凝血过程主要是内源性凝血系统的作用。肺组织浸液中含丰富的组织因子，加入试管观察外源性凝血系统的作用。 1. 材料和方法 1.1. 实验对象  家兔、雄性、3.5kg、健康 1.2. 实验仪器  试管，动脉夹，动脉插管，恒温水浴槽，秒表，兔手术台，常规手术      器械，注射器，小烧杯，试管架，竹签 1.3. 实验药品和试剂  石蜡油，冰块，肝素，柠檬酸钠或草酸钾，肺组织浸液，氯化钙，氨基甲酸乙酯，生理盐水 1.4. 实验方法 1.4.1. 按照表格1和表格2准备10支试管和2只烧杯，编号，在试管中照要求添加试剂。 1.4.2. 先给家兔称重，再将兔仰卧固定于兔手术台上，用200g/L氨基甲酸乙脂按5ml/kg体重剂量给家兔耳缘静脉注射麻醉。家兔呼吸仍急促，补麻药，药量为原来的十分之一。 1.4.3. 切开颈部皮肤后，分离一侧颈动脉，头端用线结扎，向心端夹上动脉夹。用眼科剪在近结扎处线处的血管壁剪一“V”形小口，向心方向插入动脉插管，用线结扎固定，以备取血。 1.4.4. 在十支试管中分别添加1ml新鲜血液。在2只烧杯中分别加入10ml新鲜血液。 1.4.5. 1号烧杯静置，2号烧杯用竹签朝一个方向搅动，将缠于竹签上的全部纤维蛋白弃之。记录血液凝固时间。 1.4.6. 每个试管加血1ml后，即刻开始计时，每隔15s倾斜一次，倾斜角度为30度，观察血液是否凝固，至血液成为凝胶状不再流动为止，记录所经历的时间。 2. 结果 表格 1  肝素对家兔肺组织浸液血液凝固的影响实验的原始数据记录 单位：小时：分：秒 影响因素 试管编号 放血（ml） 凝血时间（小时：分钟：秒） 生理盐水0.1ml 空白 1 1 0:29:39 肺组织浸液（含组织因子）0.1ml 试验1 2 1 0:02:47 8单位/ml的肝素0.1ml 试验2 3 1 0:33:52 2%的草酸钾0.1ml 条件对1 4 1 0:33:52 2%的草酸钾0.05ml+肺组织浸液（含组织因子）0.05ml 条件对2 5 1 0:33:52 8单位/ml的肝素0.05ml+肺组织浸液（含组织因子）0.05ml 试验3 6 1 0:33:52         表格2  因素对家兔血液凝固的影响实验的原始数据记录 单位：小时：分：秒   试管编号 放血（ml） 凝血时间（小时：分钟：秒） 温度变化 室温25℃ 7 1 0:33:52 试管置于冰块中 8 1 0:33:52 光滑面 试管内表面涂石蜡油 9 1 0:33:52 试管底置少许棉花 10 1 0:28:01           表格3 观察纤维蛋白在家兔血液凝固中的作用 单位：小时：分：秒   烧杯编号 放血（ml) 血液是否还会凝固？ 将100ml血液放入小烧杯中静置 1 10 0:29:30 将100ml血液放入小烧杯中，并用竹签朝一个方向搅动，将缠于竹签上的全部纤维蛋白弃之 2 10 不会         3. 讨论 血液凝固是指血液由流动的液体状态变成不流动的凝胶状态的过程。其实质就是血浆中的可溶性纤维蛋白转变成不可溶性的纤维蛋白，交织成网，把血细胞和血液的其他成分网罗在内，形成血凝块。血液凝固是一系列复杂的酶促反应过程，需要多种凝血因子的参与。 凝血过程可分为凝血酶原激活物形成、凝血酶的形成和纤维蛋白的形成三个基本阶段。根据凝血酶原激活物生成的途径，将凝血过程分为内源性凝血途径和外源性凝血途径。内源性凝血途径是指参与凝血的因子全部来自血浆，通常因血液与带负电荷的异物表面（如玻璃、白陶土、硫酸酯、胶原等）接触而启动。当血液与带负电荷的异物表面接触时，首先是FⅫ结合到异物表面，并被激活为FⅫa。FⅫa的主要功能是激活FⅪ成为FⅪa，从而启动内源性凝血途径。由来自于血液之外的组织因子暴露于血液而启动的凝血过程，成为外源性凝血途径。在生理情况下，直接与循环血液接触的血细胞和内皮细胞不表达组织因子，当血管损伤时，暴露出组织因子，后者与FⅦa结合而形成FⅦa—组织因子复合物，后者在磷脂和Ca2+存在的情况下迅速激活FⅩ生成FⅩa。 通过上述两条途径生成FⅩa后，FⅩa、PL、Ca2+与FⅤa形成凝血酶原激活物，后者进一步激活凝血酶原为凝血酶，凝血酶裂解纤维蛋白原形成纤维蛋白单体。在FⅩⅢa和Ca2+的作用下，纤维蛋白单体相互聚合、交联形成纤维蛋白多聚体，组成牢固的纤维蛋白网，网罗血细胞形成血凝块。 3.1. 1号试管凝血时间较长，生理盐水稀释了血液，降低凝血酶的浓度，延长了血液凝固的时间。 3.2. 2号试管凝血时间最短，因为内含组织因子，可以迅速启动外源性凝血途径。 3.3. 3号试管在规定时间里未发生凝集。因为肝素是一种抗凝剂，主要通过增强抗凝血酶的活性而发挥间接的凝血作用。 3.4. 4号试管在规定时间里未发生凝集。凝血过程中Ca2﹢是重要的凝血因子，其参与了血液凝固的许多环节，当血液中没有Ca2﹢时血液就不会发生凝固。在试管中加入了草酸钾，由于草酸钾与Ca2﹢发生反应，生成草酸钙沉淀，血液中没有了Ca2﹢，故血液不会发生凝固。 3.5. 5、6号试管在规定时间里未发生凝集。证明了草酸钾和肝素的抗凝作用，排除了3、4号试管血液被稀释的因素。 3.6. 7、8号试管在规定时间里未发生凝集。酶的活性随着温度的不同而不同，冰水降低了血液中凝血酶的活性，使凝血过程减慢。 3.7. 9号试管在规定时间里未发生凝集。由于石蜡油表面光滑，不易引起血小板黏着，即不易使血小板发挥促进凝血的作用。 3.8. 10号试管血液发生凝集。棉花有一个粗糙的表面，容易使血小板发生黏着、聚集。另外棉花作为异物，也能激活凝血因子Ⅻ，启动内源性凝血途径。因此放有棉花的试管血液凝固加快。实验中可能由于棉花量加的太少，导致凝血时间相比其他组长很多。 3.9. 1号烧杯血液发生凝集。因为FⅫ被玻璃面所激活，启动内源性凝血途径。 3.10. 2号烧杯在规定时间里未发生凝集。无论是内源性还是外源性凝血，生成FⅩa后，FⅩa、PL、Ca2+与FⅤa形成凝血酶原激活物，后者进一步激活凝血酶原为凝血酶，凝血酶裂解纤维蛋白原形成纤维蛋白单体。在FⅩⅢa和Ca2+的作用下，纤维蛋白单体相互聚合、交联形成纤维蛋白多聚体，组成牢固的纤维蛋白网，网罗血细胞形成血凝块。用竹签搅拌血液的过程中，虽然也发生了凝血的过程，纤维蛋白原被水解成纤维蛋白，但形成的纤维蛋白被不断地缠绕到了竹签上，经水漂洗后，竹签上剩下的是白色丝状的纤维蛋白，又经搅拌后，杯内血液中的纤维蛋白原被全部耗尽，无法再形成纤维蛋白网罗血细胞，故血液不再发生凝固。 4. 结论 组织因子使血液快速凝固；少量生理盐水也可以加速血凝；草酸钾和肝素等抗凝剂可以延缓血液凝固时间；温度对血液凝固有影响，适当降温可以延缓血凝的过程；增加异物的光滑面也可以延缓血凝；纤维蛋白的形成是血液凝固的最后阶段，若没有纤维蛋白，则血液不会发生凝固。 5. 参考文献 [1]张志雄.生理学.第二版.上海:上海科学技术出版社,2011,46～50 [2]陆源，林国华，杨午鸣.机能学实验教程.第二版.北京:科学出版社,2010，106～108