新生儿与小婴儿巨结肠肌层病变和肌动蛋白免疫组化观察

新生儿与小婴儿巨结肠肌层病变和肌动蛋白免疫组化观察 新生儿与小婴儿巨结肠肌层病变和肌动蛋 白免疫组化观察 CbinJPediatrsu,December1997,Vo】.18.No.6 新生儿与小婴儿巨结肠肌层病变和 肌动蛋白免疫组化观察 ,.7上>z 竺坐江泽熙申曼里王竞春玛亭一krT~',6z口z___—-一-_?-?—,V一 摘要目的;为了观察新生儿与小罂儿巨结肠平滑肌病理改变,方法:对15例新生儿 和小婴 儿巨结肠f术罐车进行病理组织学与抗肌动蛋白免疫组化观察结果:见平滑肌层 网状纤维密度 瞄,pAS刊:蛮形平滑肌睹酪柞峦,ItlL~蛋白脯,砬消实薯蛮折车侬加雷抽样 节细胞分布 关键词 0bservatioil AmongNeonatesandInfantswithHirschsprung.sDisease Zexi,etal,WuhanChildrensHospitaltWuhan,430016 Immunochemistry AbstractObjective:Toobservethepathologicalchangesinmyenteronofthecolonin neonatesandinfantswithHirschsprungsdisease(HI)).Methods:Thechangesofmuscularlayer inhistologyandactinin3Fl~llnohistochemlstrywerestudiedini5specimensofaffectedcolonob— rainedduringoperation.Results:ThedensityofreticularfibersinsmoothmuscleincreasedtPAS cyclesdeformed,thesmoothmusclesshowedacidophilicdegenerationandactlndecreasedordisap peared.Allofthesechangedprogressivelyfromtheproximaltothedistal,andcorrelatedwitht he distributionofganglioncells.Conclusion:Thesecharacteristicpathologicalchangesinthen 31.18eu— larlayerinneonatesandinfantswithHDmaybeofpracticalvalue. KeywordsHirschsprungsdisease;lmmuno-assay;Actin 经过较长时间临床及病理观察,我们发 现先天性巨结肠(HD)除肠壁神经节细胞及 粘膜病变外"."],肌层亦有特殊改变,具有 一? 定特征.现将1993~1995年,新生儿与小 婴儿巨结肠15例手术结肠标本平滑肌层的 变化,结合肌动强白免疫组化观察进行分析 讨论. 资料及方法 资料 , 15例中男13例,女2例.年龄3o天以 内1O例,31,60天5例.其中长段型4例, 常见型11倒.均行改良环钳斜吻合根治术. 经随访,全组疗效满意. 作者单位:4100l6武汉市儿童医院痫理科(鲁建生 王竞春冯亭),小儿外科(胡家高江泽熙申曼里) 二,方法 病变组:15例结肠手术标本均立即以 1o福尔马林固定,沿系膜侧全段(由近至 远端),全层,纵行取材,石蜡包埋切片(每 例5套切片),均作HE,Foot网状纤维, VG苦昧酸品红,PAS染色,并作抗平滑肌? 肌动蛋白免疫组织化学反应. 对照组:选5例无畸形,无消化道疾病 尸检结肠际本,其中男4例,女1例,l8天' 以内4例,43天1倒.自肛门向上取长20 cm结肠一段与病变组同法取材,切片,染 色. 抗肌动蛋白免疫组织化学的试剂与方 法:采用美国ZYMED公司生产的鼠抗平滑 肌肌动蛋白单克隆抗体(monoclonalmouse anti—actinsmoothmuscle,简称抗Aetin). 该抗体能与平滑肌肌动蛋白a同位成分起反 孑 ,, ,,. 6 3 』3 i? ,, 中华小儿外科杂志1997年12月第18卷第6期 应,不与骨骼肌肌动蛋白或其他问质细胞起 反应.采用过氧化物酶标记的链霉卵白素 (streptavidim/peroxidase)染色试荆盒 (SP),北京中山生物试剂公司提供. 光镜观察;?结肠各段(近段,移行段 与无神经节细胞段)神经丛,神经节细胞的 分布以及相对应的平滑肌层的病理变化? 观察环行平滑肌层的变化.?观察肌动蛋白 免疫组化反应特性及分布,两组对比分析. 结果 病变组 , 结肠环行平滑肌层的基本病变:15 例结肠各段环行平滑肌层肌束,不同程度受 累及.基本病变表现为: 1,肌束内网状纤维支架密度增加,有 的呈"麦束状",即肌束内中部网状纤维较集 中,排列密集,密度增加,肌束两端的网状 纤维(靠近纵肌和粘膜下层的环行平滑肌束 内的网状纤维)相对稀疏,状似麦束,有的 平滑肌束内网状纤维密度均增加,重者相邻 的肌束连续受累,以致肌束体积缩小. 2,PAS环的变化接近近端切断缘的 肠段,于环行肌层平滑肌细胞的(横截面)周 围均可见不问断的环状PAS阳性反应物 (PAs环),在整个肌束中形成较的蜂窝 状结构.上述"麦束状"改变中部,即网状纤 维密度增加的区域见PAS环变形,变小或 形状不规则乃至塌陷. 3.平滑肌嗜酸性变:HE,VG染色,网 状纤维密度增加和有PAS环变化的区域嗜 伊红或苦味酸染色性能增强,染较深的红色 或黄色,与周边的肌细胞成为鲜明对照. 4.肌动蛋白的变化:肌束内,阿状纤维 密度增加和PAS环变形的区域,抗Actin Sp-c~呈弱阳性,甚至阴性反应. 二,纵行平滑肌和粘膜肌的改变:因取 材截面方向为纵行,对纵肌病变观察受到一 定限制,如PAS环不能显示等.但仍可见网 状纤维密度增加,嗜酸性变,抗ActinSpTM ?337? 反应减弱等变化,纵,环肌有类同的改变. 纵肌病变相对较轻,粘膜肌变化不明显. 三,肌束病变在结肠各段的分布:全组 无神经节细胞肠段(痉挛段),肌束受累及的 数量较多且较重,有的表现为连续几个肌束 受累及,肌束体积缩小;近段,轻者仅见个 别"麦束状"或轻微的网状纤维密度增加或不 明显;移行段,界于二者之间,其肌束病变 常呈间断性.在结肠粘膜炎症较明显的部位 亦发生相应的上述改变.由远至近段平滑肌 病变依次减轻. 近端切断缘肌层抗肌动蛋白sP反应 无明显的肌束病变. 均呈阳性, 对照组:由近至远各段结肠,肌间均见 有肌间神经丛与神经节细胞,肌束中网状纤 维分布均匀,PAS环无变形呈蜂窝状,平滑 肌HE,VG染色未见嗜酸性变,抗Actin为 均质阳性反应.病变组结肠近端切断缘与对 照组观察结果类似. 讨论 组织学研究证明,正常平滑肌束内的肌 细胞间有较细的胶原纤维,弹力纤维和网状 纤维分成细支紧裹在平罱肌细胞的表面,有 学者发现平滑肌细胞围有PAS阳性物质环 绕,形成不问断的环形结构(我们称为PAS 环),过碘酸雪夫(periodicacidschiff,PAS) 反应是组织化学常用的方法,多糖,中性粘 多糖,粘蛋白,糖蛋白,糖脂类,不饱和的 脂类及磷脂均呈PAS阳性反应,平滑肌细 胞周围PAS阳性反应环状物质,其功能可 能对平滑肌运动起传递作用,确切的组化成 分尚不清楚,但这种PAS环状结构为研究 平滑肌的形态学表现提供了物质基础.通过 对照组与病变组结肠近端切断缘平滑肌层观 察结果认为:特别是肌束内网状纤维稀疏, 排列规律,呈细网状;PAS环结构规则,呈 蜂窝状;无染色性能的异常改变等平滑肌结 构表现,与Bloom等观察相符,全组病倒随 访疗效满意,证明已切至较正常的肠段,故 338? 考虑上述表现可作为判断是否接近正常肠段 具有临床,病 肌层的较重要的形态学指标, 理应用价值. 肌束内网状纤维密度(网眼大小),PAS 环大小,均反映平滑肌细胞体积的大小.网 状纤维密度增加和PAS环变小,破坏,甚至 塌陷的程度,范围与抗肌动蛋白SpTM反应 强弱相关.肌束内网状纤维"麦束状"改变是 反映肌束中部的病变,为肌束内局灶性病 变,是一种较轻的改变.平滑肌层的嗜酸性 变,证明其pH值的变化,考虑为肌细胞代 谢异常. SmallS等0研究平滑肌细胞丝可分成 两类,一类为收缩系统,另一类为骨架系 统.平滑肌细胞主要由细肌丝和粗肌丝组成, _二者之比在豚鼠结肠平滑肌为25,30:1. 细肌丝又称肌动蛋白丝,细肌丝由结构蛋白 和调节蛋白构成,结构蛋白是肌动蛋白, 它是构成细肌丝的主体].本文采用鼠抗 Actin能与平滑肌细肌丝的主体肌动蛋白 ChinJPediatrSurg,December1997,Vo【.18,No.6 起反应,故可反映平滑肌细胞的变化如在 网状纤维呈高密度,PAS环塌陷,抗Actin SpTM为阴性反应的病灶,说明该处平滑肌细 胞可能消失.从抗ActinsP反应的强弱或 消失,不仅可以判断其存在与否,还可提示 其肌动力状况. 平滑肌是一种再生能力较强的组织,新 生儿巨结肠早期手术根治,可以终止肠壁继 发性病变的发展. 参考文献 1江泽熙,胡家高,鲁建生,等.先天性巨结肠粘膜变化与 抗人体IgG免疫荧光研究中华小儿外科杂志,】991. 3:129. 2胡家高,江泽熙,鲁建生,等.新生儿巨结肠临床及病 理中华小儿外科杂志,1990,2;94. 3成々志主编.组织学.北京:人民卫生出版杜,1994 473—48l 4潘国宗,曹世植主编现代胃肠病学.北京:北京科学 出版社,1994.72—82. 5Smal【JV,FurstDOtMeynT.I_ocalizationof[ilamin insmoothmuscle.Jcel【Bi0【,1986,102【201. (收稿}1997一O卜一2O) 双侧副髌骨畸形1例 杨宝臣李海刘绍臣吕笑芬 患儿:男,13岁.因双膝肿胀半年,于1995年 3月2日入院.双膝无疼痛,无外伤史既往患脊膜 嘭出致双膝屈曲畸形,近一年加重.体检:双侧用绳 肌挛缩,膝关节肿胀,皮温不高,关节腔积液,髌 骨位置正常.浮髌试验阳性,于两倒髌骨上方股四 头肌深处各触及半月形孤立的硬性肿物与股四头肌 相连,可移动,无压痛,按压肿物时与股骨有撞击 感.x线片见左侧髌骨上10cm及右侧髌骨上6cm 处各有一半月形游离骨块,其软骨面光滑,边缀整 齐,有正常的松质骨结构,与股骨有一定阿隔,双 侧髌骨发育,位置,大小基本正常.诊断:双膝副髌 骨畸彤. 行手术治疗,在论解眉绳肌的同时切除副髌 骨.术中见股直肌肌腹缩短,而腱性部分明显变长 作者单位:1加062吉林省长春208医院外四科 (左13tin,右9cm),并附着于副髌骨上.副髌骨呈 半月形,有完整的皮质及橙质骨,有正常的关节软 骨面及少许滑膜其下方为巨大的髌上囊(左侧13 cm×8cm,右侧9cm×8cm),囊内有大量淡黄色 积渡.切除副髌骨,于髌骨上缘5cm处荷包缝合结 扎髌上囊.随访1年患儿已能行走,双膝关节肿胀 消失. 讨论:先天性副髌骨畸形并不多见.本例为舣 侧远距离副髌骨并伴有巨大髌上囊畸形.诊断有以 下特点:?双膝无外伤史及疼痛,在髌骨以外吖触 及较大的独立性井与股四头肌肌腱相连的骨块.? x线片可见与髌骨无关的游离骨块,边缘整齐,表 面光滑,有正常的骨结构,而髌骨发育,位置基本 正常.?有继发性骨膜炎,关节腔内积液.根据以上 特点可与二分,三分髌骨及游离体相区别. (收稿:1996—07—23】