【doc】大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型的时间梗死体积相关研究

【doc】大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型的时间梗死体积相关研究 大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型的时间 梗死体积相关研究 乃.J2 解放军医学杂志2000年4月第25卷第2期MedJChinPLAVol25No2Apr2000 .310.6? J{7~,330,.123. 大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型的时间梗死体积相关研究 250031济南济南军区总医院?t?末振郭逮苏 摘要采用鼠绶聚已烯醇栓线栓塞大鼠大脑中动脉,观察缺血1,L5,2,3,4,6,9,12及 24h后2红四 氮唑(TTC)标记的梗死体积,并与时间进行了相关结果表明缺血1h组及 90rain组1"rc染色未发现梗死灶, 缺血2h大鼠基底节区出现梗死灶,边界欠清.4h缺血动物梗死体积明显增大,和 2,3h组比较差异已有显着性意 义(P<0.01).各组动物随缺血时间梗死体积渐趋增大,与时间有显着相关性(r一 086,P;0.002).至12h梗死 体积渐趋稳定,与24h点相比差异无显着性意义,但24h组动物死亡率高.该研究为 扩大治疗时间窗的保护性治 疗提供了理论依据. 关t词迎;梗塞;生2垦.fli鹊E窒.中目圈书资料分类号R743' CoRRELATIOHBETWEENTIMEANDINFARCTVoLUMEINF0CALCEREBRAL ISCHEMIAoFMIDDLECEREBRALARTERYINRATS CaoXia,CaoBingzhen,GuoShusu.TheJinanGenera1HospitaIofJinanCommand,Jinan 250031 AbstractToexplorethecorrelationbetweentimeandinfaletvolumeinpermanantintralumin alocclusionof middlecerebralarterymodelinrats,weinducedfocalcerebral;schemiain54maleWistarrats byintraluminal ocelusionofmiddlecerebralarteryforl,1.5,2.3,4,6,9,12and24hoursrespectively.The correlationbetweentimeandinfarctvolumeanalyze~Thein[arctlesionwasinitiallyfoundat 2hoursof isehenda.mainlylocatedinthestriatum,andthenevoluteduntil12hoursofischemla.Therew asasignificantly positivecorrelationbetweentimeandin,且letvolume(r;0.86.P一 0.002).Twenty-fourhoursischemiaindueed arelativehighermortalitythan12hours,buttheinfarctvolumebetweentwogroupswasnotsig nificant.We coneludedthatthereisatimeoOtll~eofinfarctvolumeinintraluminalocclusionofmiddlecer ebralarterymodelin rats. Keywordscerebralischemia'time;infarct;volume/rat 栓线法大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型被 广泛用于实验性脑缺血研究0.但目前有关该模 型梗死体积大小与时间的相关性尚未见研究报道. 人类脑缺血研究已证明缺血性损伤程度有时间依赖 性,全部神经元死亡须在数天内完成".缺血性中 风能否得到有效的保护性治疗与把握治疗时间窗有 密切关系.因此,了解脑梗死演变的自然过程具有重 要意义.本研究基于以下两个假设:?在永久性大 脑中动脉阻塞性动物模型上,存在一个致梗死出现 的最小时间点;?梗死体积将随时间而增大,达一 定时间后将趋于稳定 1材料与方法 1.1动物及分组雄性Wistar大鼠54只,体重 240,350g,由山东医科大学实验动物中心提供, 实验前自由进食根据缺血时间分为缺血1,1.5,2, 3,4,6,9,12和24h组一6). 1.2栓线处理鼠须均取自于同批大鼠.取其长 度均不低于4cm,头端直径0.17,0.18mm(由山 东重汽集团技术室协助测量),用加热溶解的聚已烯 醇均匀涂于尖端5mrfl备用. 13手术操作用1戊巴比妥钠(30mg/kg)麻 醉取颈旁侧切口切开皮肤及皮下组织,分离左侧颈 总动脉,缝扎颈外动脉并电凝颈外动脉分支,切断二 腹肌肌腹,暴露翼腭动脉并用丝线缝扎.近心端结扎 颈总动脉,颈动脉分叉处穿线备用,血管夹夹闭颈总 动脉远端,在颈总动脉上剪一小口,边松血管夹,边 进线,至有阻力不能再进为止. 全部动物均按规定断头,脑组织取出后即置于 一 22?低温冰箱快速冷冻后,由前向后每隔1rflrfl切 取组织片10片,置2红四氮唑(TTC)溶液中37? 孵育待显色完全后置甲醛溶液固定.手术显微镜下 将每片组织照相,对其不显色部分经图像分析系统 曹霍,副主任医师,主妻^L事脑血管痛的基础亚临康研宽,已发 表静文20音篇. ? ?124?解放军医学杂志2000年4月第25卷第2期MedJChlaPLAVot25No2Apt2000 处理后计算其梗死体积(mrn.). 1.4统计学处理时间与梗死体积关系采用回归 分析,梗死体积比较采用方差分析 2结果 4h组1只动物因麻醉过量致呼吸心跳停止死 亡,24h组有3只动物在出现典型症状后在规定时间 内死亡,因具体时间不确定未做统计. 缺血1h组及90min组TTC染色未发现梗死 灶,缺血2h大鼠基底节区出现梗死灶,边界欠清,缺 血3h梗死灶累及皮层,但层面较少.4h缺血组动物 梗死体积明显增大,和2,3h组比较差异已有显着性 意义(P<0.01).各组动物随时间梗死体积渐趋增 大,回归分析示与时间有显着相关性(r一086,P 一 0002).至12h梗死体积渐趋稳定,与24h点相比差异无显着性意义.结果见附图. 一 目 一 垃 坦 附图大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血梗死 体积与时间的关系 3讨论 本研究采用TTc染色作为标记梗死体积的指 标,TTC的不着色表明细胞进入膜衰竭即不可逆阶 段,因此该研究中所表示的损伤范围将不包括半暗 带组织.结果表明缺血1h及90min未出现梗死灶, 2h点出现梗死灶,主要累及基底节区. Schmid-Elsaesser等"曾在90rain缺血再灌流模型 上观察到有梗死灶出现,本研究尽管在90min至2h 期间未傲进一步观察,但可推测在永久闭塞非灌流 性大脑中动脉缺血模型上,其致梗死灶出现的最早 时间点可能在2h以内基底节区因系穿支动脉供 血,对缺血更为敏感,梗死灶出现较早 本研究还表明梗死体积随时问进行性增大.4h 点其梗死体积与2h点差异有显着性意义,回归分析 表明时间与梗死体积有显着相关性12h点梗死体 积已基本趋于稳定,与24h点差异无显着性意义,但 缺血24h组动物死亡率高,本组研究中6只动物有3 只死亡(50).目前国内外尚未见有关大脑中动脉 局灶性脑缺血模型梗死体积的时闻变化报道,本研 究12及24h点的梗死体积与国外报道相一致". 脑梗死体积随时问变化反映了从脑血流阻断到组织 梗死的时间过程,另外脑血流的阻断亦可能呈一渐 进性过程,即在栓线周围的血栓形成对血流的阻断 及侧支循环的破坏可能行使重要作用.进一步研究 该动物模型脑血流的动态变化将有助于证实这一假 设. 另外,有关栓线法大鼠大脑中动脉局灶性脑缺 血模型的大量研究报道,提示其具有不稳定性,梗死 体积的差异会不会是该模型不稳定的结果?本研究 的前期工作已探讨了影响模型稳定性的因素,并采 用聚乙烯醇鼠须栓线良好的饵决了这一问题,结合 本组实验组内梗死体积变异较小,且与时间有良好 的相关性,其梗死体积随时间的差异非误差所为* 上所述,大鼠大脑中动脉永久性闭塞性脑缺血模型, 梗死体积出现的最小时间点可能为2h,体积随时间 进行性增大,至12h基本趋于稳定.该研究为扩大治 疗时间窗的保护性治疗提供了理论依据. 参考文麓 1KoizumiJ.Yoshid冉Y,NakazawaTat.Experiment*】studies ofjschemlebraineden3~.AnewexperimerRa]modeIofcerebra【 emboKsmint'atsinwhMhreeireu[ationca?beintroduced?the ischem[c81.~1.J如JStroke,1986,8}1 2ZeaLongaE,We[astenPR.CartsonSda1.Reversiblemiddle ce~bralarteryocclusionwithoutcraniectomyinrats.Stroke, 1989,20:84 3WangLC,FutrellN,WangDZd口.Areproducib[emodelor middlece~bralinfarcts,compatiblewithIon~temsurviva1.in agedr~ts.Stroke.1995,26}2087 4Baz~aJC,v.nKummerR,delZoppoGJ.Treatmentofagllte ischemicstroke:Challengingthe~oaeeptofarigidanduniversial timewindow.Stroke,1995,26:2219 5Marcha[G,BeaudouiaV,RiouxPda1.Prolongedpersistenceof substantialvolumesofpotentiallyviablebraintissuealter stroke:AcorrelativePET1CTstedywithvoxel-basedd冉u analysis.Stmke,1996,27}599 6Schmi&Ela~esserR.Zaus~ngerS.HungerhuberEda1.A critica】reevaluationorthejatralumina【threadmode10ffocaI cerebra【iscbem[a.Stroke,1998,29:2162 (1999—07—29收藕2000—01—24惨回) (本文编辑丁震)