定值曲线法测定凝血酶原时间国际标准化比值

定值曲线法测定凝血酶原时间国际化比值 定值曲线法测定凝血酶原时间国际标准化 比值 第24卷第2期 Vo1.24No.2 四川I省卫生管理f部学院 JOURNA1OFSICHUANCONTINUINGEDUCAT10NCO1IEGEOFMS 2005年6月 Jun.2005 定值曲线法测定凝血酶原时间国际标准化比值 严达刚,周泓君,华毅,张仪佳 (攀枝花市中心医院检验科,四川I攀枝花617067) [摘要]目的:利用正常血浆和定标血浆,建立一种准确可靠,易于实验室开展的凝血酶原时间国际标准化比值检 测.方法:根据准确度的传递,将被定值的正常血浆和定标血浆同时用称量法分别作6个不相同的稀释度稀释后上 机进行检测.将待定值血浆值(X轴)与稀释度1/A(Y轴)绘制"校标"曲线;根据定标血浆测得的PT值,用内插法查 得相对浓度I/A(X%)与计算相对浓度(Y%)绘制曲线,并进行回归处理得到INR的定值曲线;根据定值曲线绘制PT测 (Y轴)与1NR测(x轴)INR应用曲线.结果:血浆INR值与PT值有良好的线性关系(r=0.997),同一试剂本方法检测质 控血浆INR值,重复性良好(CV<2%);不同试剂测定血浆INR值,结果显示本方法优于公式计算法,其结果与手工结果 有很好的相关性(r=0.99),同时比仪器法更接近手工检测法(t检验P值:0.021对0,077).结论:本方法在检测抗凝治 疗患者血浆INR值时,干扰因素少,结果准确可靠,可能更接近待检血浆的INR"真值". [关键词】准确度传递;定值曲线;凝血酶原时间;国际标准化比值 [中图分类号]R446.1l2[文献标识码]A[文章编号】1003—4o3x(2oo5)02—0081—03 UsingthesemedValueCurveMethodtoDe~ctInternationalNormalizedRatioofProthrombmTime./YanDagang.Zhou Hongjun-HuaYi-eta1.//DepartmentofLaboratoryme~cme.CentralHospitalofPanZhiHua.SiChuanProvince.617067. China. AbstractObjectives:Usingnormalplasmasandcriterionplasmastoestablishakindofaccurateandfeasiblemethodthatcouldmeasure internationalnormalizedratio(INR)ofprothrombintime(PT).Methods:Accordingtothedeliveryofaccuratedegree.wedilutedthe settledvaluenormalplasmasandcriterionplasmasintosixdifferentdilutiondegreeswithweighingmethodatthesametimeandmeasured themwithtIlemachine.111ecriterioncurvewasmadewithPTvalueofthesettledvaluenormalplasmasasXaxisandthedilutionde— grees(I/A)asYaxis.AccordingtoPTvalueofstandardplasmas-thecurvewasmadewiththerelativeconcentration(I/A)asXaxis thatwasacquiredfrominternalinsertmethodandtherelativeconcentrationasYaxisthatwasacquiredfromcalculation.Then-through orthogonalregression,thesettledvaluecuEvewasformed.Atlast.theapplicativecurvewasmadewithPTvalueasXaxisandINRvat— HeasYaxisaccordingtothesettledvaluecurve.ResllIts:INRandPTvalueofplasmashavegoodlinearrelation(r=0.997).The repetitionofmeasuring1NRvalueofINRcontrolplasmasinthesameregentswiththismethodisgood(CV<2%).111eresultsshow thatthemethodisbetterthanformulaeale~ationmethodwhenusingdifferentregentstomeasure1NRvalueofplasmas.Atthesa/ne time-theresultsfromthemethodandtheresultsfromtheartificialmethodhaveagoodrelation(r=0.99).Theyaleclosertothere suitsfromtheartificialmethodthaninstrumentmethod(ttest-Pvalue:0.021vs.0.077).Concl usions:Whenthemethodisusedto measureplasmasINRvalueofpatientswithanti—coagulationtreatment-theinterferencefactorissmall-andtheresultisaccurateand reliable.Itmaybeclosertothetruevalueofplasmas. KeywordsDeliveryofaccuratedegree:Thesettledvaluecurve;Prothrombintime:Internatio nalnormalizedratio 国际标准化比值(InternationalNormalizedRatio, INR)或INR系统是WHO推荐进行凝血酶原时间测定 (PT)的国际标准化报告方式_lJ,其结果是通过手工检 测制定的.而仪器测定时,受一系列因素的干扰而影 响其室间可比性_2_3J.本文用正常血浆和定标血浆, 建立一种直接检测口服抗凝剂患者血浆INR值的方 法 1材料与方法 1.1仪器和试剂 1.1.1仪器ACL200全自动血凝仪(美国,贝克曼 库尔特公司);电光分析天平(上海天平仪器厂);小型 三用水箱(北京西城区医疗器械厂);秒表(上海秒表 厂). 1.1.2试剂PT试剂I(兔脑凝血活酶Thromboplas— tinis).ISI标为1,40(美国,InstrumentionLaboratory公 司,批号:N03315465);PT试剂?(兔脑凝血活酶NEO— PLASTINCIPIAS),ISI标为1.23(法国DiagnosticaStago 公司,批号:990505);仪器定标血浆(美国,Instmmention Laboratory公司,批号:N0432636);INR质控血浆(美国, PacificHemostasis,批号:100565);质控血浆LevelI, Level?(美国,DADEBEHRING公司). 四川省卫生管理干部学院2005;24(2) 1.2研究对象及标本处理 1.2.1研究对象正常健康组为20例正常健康人, 其中男11例,女9例,平均年龄34岁(21岁,47岁); 待定值的正常组为20例Frr在9.0,11.0秒之间的健 康人,其中男l1例,女9例,平均年龄33岁(21岁,46 岁);抗凝组为本地心脏手术后患者37例(本院2l例, 外院16例),其中男20例,女17例,平均年龄38岁(25 岁,69岁),平均每天口服"华发令"剂量1.86rag (0.825mg,3.750rag). 1.2.2标本处理顺利抽取静脉血4.5ml,注人有0.5 ml枸橼酸钠(0.109tool/L)的塑料试管,2500g离心 10rain,分离血浆,检测4h内完成. 1.3方法 1.3.1检测方法手工检测用"试管法",在37? 水箱进行,仪器检测按进行. 1.3.2INR公式计算法Ll』按WHO推荐INR计算公 式计算INR值.INR计算公式:INR:(待检血浆/ MENT),仪器的ISI标定见文献[,MENT(Mean) 为正常健康人平均值,MENT测定按WHO推荐方 法进行…. 1.3.3INR值直接测定方法将待定值血浆和定标 血浆同时用称量法(精确到小数点后4位)分别作 (100%,75%,50%,25%,10%,5%)6个不同的稀释度 稀释,放置10rain后上机进行检测.INR应用曲线的 制备:将待定值血浆值(x轴)与稀释度1/A(Y轴) 绘制"校标"曲线,根据定标血浆测得的值,用内插 法查得相对浓度l/A(x%)与计算相对浓度(Y%)绘 制曲线——计算公式=待定值血浆重量/(待定值血浆 重量+稀释液重量),并进行回归处理分析判断得到 INR的定值曲线,斜率():INR标/INR测,即:INR测 = (1/p)INR标.根据定值曲线绘制PT测(Y轴)与 INR测(x轴)INR应用曲线,同时对其进行比较评价. 以上操作每人单独完成,每个稀释度重复三次取平均 值,称量,复溶,稀释以及测定数据,都必须严格准确记 录,然后综合处理绘制一条INR应用曲线. 待检血浆INR的测定:根据仪器或手工测定 值,利用INR应用曲线用内插法直接得到待检血浆的 INR值. 2结果 2.1INR定值曲线及其PT(S)一INR应用曲线 两种试剂的相对浓度曲线,INR定值曲线及其Frr (S)一INR应用曲线结果见表1.二者的(s).INR应用 曲线图可以用对数坐标纸画出,本文略. 表1Prr试剂I的相对浓度曲线,INR定值曲线及其Prr(s1.INR应用曲线综合结果 注:*PT试剂I的相对浓度曲线:Yl=1.7188xl+0.0OO4,rl=0.9999;定值曲线:INR测=(1/1.7188)INR标: Prr(s)一INR应用曲线:Prr测=6.3602INR测+6.671l,rl=0.9971; **Prr试剂?的相对浓度曲线:Y2=1.7097x2+0.0OO6,r2:1.0000;定值曲线:INR 测:(1/17092)INR标 P1.(s)一INR应用曲线:PT测=7.3336INR测+5.6886,r.:0.9985. 2.2方法学评价 2.2.1线性分析从应用曲线上看到,INR值在0.60 , 7.00范围内,与测定的有很好的线性关系,两种 试剂应用曲线中INR与血浆凝固酶时间相关系数 均在0.99以上. 2.2.2同一试剂重复性测定利用INR应用曲线直 接测定法,用试剂I将INR质控血浆(INR质控血 ? 82? 浆标值分别为:1.0,1.8,2.8,3.1,4.5)重复测定10次, 计算CV值.5瓶INR质控血浆测定结果(土)分别 为:0.95土0.02,1.79土0.03,2.82土0.05,3.12土0.06, 4.46-4-0.07,CV<2%. 2.2.3不同试剂重复性检测按上述INR应用曲线 直接测定法,分别用两种试剂直接测定5瓶INR质控 血浆的INR值,每种试剂测定10次,比较两种试剂测 24卷2期严达刚,周泓君,华毅,等:定值曲线法测定凝血酶原时间国际标准化比值 定结果之间的变异系数,结果见表2. 2.3方法学比较 根据WHO推荐的INR计算方法,在仪器上分别 用两种试剂测定5瓶INR质控血浆的INR值(MENT 为仪器测定的正常健康组Pr平均值,IsI试剂厂家提 供).两种试剂测定的INR值之间的变异系数(%)分 别为:8.4,7.8,9.9,10.0,10.4,均明显高于INR应用 曲线直接测定法(结果见表2). 表2INR应用曲线直接测定法不同试剂的重复性比较 INR质控血浆标值Frr试剂IFrr试剂?变异系数(%) 1.00.95-I-0.020.97-I-0.024.9 1.81.79-I-0.031.79-I-0.032.9 2.82.82-I-0.052.81-I-0.O42.4 3.13.12-I-0.063.1l-I-0.073.8 4.54.46-I-0.074.48-I-0.084.6 2.4临床标本检测 用Pr试剂I,分别用手工,仪器法和INR应用曲 线直接测定法测定抗凝组患者血浆INR值,结果显示 本方法及手工法,仪器法测定结果均有很好的相关性 (r:0.99).将本方法以及仪器法与手工法检测结果 进行t检验,结果表明本方法检测的INR值更接近手 工检测结果(两者P值为:0.021对0.077). 3讨论 WHO推荐PT国际标准化测定是建立在手工 测定方法的基础上,它用于自动化仪器时存在较大的 室间误差l4J.其原因有:ISI值的准确性;MENT是否 合适;仪器自身独立的IsI对酶活性的影响[.仪器 自身的ISI值的影响须通过校正仪器或检测系统(室 内)的IsI值来克服[6,7],但这需要大量新鲜临床抗凝 患者血浆,临床实验室难以解决[引,显然可以通过经常 校定仪器的IsI值来解决误差[引,但需要花费大量的 人力物力和时间.本文介绍的INR测定方法,通过准 确度传递,采用定值法建立的INR应用曲线,可以直接 测定待检血浆的INR值. 实验中看到,准确度传递过程中,两种试剂相对浓 度曲线的截距小于0.0006(稀释度的l/A在0.01, 0.20之间),二者斜率非常接近,相关系数均接近于l (r=0.9999以上),说明标准血浆与待定值血浆具有 很好的平衡性,其血浆基质效应影响极小(这种极小差 异可能由于操作或人种所致).由于本方法只涉及百 分稀释浓度,而与IsI值无关,因此不同试剂之间几乎 不影响INR定值曲线.INR应用曲线在测定范围(0. 60,7.00)内有良好的线性关系,说明本方法可以在适 用范围内用于检测待检血浆的INR值. 从实验中得知,本方法,仪器法及手工法具有良好 的相关性,并且本方法,仪器法与手工法结果比较(t 检验P值为:0.021对0.077),说明本方法优于仪器 法,更接近手工法,与文献报道的标准曲线法基本一 致[引.由于本方法在同一试剂和不同试剂里的检测结 果重复性好,不需要临床实验室考虑检测系统ISI以 及MENT对检测结果的影响,同时又克服了标准血浆 与待检血浆的基质效应的影响,仪器自身独立的IsI 值在建立INR应用曲线过程中被自动抵消.因此,其 结果准确可靠,更接近待检血浆的INR"真值".由于 本研究是在单一实验室完成,其临床实用性尚需多家 实验室共同研究证实. 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