紫外线诱导面部毛细血管扩张动物模型建立

紫外线诱导面部毛细血管扩张动物模型建立 紫外线诱导面部毛细血管扩张动物模型建 立 [摘要]目的,为筛选治疗面部毛细血管扩张药物建立动物 模型。方法,采用260,350nmUVB和340,400nmUVA 长期照射大鼠背部裸露皮肤,通过HE染色观察大鼠皮肤组 织学变化。结果,与空白组大鼠皮肤相比较,各组大鼠皮肤 均出现不同程度的毛细血管扩张,造模成功。结论,本实验 所研究的造模方法简便易行,经济可靠,可复制性强。 [关键词]面部毛细血管扩张,紫外线,动物模型 [中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编 号]1008-6455,2009,02-0336-03 The establishment of facial telangiectasia animal modle by ultraviolet irradition ZHANG Li-hong,LI Chun-yu,ZHANG Gui-fen (Jiamusi Medical College,Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine,Jiamusi 154007, Heilongjiang,China) Abstract: Objective To establish animal model for evaluation of drugs facial telangiectasia. Methods The 1 dorsal hairless rats were exposed to ultraviolet A(UVA340,400nm) and ultraviolet B(UVB260,350nm) for a long-term.To observe the degree of skin damage by HE strain. Results The telangiectasia of each group was differently obvious that they compared to control group. The animal model of facial telangiectasia was copied successfully. Conclusions The study on construction of animal modle was investigated. The method is easy, economic and repeatable. It can be generally used for facial telangiectasia study. Key words: facial telangiectasia; ultraviolet; animal modle 伴随着生活水平的提高,人们对“形神俱美”的渴望愈加强 烈,特别是在由生物医学模式转向生物-心理-社会医学模式 的今天,美丽的容颜成为人们追求的目标。面部毛细血管扩 张症是影响美容的主要因素之一,不但影响人们的外表,而 且严重影响皮肤汲取营养,久而久之导致皮肤供养不足,造 成粗糙,干燥和过早衰老的症状。既往治疗面部毛细血管扩 张的方法很多,如局部外用雌激素、液态氮冷冻、二氧化碳 激光、微波、电灼等[1-2],但都存在操作繁琐,副作用大, 易复发等缺点。寻找有效药物对抗毛细血管扩张,已经成为 研究热点。面部毛细血管扩张动物模型是研究面部毛细血管 2 扩张机理及筛选防治面部毛细血管扩张药物的重要媒介。目前,面部毛细血管扩张动物模型国内外均未见报道。本文通过紫外线诱发大鼠皮肤毛细血管扩张模型,为新药的研发奠定基础。 1材料 1.1仪器,SS-03AB型紫外线光疗仪,UVB发射光谱260,350nm,峰值311nm,UVA发射光谱340,400nm,峰值365nm,,上海希格玛高技术有限公司,UVB、UVA紫外线辐照计,北京师范大学光电仪器厂,大鼠固定器,200g,,苏州市冯氏实验动物设备有限公司,劲霸牌JB718型电推剪。 1.2动物,健康雌性Wistar大鼠50只,4,6月龄,体重(0.2?0.02)kg,佳木斯大学动物中心提供。 2方法 2.1 动物分组,将50只大鼠随机分为3组,分别为空白组,10只,,模型组,30只,,模型监测组,10只,。将大鼠置于大鼠固定器中,用记号笔标记大鼠背部两侧拟照射的范围,每侧4cm2,取出大鼠,用电推剪剃净该范围内的毛,隔天剃一次,使皮肤充分暴露。 2.2 动物照射,空白组大鼠仅剃除背部标记部位的毛,不予紫外线照射,模型组大鼠和模型监测组大鼠剃毛后置于固定器中,于紫外线光疗仪下100cm处,用紫外线辐照计 3 测得UVB强度为0.12mW/cm2 UVA强度为1.05mW/cm2,照射,每天照射15min,模型组30只大鼠随机分为3组,分别照射20天、30天、40天,模型监测组大鼠于实验30天末停止照射,自然恢复10天。观察照射期间及停止照射后局部皮肤变化。 2.3 取材,分别于实验第20天、30天和40天末,将各组大鼠用乙醚麻醉,置于自制手术台上,剃毛,常规手术切取背部皮损组织约1cm2,用4%中性福尔马林溶液固定。 2.4 HE染色 2.4.1 HE染液的配制,?Harris苏木素,苏木素1g溶于10ml无水酒精中,硫酸铝钾20g溶于200ml蒸馏水中。两液分别加温溶解后混合,继续加热煮沸,离火后加入0.5g黄色氧化汞,用玻璃棒搅拌至溶液呈深紫色,立即将容器置冷水中迅速冷却后过滤,加入4ml冰醋酸即配成Harris苏木素,?伊红溶液,将lg伊红溶于100ml蒸馏水中,待溶解后加入30ml冰醋酸。边加边搅拌,使之呈混悬液,再加入蒸馏水100ml,使其作用10,20min,过滤,取沉淀物烤干,然后取0.25,0.50g溶于95%酒精100ml中即配成伊红溶液。 2.4.2石蜡切片,切取的标本经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等过程制成蜡块,然后切片,将切下的蜡片置于温水中,选择完整、无划痕、厚薄均匀的蜡片,附贴到载玻片上,每 4 张切片标记相应编号。 2.4.3 HE染色过程,?二甲苯脱蜡,2次,每次10min,?梯度酒精脱二甲苯,100%、90%及80%酒精各3min,?自来水冲洗,甩干,?苏木素染色5min,自来水冲洗,甩干,?盐酸酒精分化9s,自来水冲洗,甩干,?氨水返蓝9s,自来水冲洗,甩干,?伊红染色3min,自来水冲洗,甩干,?梯度酒精脱水,80%、90%及100%酒精各3min,?二甲苯透明,2次,每次3min,?中性树胶封片,?显微镜下观察结果,×200,。 3结果 3.1肉眼观察 模型组大鼠受照皮肤早期可见轻度红斑,随着时间的推移逐渐出现表皮颜色加深、皮肤增厚、粗糙变硬、失去弹性及光泽的现象。与空白组比较模型组大鼠皮肤受照部位异常改变明显。模型监测组大鼠停照10天后,皮肤红斑有所减轻。 3.2皮肤组织学变化,空白组大鼠皮肤,图1,表皮层结构完整,细胞层清晰可见,厚度正常,真皮层可见波浪状纤维组织排列有序,分布均匀,毛细血管正常,紫外线照射20天组大鼠皮肤,图2,真皮血管轻度扩张,紫外线照射30天组大鼠皮肤,图3,真皮血管明显扩张,少量淋巴细胞浸润,紫外线照射40天组大鼠皮肤,图4,真皮血管扩张,血 5 管数量减少,大量淋巴细胞浸润,胶原纤维断裂,模型监测组大鼠皮肤,图5,停止照射紫外线10天后,观察到表皮黑色素沉积及真皮层毛细血管扩张均有所减轻,但同正常皮肤相比差别较大。 4讨论 日光中的UV分别为短波,UVC100,290nm,、中波,UVB290,320nm,和长波,UVA320,400nm,。由于大气层中存在臭氧层,UVC几乎被全部吸收,到达地面的紫外线主要为UVA和UVB。由于UVA的生物活性比UVB弱的多,大约是UVB的1/1000,所以人们过去认为引起皮肤产生红斑的UV主要是UVB,而UVA除了能使皮肤晒黑外,几乎对人体无害[3]。近年来,研究发现UVA,320,400nm,剧烈照射与UVB一样,也能产生扩张和血管损伤,甚至引起的改变比UVB更为严重[4],只是产生这种效应所需的剂量较UVB大1000倍,日光中UVA是UVB剂量的500,1000倍,可见UVB和UVA 都是造成毛细血管扩张的主要因素。本实验中采取UVA、UVB联合的方法照射大鼠背部剃毛区,观察到随着照射天数的增加,大鼠皮肤出现从轻度红斑到明显红斑,再到皮肤颜色加深、粗糙变硬的变化,光镜下可观察到真皮下毛细血管扩张,提示造模成功。 6 造模过程中照射剂量是决定造模成功与否以及实验周期长短的关键因素。在预实验中曾采用每天照射5min的方法制造毛细血管扩张模型,发现经过50天的照射大鼠皮肤没有明显改变,60天后才出现轻度红斑,这样就延长了实验周期。之后采用每天照射20min的方法,发现仅经过几次照射,大鼠皮肤出现水泡、糜烂,提示大鼠皮肤被灼伤。经过摸索最后确定每天15min的照射剂量,大鼠的皮肤不但不会被灼伤,而且实验20天就可观察到毛细血管轻度扩张,30天时毛细血管明显扩张,缩短了实验周期。 在预实验过程中发现,当大鼠裸露皮肤经过30天紫外线照射时,毛细血管明显扩张且黑色素少量沉积,是比较理想的毛细血管扩张模型。为检测所造模型的持久性,在正式实验中设置模型监测组,即大鼠经过30天的照射后自然恢复10天,通过所得皮肤组织学变化照片观察到毛细血管的扩张程度减轻,但与空白组相比较区别仍然显著,提示本实验所采用的造模方法简便易行,经济可靠,可复制性强。 本研究建立毛细血管扩张动物模型的同时,也得出了皮肤随照射时间延长而发生的表象及皮肤组织的变化规律,毛细血管在紫外线照射早期扭曲、增粗扩张,随即管壁变薄、数量明显减少,真皮中的血管损伤,其程度与照射时间成正比,其数量与照射时间成反比。 综上所述,用紫外线照射法建立面部毛细血管扩张动物 7 模型,其方法可靠、简便,有望成为筛选治疗面部毛细血管 扩张药物的造模手段,为美容产品的研发提供方便。 [参考文献] [1]李利,牟韵竹,蒋献,等.高能脉冲治疗色素性和血管性皮 肤病临床观查,J,.中国美容医学,2004,13,5,,541-544. [2]Kay A Coleman,著。姚培元,李德淳,译.医学美容换肤 术[M].天津:天津科技翻译出版社,2000:243-479.. [3]Kligman AM. Early destructive effects of sunlight on humanskin,J,. JaMa, 1969, 272:2377-2380. [4]Krutmann J.Ultraviolet A radition induced biological effects in humman skin:relevance for photoaging and photodermatosis,J,.J Dermatol Sci,2000,23(suppl1):22-26. [收稿日期]2008-11-06[修回日期]2009-01-07 编辑/张惠娟 8