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黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的影响因素

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黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的影响因素黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的影响因素 黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚 胎发育的影响因素 第25卷第2期 2006年4月 华中农业大学学报 journalofHuazhongAgriculturalUniversity V01.25No.2 Apr.2006,153~158 文章编号1000—2421(2006)02—0153—06 黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及 早期胚胎发育的影响因素 龙翔?余荣?耿利英周木清.熊家军?杨利国h (“南京农业大学动物繁育研究所,南京210095;华...
黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的影响因素
黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的影响因素 黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚 胎发育的影响因素 第25卷第2期 2006年4月 华中农业大学学报 journalofHuazhongAgriculturalUniversity V01.25No.2 Apr.2006,153~158 文章编号1000—2421(2006)02—0153—06 黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及 早期胚胎发育的影响因素 龙翔?余荣?耿利英周木清.熊家军?杨利国h (“南京农业大学动物繁育研究所,南京210095;华中农业大学动物科技学院,武汉430070~ 武汉开隆高新农业发展有限公司,武汉430345) 摘要从屠宰场收集黄牛卵巢,取皮质深层卵母细胞进行体外成熟,体外受精和早期胚胎体外培养,分析影 响其效果的因素.结果明,在成熟培养液中添加促卵泡素(FSH)(10IU/mL),人绒毛膜促性腺激素(HCG) (20IU/mL)和17雌二醇(17)(1~/mL)对卵母细胞受精后早期胚胎发育能力有极显着的促进作用.等 量牛卵泡液(BFF)与初生犊牛血清(NCS)效果差异不显着,以添加15BFF为最宜.颗粒细胞与输卵管上皮 细胞均能显着提高卵母细胞体外成熟受精后早期胚胎的发育率,颗粒细胞+输卵管上皮细胞对克服胚胎阻滞现 象效果最显着. 关键词卵母细胞;体外受精;胚胎 中图法分类号S823.3文献标识码A 随着胚胎移植技术的推广应用,体外受精,核移 植,转基因等胚胎技术取得了很大进展,进而对 牛胚胎的需求量日益增加l】].迄今,这些技术主要 利用具有完全发育能力的卵母细胞进行体外受精, 而对卵巢皮质内数量众多的直径小于2mm卵泡内 卵母细胞并未得到充分利用.为了扩大优质卵母细 胞的来源,最大限度地发挥优良母牛的遗传潜力,一 些学者对腔前卵泡卵母细胞进行了研究,初步证实 腔前卵泡在体外具有一定的发育能力,但要发育到 成熟卵母细胞,需要相当长的时间l2_引. 所有哺乳动物在胚胎发育时期约有3O万个卵 母细胞,但在自然繁殖条件下牛一生只有6,8个卵 母细胞被利用,随着个体的生长发育和卵泡的发育, 可被利用的卵母细胞逐渐减少[6].为了充分利用潜 在的牛卵母细胞资源,本研究以来源广泛的黄牛卵 巢内直径小于2mm卵泡卵母细胞为模型,从激素 种类,用量等方面分析影响直径小于2mm卵泡卵 母细胞体外成熟,体外受精及其早期胚胎发育的因 素,旨在为建立牛小腔卵泡卵母细胞体外培养,体外 受精及其受精卵体外培养的奠定基础,为实施 奶牛和肉牛体细胞克隆,生物反应器等胚胎工程技 术提供大量受体卵. 1材料与方法 1.1卵巢处理与卵母细胞的获取 从武汉清真牛羊加工公司屠宰车间取刚屠宰后 的黄牛卵巢,置于装有38?灭菌生理盐水的保温瓶 中,在2h内带回实验室.随后,去除卵巢周围脂肪 组织及系膜,用灭菌生理盐水冲洗卵巢至无血为止, 用带l6#针头的注射器吸除卵巢表面直径大于 2mm卵泡后,用灭菌吸水纸吸干,备用. 将采过表面卵泡的卵巢置于8cm培养皿内,用 手术刀片对卵巢皮质进行纵横方向l,2mm间距 切割,然后用含lO9,6新生牛血清(NCS,GIBCO, 1121073)的D-PBS液反复冲洗,去除组织块,在培 养箱中静置5,10min,置体视显微镜下检出卵丘 卵母细胞复合体(COCs). 1.2卵母细胞体外成熟 选择卵胞质均匀,包被完整卵丘细胞的卵母细 收稿日期:2005-07-04 *国家三峡移民科技开发专项(2002EP090019),湖北省自然科学基金项目(2005ABA147),武 汉市攻关项目(20022005132—19)资助 **通讯作者.E-mail:ylg@mail.hzau.edu.on)Tel:027—87281813 龙翔,男,1972年生,讲师,南京农业大学动物遗传育种与繁殖专业硕士研究生,南京 210095.E-maihlongxiang402460(~163.cOm 华中农业大学学报第25卷 胞,用成熟培养液洗涤3,4次,转人预孵2h的 IVM微滴中,每个微滴转人卵母细胞1O枚,置于 38.5?,5COz,饱和湿度的CO2培养箱中进行成 熟培养. 按参考文献1-71中的方法,在受精前2h用成熟 培养液制作体外成熟(IVM)微滴,用含肝素钠(Jz 海伯奥,010903)的BO液制作体外受精(IVF)微 滴.BO液组成及含量(g/I):NaCl6.5500,KC1 0.3000,CaCI20.2429,Nail2PO,?12H2O0.2929, MgCI2?6H2O0.1060,NaHCO~3.1040,葡萄糖 2.5000,丙酮酸钠0.1375,BSA3.0000,青霉素 0.0310,最后用蒸馏水溶解至1000mI. 1.3精子体外获能与体外受精 取2支黄牛细管冻精快速解冻后,采用上浮法 收集精子,用精子洗涤液(含咖啡因3.884mg/mI 的BO液)离心(1500r/min,10min)洗涤2次后, 在获能液(BO液+0.01mg/mI肝素钠)中获能 30min. 取50I精子悬浮液加至已预孵2h的受精微 滴中,将培养24h的卵母细胞用成熟培养液洗涤 3,4次,转人受精微滴中,每1微滴转人10,15枚 卵母细胞.8,10h后将与精子悬浮液共培养的卵 母细胞转人胚胎培养液(含50t~mol/I牛磺酸,上 海伯奥,030918)中,每24h按半量换液,48h后开 始统计卵裂率. 1.4颗粒细胞单层的制备 在15mI规格离心管中加人吸除卵母细胞的 颗粒细胞液和4mIM199液及2mI0.2透明质 酸酶(Sigma,030224)溶液,5min后,离心 (1800r/min,5min),弃除上清,加人适量的成熟 培养液洗涤3次,使颗粒细胞终浓度为1x10 个/mI.吸取10I该液,加人已在COz培养箱中 平衡好的培养液微滴中,使其终浓度为1x10., 2x10个/mI.置CO.培养箱中培养32,48h备 用. 1.5牛卵泡液(BFF)的制备 用一次性注射器抽取卵巢表面上直径为2, 6mm的卵泡液,离心(1800r/min)5~10min,吸取 上清液,重复洗涤,离心1次,吸取上清液,然后分装 于Eppendorf管,在--20?下冷冻保存备用. 1.6输卵管上皮细胞单层的制备 将牛输卵管用35~37?灭菌生理盐水洗3,4 次,剪除纤维组织,用灭菌生理盐水洗3次,纵向剪 开,分别用灭菌生理盐水和0.76EDTA(Sigma, 030712)溶液洗3次,置0.76EDTA液中培养 1.5,2.0h,再用成熟培养液洗3次,然后用灭菌玻 片轻轻刮取输卵管上皮组织,收集刮取物于离心管 内,用成熟培养液离心(2000r/min,每次5min)并 洗涤2次;弃上清液,沉淀物用培养液稀释(5xl0 个/mI),吸取10I输卵管上皮细胞悬浮液,注人 于C()z培养箱预平衡2h的卵母细胞成熟培养液滴 中(100luI/滴),置CO2培养箱继续培养[8]. 1.7试验设计 1)激素对卵母细胞体外成熟与体外受精的影 响.对照组卵母细胞体外成熟用M199液(GIB(,0, 1204859)和10oANCS进行培养,试验组在此基础上 除添加10IU/mIFSH(030406)和1t~g/mI17la- E2(天津金耀,0303061)外,还添加15IU/mILH (030428),10IU/mIIH或20IU/mIHOG (030226)(以上3种激素均购自宁波激素二厂).卵 母细胞体外成熟受精后,转人胚胎培养微滴(M199 液+10FCS+50t~mol/I牛磺酸)中培养. 2)卵泡液对体外受精胚发育的影响.试验一 以M199液+10IU/mIFSH+20IU/mIHCG+ 1t~g/mI17f}-E2为基础液,以添加10NCS为对 照组,以添加10BFF为试验组.试验二以上述 基础液为对照组,试验组则在基础液中添加各种浓 度(5,10,15,20)的BFF液,用于培养.卵 母细胞体外成熟受精后转人各组相对应胚胎培养微 滴中培养(各组胚胎培养液为各自未添加激素的成 熟培养液+50t~mol/I牛磺酸). 3)细胞因子对体外受精和早期胚胎发育的影 响.本试验在卵母细胞体外成熟条件相同的前提 下,将受精卵的培养共分为4组,对照组用基础培养 液(M199液+10FCS+50t~mol/I牛磺酸)培养, 试验组用单层颗粒细胞培养微滴(MGC组),单层 输卵管上皮细胞培养微滴(MOEC组)培养,或先在 单层颗粒细胞培养微滴中培养,待胚胎发育至6一, 8一细胞后,再转人单层输卵管上皮细胞培养微滴中 继续培养(MGC+MOEC组). 1.8数据分析 卵母细胞在体外受精培养48h后,观察卵裂 数,以后每天观察胚胎发育情况,统计发育至各阶段 的胚胎数.体外受精率以卵裂率,即发生卵裂的胚 胎数占培养的卵母细胞总数的百分比计算,胚胎发 育率以检出的4一,8一细胞胚胎数或桑椹胚数占卵裂 第2期龙翔等:黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的影响因素155 胚胎数的百分比表示.各组间的百分数值统计差异 比较,采用检验. 2结果 2.1激素对卵母细胞体外成熟与受精及早期胚胎 发育的影响 用基础液(M199+10NCS)培养的卵母细胞 (图1)中,只有29.8受精(发生卵裂,图2),其中, 38.7的受精卵发育至4一细胞(图3),8一细胞期 图1培养24h的牛卵母细胞 Fig.1Abovineoocytecultivatedfor 24hoursinvitrofLeica.BFX100) (图4),发育至桑椹胚的胚胎只占受精卵总数的 l6.】%.相反,在基础培养液中添加IH或HCG 进行培养的329枚卵母细胞中,受精率达34.7, 其中77.2的受精卵发育至4一,8一细胞期,45.6 的受精卵发育至桑椹胚(图5).比较在基础培养液 中添加的激素种类和剂量对体外受精和胚胎发育的 影响,发现卵裂率和桑椹胚发育率以HCG处理组 最高(分别为38.0和50.0),4一----8一细胞胚胎发 育率以15IU/mIIH处理组最高(80.6,表1). 图2牛2.细胞胚 Fig.2Abovineembryoat2-~llstage fLeica,BF×400】 表1LH和HoG及LH剂量对牛卵母细胞体外成熟和受精及早期胚胎发育的影响? TablelEffectofsupplementsofluteinizingl10mloI.e(LII),humanchorionlcgonadotropin(HCC}and LHcontentonnmturationandfertilizationofoocytesandearlydevelopmentof锄bry0sinvitroincattle 1)同列百分数与基础培养液组比较.肩首字母相同,且均为大写或小写,表示统计差异不显着(P>O.05),字母不同?且均为大写,表示 统计差异显着(P<O.05);字母不同.且均为小写.表示统计差异极显着(P<O.01);基础液为M199q-10~NCS Valuesn1arkedindifferentcapitalsindicatesignificancelevelofstatisticdifferenceP>0.05?andvalu esindifferentsmalllettersrepre— sentthesignificancelevelP(O.O1,ascomparedwiththosetreatedwithbasicmedium;?BasicmediumcontainslOneonatecalfserum inTCM199medium. 2.2BFF对卵母细胞体外受精后早期胚胎发育的 影响 卵母细胞成熟液以M199液+10IU/mI FSH+20IU/mIHCG+1t~g/mI1713-E~为基础 液,胚胎培养液以M199液-t-10~50~mol/I牛磺 酸为基础液,比较在基础液中添加l0BFF或l0 NCS的效果.结果发现,在基础液中添加10~BFF 与添加10NCS相比,体外受精卵发育至桑椹胚的 比率以BFF组最高(P<0.05),但卵裂率和4一,8一 细胞胚发育率在2组间没有差异(P>0.05)(图6). 华中农业大学学报第25卷 图3牛4.细胞胚 Fig.3Abovineern)at 4-cellstage (Leica.EFX400) 图4牛8-细胞胚 Fig.4Abovineerrt)at 8-cellstage (Leica.BFX400) 图5牛桑葚胚(左)和晚期桑葚胚(右) IO% 断 NCS雪”雪lr] ilil雪l_雪.:..冒?: 即书cb,agerate 4.X 埽 - col „ 眦 蒙删毕M0mb 洲tJ怕.Ass~sncnt|~ranct~rs 图6培养液中添加BFF和NCS对牛卵母细胞体外受精及 早期胚胎发育的影响(*表示组间差异显着.P<O.05) Fig.6Effectofsupplementsofbovinefollicularfluidand neonatecalfserumoninvitrofertilizationand earlyembryodevelopmentofthecattle 卵母细胞成熟基础液和胚胎培养基础液与上述 相同,然后在基础液中添加不同浓度的BFF液,结 果发现,在基础液中添加各种比例BFF的423枚卵 母细胞中,卵裂率为36.17,其中77.78发育至 4一,8一细胞胚,55.56发育至桑葚胚,极显着高于 基础液组. 比较添加各种浓度BFF的效果,发现以添加 15BFF效果最佳,其卵裂率,4-,8一细胞胚及桑葚 胚发育率均显着高于添加5,1OBFF组;在基础 液中添加15BFF,卵裂率,4一,8一细胞胚发育率与 Fig.5Abovineembryoatmorular(1eft)and添加2O9/6BFF差异不显着,但桑葚胚发育率显着高 latemc~lar(right)fLeica,LMC40X400)stage于2OBFF组(表2). 表2不同浓度BFF对小腔卵泡卵母细胞体外受精后早期胚胎发育的影响 Table2Effectofbovinefollidefluid(BW)contentsonearlydevelopmentof invitrofertilizedoocytesfrominteriorfolliclesofCOWS 2.3细胞因子对卵母细胞体外受精后早期胚胎发 育的影响 将体外受精后的卵母细胞转入4种不同培养体 系中进行培养,结果发现卵裂率差异不明显;进入4一 细胞期以后,4种培养体系开始出现明显差异.各种 细胞因子组桑葚胚的发育率均极显着高于基础培养 液组;MOEC组,MGC+MOEC组4一,8一细胞胚与桑 葚胚发育率均显着高于MGC组;MOEC+MGC组桑 葚胚发育率优于MOEC组,但未达到显着水平 (表3). 3讨论 3.1激素对卵母细胞体外成熟受精后早期胚胎发 育的影响 在卵母细胞]VF过程中,激素发挥着重要的作 用.在COCs的体外培养过程中,成熟液添加 FSH,IH,E2被普遍采用,但对卵巢皮质内直径小 于2ITlm卵泡卵母细胞的研究报道较少.本试验在 直径小于2mm卵泡内卵母细胞成熟过程中添加激 素,能显着的提高受精后胚胎的发育能力,这与王 第2期龙翔等:黄牛小腔卵泡卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的影响因素157 表3细胞因子对卵母细胞体外受精及其早期胚胎发育的影响 Table3Effectofcytokineoninvitrofertilizationofoocytesfrominteriorfolliclesandearlyemb~odevelo pmentinvitroofcows 1)基础液为M199液+10~50tLmol/l牛磺酸+10~NCS Basicmediumcontains10%neonatecalfserum(NCS)and10%5O/imol/loftaurineinTCM199mediu m.MGC=micro-dropwith monolayergranularcells,MOEC=Micro-dropwithmonolayeroviductepithelia】cells 锋【9报道的基本一致.但有研究者认为1H在卵母 细胞培育过程中并未发挥作用.Izadyar{等认为 在不含血清的成熟培养液中,只有FSH能影响卵母 细胞的成熟,而1H没有作用;Bevers【1lJ等认为小 于8mm的牛卵泡中,颗粒细胞上只有FSH受体 mRNA,而没有1H受体tuRNA.HCG具有与 FSH/IH相似的效果,是小鼠,猪卵母细胞体外成 熟中通常添加的激素,而在牛卵母细胞体外成熟中 并不常用[1.本试验中以HCG取代1H与添加 1H作试验比较,结果表明其效果好于添加1H. 3.2BFF对卵母细胞体外成熟受精后早期胚胎发 育的影响 血清可以为卵子提供营养,防止透明带硬化,血 清中包含的各类激素以及一些已知或未知的因子对 卵母细胞成熟和受精后早期胚胎发育具有促进作 用,在卵母细胞体外成熟与胚胎培养中被普遍使用. 但卵母细胞体内的生长是在卵泡液中,BFF为卵母 细胞成熟的介质,含有大量来自血清的生长因子和 颗粒细胞及卵泡细胞的分泌因子,BFF中适量的 VEGF,TGF-13,II,6及孕酮等可能有助于卵母细胞 的成熟.Fukui等认为体内卵母细胞的成熟与卵 泡液中所含雌激素的量和代谢物质有关【】.周颂 成等认为在成熟卵泡液中含有多种有效物质,对于 完善卵母细胞的成熟不仅具有单一的作用,还起相 互协同的促进作用【】引.本试验过程中,为使卵母细 胞尽量接近体内生长环境,以等量的BFF取代 NCS,卵裂数,4一,8一细胞胚发育率差异不显着,但 添加BFF的桑葚胚发育率高于NCS,说明在卵母细 胞体外成熟中用BFF取代NCS是可行的.为探讨 BFF在卵母细胞培养液与胚胎培养液中添加量,本 试验设置了4种添加浓度,发现以15为宜,与徐 照学等的结论略有出入L8].当BFF浓度为2O9/6时, 虽然卵裂数,胚胎发育率与l5浓度在统计学上差 异不显着,但桑葚胚发育却有降低的趋势. 3.3细胞因子对卵母细胞体外成熟受精后早期胚 胎发育的影响 哺乳动物早期胚胎在体外培养过程中具有发育 阻滞的现象,这是体外胚胎培养的主要困难;为了克 服阻滞现象,目前主要采用2种方法,一是利用临时 中间受体,二是与体细胞共培养.体细胞作为饲养 层是克服发育阻滞常用的手段,可以改善胚胎体外 培养的条件,模拟体内的自然环境,促进早期胚胎的 体外发育,其作用机理虽未十分明朗,但推测与以下 因素有关l7引:?分泌营养因子;?去除培养液中抑 制成分;?调节pH,提供胚胎代谢基质.从本次试 验可以看出,体细胞对帮助早期胚胎通过阻滞期具 有明显的效果,单一的输卵管上皮细胞作为饲养层, 效果优于单一的颗粒细胞.从已有的研究报道中发 现,以单一的输卵管上皮细胞,颗粒细胞等作为饲养 层为常见[mJ.从本试验还可看出,以颗粒细胞结 合输卵管上皮细胞的连续培养体系效果最佳,要好 于单一的体细胞培养体系. 4结论 本试验表明,在直径小于2mm卵泡内卵母细 胞体外成熟过程中添加一定量的激素,对体外受精 后早期胚胎的发育具有明显的促进作用,添加HCG 的效果优于IH;在培养液中添加BFF,对卵母细胞 体外受精胚胎的发育具有显着效果;以等量的BFF 取代NCS具有同等效果,以添加15为宜;体细胞 对6一,8一细胞胚通过阻滞期具有明显的作用,桑葚 胚率显着提高,以颗粒细胞结合输卵管上皮细胞的 连续培养体系效果最为明显. 参考文献 [1]MERTONJS,DEROOSAPW,MUIIAARTE,eta1.Fac- 158华中农业大学学报第25卷 torsaffectingoocytequalityincommercialapplicationofembryo technologiesinthecattlebreedingindustryEJ].Theriogenolo— gy.2003,59:65卜674. E2]刘瑞华,李明,焦丽红,等.家畜类腔前卵泡的体外分离方法和培 养体系研究进展[J].农业生物技术学报,2003,II(3):313—3l7. [3]高建明,吴学清,王占贺,等.牛腔前卵泡的体外培养[J].中国兽 医学报,2002,7(4):341,343. [43靳双星,李跃民,张桂枝.哺乳动物腔前卵泡分离和培养的研究 进展[J].草食家畜,2004,3(1):19—23. [5]周虚,ROBERTWEBBR.牛腔前卵泡在体外无血清培养中发 育为有腔卵泡[J].中国兽医学报,2002,9(5):518—519. [6]杨利国主编.动物繁殖学[M].北京:中国农业出版社,2003: l35—142. [7]叶荣,陈学进,杨利国.哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的产生 与克服[J].黑龙江畜牧兽医,2004,(1):62—64. [8]徐照学,钱菊汾,兰亚莉,等.BFF,rbGH对牛卵泡卵母细胞体 外受精后发育的影响[J].中国兽医学报,1996,6(16):621-627. [93王锋.牛卵巢内卵母细胞体外成熟与受精的研究[J].南京农业 大学学报,2003,26(4):69—71. r10]IZADYARF,ZEINSTRAE,COIENBRABDERB,eta1.In vitromaturationofbovineoocytesinthepresenceofbovineac— tivinAdosenotaffectembryonicdevelopment[J].AnimReprod Scl.1996.(45):37—45. rl1]BEVERSMM,DIE1EMANSJ,VANDENHURKR,eta1. Regulationandmodulationofoocytematurationinthebovine [J].Fheriogenology,1997,47:13—22. [123REYESMD,LAPIERREI,SAENZI,eta1.Effectofthe lengthofthehormonalsupplementationoninvitromaturation ofporcineoocytesEJ].Fheriogenology,2001,(55):468. [13]朱珠,叶绍辉.牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术[J].动物 科学与动物医学,2004,2(21):32—33. r14]FUKUIF,FUKUSHIMSY,TERAWAKIY,eta1.Effectof gonadotropinssteroidsandculturemediaonbovineoocytematu— rationinvitro[J].Therigenology,1982,(18):161—175. [15]周颂成,细井美彦,内海恭三,等.成熟培养基中添加卵泡液 对牛体外受精卵发育的影响[J].畜牧兽医学报,1993,24(6): 512—5l7. r16]ANr)OH,K0BAYASHIM,T0DAS,eta1.Establishment ofaciliatedepithelialcelllinefromhumanfallopiantube[J]. HumanReprod,2000,15(7):1597. [17]叶新红.输卵管上皮细胞共培养技术对受精卵体外发育的影响 及临床应用价值[J].生殖与避孕,2001,(6):183—185. [18]马云,李芬,张琪,等.影响牛卵母细胞体外成熟的因素[J]. 黄牛杂志,2000,(2):48-51. FactorsInfluencinginvitroMaturationandFertilizationof BovineOocytesfromInteriorFollicles I.ONGXiang?YURong?GENGI.i—ying?ZHOUMu-qing.?XIONGJia-junYANGI.i—guo,? (“AnimalReproductionInstitute,NanjingAgriculturalUniversity,Naing210095,China; CollegeofAnimalScienceandTechnology,HuazhongAgriculturalUniversity,Wutmn430070,China; WuhanResearchCenterofAnimalEmbryoTransplantingTechnology,Wuhan430345,China) AbstractFactorsinfluencinginvitromaturation,fertilizationandembryo?sfurtherdevelopment ofbovineoocytesderivedfrominteriorovary(IO)follicleswasstudied.Theadditionoffolliclestimula- tinghormone(FSH)(10IU/mI),HCG(20IU/mI)(humanchorionicgonadotropin)and17E2(1ug/ mI)estradiolinmaturationmediumhadasignificantinfluenceontheabilityoffertilizationofoocytes andembryo?sdevelopmentofIO-oocytes(P<O.01).Thesimilareffectwasobservedinthegroupof BFF(bovinefolliclefluid)insteadofNCS(neonatecaltsserum).ThebestdoseofBFFaddedwas 15percent.Thecultivationwithmonolayergranularcells(MGC)andmonolayeroviductepithelialcells (MOEC)sinmaturationmediumincreasedthedevelopmentalrateof4一to,8一eellembryoss(P< 0.05)andmorulae(P<O.01).Therefore,MGC+MOECisthebestcultivatedsystem. Keywordsoocyte;invitrofertilization;embryo (11-任编辑:边书京)
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