蛋白质含量的测定

蛋白质含量的测定 实验四 蛋白质含量的测定 ——考马斯亮蓝法(Brodford法) 原理 染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后引起染料最大吸收波长的改变，从465nm变为595nm，光吸收增加，蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了测定蛋白质的灵敏度(1ug) 实验步骤 1. 求曲线方程:按下表配置，操作。 管号 BSA HO 考马斯亮蓝 Pr.含量 操 作 2 (100μg,mL) (mL) G-250(mL) 1 0 1.0 5.0 0 室 2 0.1 0.9 5.0 10 温 3 0.2 0.8 5.0 20 放 4 0.4 0.6 5.0 40 置 5 0.8 0.2 5.0 80 五 6 1.0 0 5.0 100 min 2. 样品pr.含量的测定 吸取小白菜提取液0.5mL，加入蒸馏水0.5mL(三次重复);吸取血清(稀释800倍)1.0mL (三次重复)，向以上各管加入考马斯亮蓝G-250 5.0mL，室温放置5分钟，测A的值595 (一小时内完成)。 管 号 小 白 菜 管 号 血 清 T 或 A T 或 A 1 1 2 2 3 3 ? 小白菜用mg,g，血清用mg,mL。 要求r?0.99 1