【word】 温和灸对中老年部分雄激素缺乏综合征大鼠模型影响的实验研究
温和灸对中老年部分雄激素缺乏综合征大
鼠模型影响的实验研究
针刺研究2007年8月第32卷第4期?229?
温和灸对中老年部分雄激素
缺乏综合征大鼠模型影响的实验研究
白如鑫指导:李沛
(福建中医学院,福州350003)
【摘要】目的:观察温和灸对于中老年部分雄激素缺乏综合症(PADAM)模型大鼠生殖内分泌的影响.
方法:根据测定大鼠血清的总睾酮(TT)和血清游离睾酮(FT)的水平,选择符合标准PADAM的中老年SD
大鼠模型30例,按照随机分组的原则分为3组:艾灸组(灸”肾俞”“命门”“关元”),对照组I(丙酸睾九素
组),对照组11(模型组),并测定各组治疗后血清中TT和FT的水平,观察各组大鼠一般情况的变化及通过
悬尾实验和力竭游泳实验及取得其相关脏器指数等评价大鼠的自身状况,进行统计分析.结果:两治疗组经
治疗后血清中TT,FT的含量较治疗前均显着提高(P<0.01),两组之间无显着性差异(P>0.05),而模型
组FT显着下降(P<0.05).两治疗组经治疗后悬尾实验不动时间均
显着缩短(P<0.05),力竭游泳实验时
间与模型组比较显着延长(P<0.01).结论:温和灸法可阻止PADAM
大鼠血TT,FT的下降,减轻腹部脂
肪堆积,调节免疫功能,改善抑郁状态和肌张力,其作用与丙酸睾丸素
相当.
【关键词】温和灸PADAM丙酸睾丸素血清总睾酮血清游离睾酮
【中图分类号】R245.81【文献标志码】A【文章编号】
1000-0607(2007)04—0229-05
InfluenceOfMildMoxibustiononAndrogenicHormoneinMaleRatswithPartialAndrogenDe-
ficiency
BAIRu—xin,LIPei(FujianCollegeofChineseMedicine,Fuzhou350003,China)
[ABSTRACT]Objective:Toobservetheeffectofmildmoxibustiononthereproductiveendocrineinratswithpartialandro.
gendeficiency(PAD).Methods:ThirtymaleSDrats(aged12months)wererandomizedintocontrol,androlin(testosterone
propionate)andmoxibustion[„„Shenshu”(BL23),”Mingmen”(GV4)and”Guanyuan”(CV4)]groups.PADwasdeterminedby
comparingtheseagingrats(n50)withyoungrats(n30)inserumtotaltestosterone(TT)andfreetestosterone(FT)contents
whichweredetectedwithradioimmunoassay.Attheendofexperiments,thera
ts?spleen,testis,thymus,andperirenalfatweight
weredetectedrespectivelyforcalculatingvisceralindex(eachvisceraweight/bodyweight).Therats?tailsuspensiontestswere
conductedforcalculatingtheanimalimmobilitydurationin6min,andexhaustionswimmingtestscarriedoutforanalyzingthedura-
tionofexhaustionswimming(fromplacingthemintoawaterpooltothetimewhentheanimalsunkintowaterfor6s)Results:
1)Afterthetreatment,serumTTandFTcontentsinmoxibustionandandrolingroupsincreasedsignificantlycomparedwithpre-
therapyineachgroup(P<O.01)andcomparedwithcontrolgroup(P<0.05,0.01).2)Resultsofrats?taiIsuspensiontests
displayedthatafterthetherapy,thedurationofimmobilityinmoxibustionandandrolingroupsdecreasedmarkedlyincomparison
withpre-treatmentofeachgroup(P<0.05)andwithcontrolgroup(androlingroup,P<0.05).3)Comparedwithcontrolgroup,
thedurationofexhaustionswimmingofmoxibustionandandrolingroupsincreasedconsiderably(P<O.01).Nosignificantdiffer.
enceswerefoundbetweenmoxibustionandandrolingroupsinserum1_randFTlevels.immobilitydurationandthedurationofex.
haustionswimming(P>0.05).4)Comparedwithcontrolgroup,theindexesofthymusandtestisraisedremarkably,andthatof
perirenalfatloweredevidently(P<0.05,0.01),whilenosignificantdiffere
ncewasfoundbetweenmoxibustionandandrolin
groupsinindexesofthymus,testisandperirenalfat(P>0.05).Thereexistedsignificantcorrelationbetweenvisceralindexfthy.
mus,testisandperirenalfat)andserum1_randFTlevelsrespectively(P<0.01),andbetweenthedurationofimmobilityand
exhaustionswimmingandserum1_randFTlevelsseparately(P<0.01)Conclusion:Mildmoxibustionmaypreventblood1_r
andFTlevelsfromdecline,reducefataccumulationintheabdomen,regulateimmunefunction,improvethedepressionstateand
myodynamiaintheagingrats,whichiscomparabletotheeffectsoftestosteronepropionate.
[KEYWORDS]Partialandrogendeficiency;Mildmoxibustion;Androlin;SerumtotaltestosteroReandfreetestosterone
?23O?AcupunctureResearch.August2007,Vo1.32,No.4
中老年部分雄激素缺乏综合征(PADAM)发生
在男性由中年期过渡到老年期的一个特定的年龄阶
段,出现一系列相应的临床症状和体征,包括不同程
度的性欲低下,勃起功能障碍,肌张力降低,骨密度
降低,记忆力和认知功能降低,抑郁,睡眠障碍,疲乏
等,并同时伴有血清睾酮水平低下.现代医学对本
病的研究历史很短,对于本病的动物实验研究及目
前公认的睾酮替代疗法的安全性问题仍然是热点和
难点问题.研究表明:针灸对于生殖神经内分泌系
统具有肯定的调节作用,治疗本病也取得了很好的
效果.但温和灸法的应用还未得到广泛的重视,为
此,我们建立大鼠的PADAM模型,观察温和灸法
对于实验大鼠的作用效果,为后续研究做铺垫.
l材料与方法
1.1实验动物
清洁级SD雄性大鼠8O只,其中:12月龄,同批
的,体重在400700g的成年大鼠5O只作为造模
组,1O周龄(雄性大鼠成熟期一般在6—8周龄),体
重在200~300g的健康大鼠3o只作为比较组.动
物由福建中医学院实验动物中心提供,购自湖南农
业大学动物科技学院实验动物养殖厂,许可证号:
scxk(湘)2003—0003.所有动物在本实验室相同条
件下正常饲养1周.
1.2主要试剂及检测设备
总睾酮(TT)试剂盒批号:060425,由北京科美
东雅生物技术有限公司提供;游离睾酮(FT)试剂盒
批号:060519,由美国DSL公司提供.离心机
(DDL一5,上海);7-放射免疫计数器(SN一695B型,上
海);电子分析天平(AL104一IC,瑞士);彩龙牌清艾
条(25g/支,苏州);丙酸睾丸素(50mL/支,天津).
1.3模型确立
根据文献],以12月龄SD雄性大鼠作为研究
对象.
1.4分组及治疗方法
于上午8—1O点间对8O只大鼠采用双眼眶后
静脉丛采血法取血2.5mL,用放射免疫法测其血
清TT和FT的浓度(检测由广州中医药大学核医
学教研室协作完成,协作者未参与本课题的研究),
证实中老年SD大鼠和中老年人相似,都存在着血
清TT和FT水平的下降.并且统计青年SD大鼠
血清TT和FT的99可信区间作为标准值,凡是
中老年SD大鼠血清TT和FT的水平均显着低于
该标准值的可纳为PADAM模型.从5O只中老年
大鼠中选出30只作为模型组,随机分为3组,即艾
灸组(10只),丙酸睾丸素组(10只),模型组(10
只).将各组大鼠分别编号标记,分笼饲养.各组于
开始治疗的前1d上午8—1O点间双眼眶后静脉丛
采血2.5mL,分别测血清TT,FT.治疗时间均为
上午的8一l1点之间(性激素分泌具有节律性,以减
少偏差),实验室室温为2O?,湿度63.
观察组(艾灸组):隔日治疗1次,2个月为1疗
程.穴位取”关元”和”命门”,双侧”肾俞”共4穴.
将大鼠固定在特制的大鼠固定器上,用温和灸法,改
制艾条(长约15cm,直径约1.5cm)距离皮肤
0.5,1.0cm交替灸”肾俞”“命门”“关元”(即每次
3穴),每穴10rain.3个疗程结束后的次日上午
8—1O点间用腹主动脉采血法采血4mL.
对照组I(丙酸睾丸素组):于大鼠腹部皮下注
射丙酸睾丸素(天津药业集团有限公司生产),用量
标准为7mg/kg,每3d注射1次,注射部位左右交
替.2个月为1疗程,连续给药3个疗程,治疗结束
后性激素的测定同观察组.
对照组1I(模型组):正常饲养观察健康状况,与
对照组I同期腹部皮下注射生理盐水.3个疗程结
束后性激素的测定同观察组.
1.5样品的处理与检测
血液采集后分别置于玻璃试管中,立即离心
(3000r/min,15rain),分离血清,分装试管,
一
2O?低温冰箱保存备测.TT,FT采用放射免
疫分析法检测,严格按试剂盒说明书进行操作.
1.6一般情况观察
记录动物的一般状况,包括体重,神情,体态,毛
色光泽度,活动能力及反应情况,饲料的残余量.
1.7相关实验观察
大鼠悬尾实验:本实验于模型选定后第2天和
疗程结束后当天进行.将大鼠尾端2cm的部位固
定在一水平木板上(木板离地1m左右),使动物呈
倒挂状.悬挂两侧用板隔开动物视线,动物为克服
不正常的体位而挣扎活动,但活动一定时间后,出现
间断性”不动”,显示”失望”状态.计算6rain内的
不动时间,并同时观察大鼠挣扎幅度及抑郁状态.
此实验能一定程度地反映动物的肌力及抑郁程度.
大鼠力竭游泳实验:本实验在疗程结束后当天
进行.游泳池的规格为85cm×58cm×80cm,游
泳时水深为70cm,水温(28?1).C.将事先标记
针刺研究2007年8月第32卷第4期?231?
好的大鼠分别置入游泳池,记录大鼠从入水到游泳
至力竭(头部沉入水中6S不能浮出水面为力竭标
准)的时间.常温下游泳至力竭的时间是反映动物
体力及衡量动物是否疲劳的经典指标.
大鼠脏器的取材与脏器指数的测定:大鼠取血
处死后,立即剖腹取脾脏,睾丸和胸腺,除尽脂肪等
附属组织,同时取肾周脂肪,在相同条件下称湿重,
换算成每100g体重克数.
1.8统计处理
采用SPSS12.0统计软件进行数据分析.检
测数据以均数?标准差(--4-_S)表示,3组治疗前后
自身比较采用配对t检验,3组间均数差异进行单
因素方差检验,在样本整体非正态分布或总体方差
不齐时采用秩和分析,相关分析采用Bivariate
检验.
2结果
2.1各组大鼠血清性激素水平的比较
表1显示:老年大鼠与青年大鼠相比存在着血
清TT和FT的显着下降(P<0.01).青年大鼠血
清TT和FT的99可信区间分别为:9.3854,
l1.9540nmol/L.17.5843,21.5323pmol/L.
由表2可知:3组治疗前TT,FT水平经单因
素方差分析,P>O.05,无显着性差异,具有可比性;
经配对样本t检验,两治疗组治疗后TT,FT均较
治疗前升高(P<0.01,0.05),而模型组FT水平有
所降低(P<O.05);3组治疗后TT,FT水平经秩和
分析,两治疗组与模型组之间均存在显着性差异
(P<0.01,0.05),两治疗组之间无显着性差异
(P>0.05)
表1青年与老年SD大鼠血清TT
和FT水平的比较(i?S)
Table1Comparisonbetweentwogroupsinserum
tota1testosterone(TT)andfreetestosterone(FT)
contents(士S)
**P<0.01与青年组比较(VSyoungratgroup)
表23组大鼠治疗前后TT,FT水平比较(?S)
Table2Comparisonamong3groupsinserumtotaltestosterone(TT)andfreet
estosterone(FT)
levelsbeforeandafterthetherapy(?S)
*P<O.05,**P<O.O1与本组治疗前比较
(VSpre-therapyinthesameonegroup);
AP<O.05,AAP<0.01与模型组比较(vsmodelgroup).
2.2各组大鼠行为学实验结果
表33组大鼠治疗前后行为学实验结果比较(?S)
Table3Comparisonamong3groupsinthedurationofimmobilitydetectedbyt
ailsuspensiontestsbefore
andafterthetherapy,andthedurationofswimmingexhaustion(?s)
*P<O.05与本组治疗前比较
(vspre-therapyinthesameonegroup);A/NP<0.01与模型组比较
(v5modelgroup)
?
232?AcupunctureResearch.August2007,Vo1.32,No.4
由表3可知:3组大鼠治疗前尾悬挂时间无显
着性差异(P>0.05),具有可比性;艾灸组和丙睾组
治疗前后比较,P<O.05,有非常显着性差异,模型
组治疗前后比较,P>0.05,无显着性差异.提示艾
灸组与丙睾组均能减轻大鼠抑郁情况和改善肌力.
治疗后丙睾组尾悬挂时间和力竭时间与模型组比较
均有显着性差(P<0.01),艾灸组仅力竭时间与模
型组之间存在显着差异(P<O.O1),其余各组间比
较均无统计学差异(P>0.05).
2.3各组大鼠脏器指数的测定结果
表4g组大鼠脏器指数比较(?s,g/100g)
Table4Comparisonofthevisceralindexamongthreegroups(--4-s,g/100g)
?P<0.05,??P<0.01与模型组比较(VSmodelgroup)
由表4可见:艾灸组和丙睾组胸腺,睾丸,肾周
脂肪的脏器指数与模型组比较均有显着性差异
(P<0.05,0.01),3组间脾脏指数比较及艾灸组与
丙睾组各脏器指数比较均无显着性差异.
2.4各检测指标间相关性分析
由表5可知:脾脏脏器指数与血清TT,FT间
P>0.05,无相关性;胸腺脏器指数,睾丸脏器指数,
肾周脂肪脏器指数与血清TT,FT间P<0.01,有
非常显着的相关性.
表5脏器指数与血清TT和FT水平相关性分析
Table5Correlationbetweenvisceralorganindex
andserumTTandFTlevels
表6悬尾和力竭游泳时间与血清TT和FT水平相关性分析
Table6Correlationbetweenthedurationoftailsuspensiontest,exhaustedswi
mmingandserumTTandFTlevels
由表6可知:大鼠悬尾实验时间,大鼠力竭游泳
时间与血清TT,FT间P<0.01,有非常显着的相
关性.
3讨论
3.1模型建立的可行性及温和灸法和激素补充疗
法对其的影响
PADAM的发生在于年龄老化所致的下丘脑一
垂体一性腺轴的调节功能障碍和睾丸功能的衰退引
起睾酮水平降低,这一疾病具有很强的年龄和性别
特异性,睾酮水平下降是其主要的病理变化之一.
那么符合以上两方面特征者,我们初步认为其是符
合PADAM的实验动物模型;而血清TT水平不完
全能够反映生物活性睾酮的水平,所以我们同时增
加了对FT水平的检测.女性更年期综合征较为成
熟的大鼠模型一般采用去势和自然造模法],而
PADAM在激素水平的变化机制上与女性更年期有
很大的不同,其激素水平的下降是一个缓慢的过程,
所以不宜采用去势的方法.我们采用孙祥宙等在广
东省科委基金资助项目中采用的自然造模法,力图
很好地模拟PADAM的自然病理变化过程,筛选出
符合条件的大鼠作为PADAM模型.
在实验中我们发现:艾灸组和丙酸睾丸素组在
治疗后TT和FT水平均有显着升高,而模型组则
针刺研究2007年8月第32卷第4期?233?
有下降.表明大鼠在衰老过程中,血清睾酮水平处
于逐渐下降中,而无论是激素的补充治疗还是温和
灸法均能有效地改变这种下降的趋势.
睾丸的重量可以在一定程度上反映睾丸的结构
和功能的变化,从实验结果中我们发现:艾灸组和丙
酸睾丸素组睾丸脏器指数无显着差异且均明显高于
模型组,并且与激素水平显着相关,提示大鼠睾丸组
织对激素水平的变化有反映性.肾周脂肪重量是反
映腹部脂肪堆积情况的指标之一,艾灸组和丙酸睾
丸素组肾周脂肪脏器指数无显着差异且均明显低于
模型组,并且与激素水平显着相关,提示艾灸组和丙
酸睾丸素组大鼠腹部脂肪组织堆积较模型组有明显
改善,对激素水平的变化有反映性.胸腺和脾脏的
重量则部分地反映了大鼠免疫的情况,艾灸组和丙
酸睾丸素组胸腺脏器指数无显着差异且均明显高于
模型组,并且与激素水平显着相关,而脾脏脏器指数
3组无显着差异,且与激素水平无明显相关,提示艾
灸和丙酸睾丸素治疗对于大鼠的免疫功能有影响,
但具体调控机制有待于今后进一步研究.
悬尾实验和力竭游泳实验的结果表明:艾灸组
和丙酸睾丸素组大鼠抑郁和肌力较模型组有明显改
善,两组均可改善大鼠的体能,对激素水平的变化有
反映性.
综上,提示本研究所建立的大鼠模型可以作为
PADAM动物模型
3.2温和灸法作用机制的探讨
3.2.1改善睾丸间质细胞的功能
睾丸间质细胞合成睾酮的能力在青春期后随着
年龄的增长而下降,从胆固醇转运到催化睾酮合成
的每一个步骤中的睾丸间质细胞内蛋白酶的活性均
随着年龄的增长而减弱,这可能与细胞中的活性氧
增加引起基因损伤,或造成线粒体,平滑内质网损伤
而引起间质细胞功能减退有关_3].此外,睾酮合成
的底物(胆固醇)减少也可以使睾酮产物的生成减
少.睾丸间质细胞数量减少的原因包括细胞凋亡作
用,这可能是睾酮合成减少的一个重要原因_4].
吴氏等[6观察艾灸对老年小鼠的曲细精管直径的影
响,发现艾灸后曲细精管生发上皮含有的原始生殖
细胞和支持细胞功能良好,维持了生精能力,显示了
睾丸的功能状况较好,表明间质细胞数目减少得到
控制,维持了一定分泌雄激素的能力.本实验结果
表明:艾灸组和丙酸睾丸素组可使大鼠的血清睾酮
水平显着提高,并且睾丸的重量也显着大于模型组,
提示艾灸可以直接作用于大鼠睾丸组织,改善老年
大鼠睾丸间质细胞和支持细胞的功能,提高睾丸分
泌雄激素的能力,从而改善PADAM大鼠的症状.
3.2.2改善下丘脑和垂体的调节功能
睾酮的合成与分泌受到下丘脑和垂体的严格调
控,下丘脑和垂体的结构或功能的改变均可导致卵
泡刺激素(FSH)和/或黄体生成素(LH)分泌不足,
进而影响到睾酮的合成和分泌.此外,LH脉冲释
放的频度和幅度随增龄逐渐减小,也导致睾酮分泌
的脉冲频次和幅度减小.神经肽Y(NPY)是脑部
最丰富的肽类之一,在下丘脑含量最高,合成NPY
的细胞定位于弓状核(ARC).对大鼠NPY的研究
表明:ARC的NPY基因表达随着衰老逐渐降低,并
且独立于睾酮的负反馈,提示老年人NPY合成能
力的降低可能促进老年男性的性腺功能减退.近年
来的研究发现:老年大鼠ARC突触发生明显的定
性定量变化,说明老年大鼠ARC已发生衰老.老
年大鼠ARC突触的衰老变化与该核功能降低必然
有不可分割的内在联系,提示ARC突触的衰老变
化导致下丘脑ARC对垂体前叶内分泌调节功能的
失调.
黄氏等人【8的研究表明:电针或艾灸老年SD
大鼠的”肾俞”穴能提高其血清LH,FSH水平,增
加垂体生长激素含量,从而认为针灸抗衰老的作用
与改善垂体激素分泌水平有关.针灸对于下丘脑
NPY功能的调整作用正逐渐被认识].
3.2.3调节免疫功能
免疫与衰老的关系已经被学者普遍地认同,
PADAM与神经一内分泌一免疫网络的关系也正在深
入研究中.居氏l_1对200例老年男性用隔药饼灸
治疗观察,结果表明艾灸后NK细胞活性显着上升,
T细胞总数提高.王氏等_1用艾条灸中老年人的
神阙穴,发现艾条灸可升高老年人血清T细胞亚群
的CD,CD,降低CD;,增大CD/CD的比值,
并能调整血清IgG,IgA,调节体液免疫.本实验的
研究结果也表明:艾灸可以提高大鼠胸腺组织的重
量,对大鼠的免疫功能有调节作用,这种调节作用也
可能是改善PADAM大鼠症状的原因之一.
从本实验的结果看,温和灸法与睾酮补充疗法
对于PADAM大鼠的作用效果相当.
(下转第236页)
?236?AcupunctureResearch.August2007,go1.32,No.4
3讨论
氨基酸类递质是重要的神经递质之一,广泛分
布在中枢神经系统内.脑梗死的再灌流,自由基的
产生及腺苷的升高等继发性损伤也刺激Glu,Asp
水平的升高].已有大量离体和活体动物实验证
实:脑缺血后神经细胞去极化,神经细胞和胶质细胞
摄取EAA功能下降或受损,使细胞外EAA含量增
高.临床实践证明:针刺对脑缺血有肯定的疗效;并
且实验研究发现:电针对脑缺血大鼠纹状体细胞外
EAA水平有影响l8],能有效地降低脑组织中Asp
的含量,阻止神经元继发性坏死].
本实验从缺血再灌注损伤的主要病理过程入
手,建立在针刺对脑缺血再灌注损伤保护作用的有
效性基础上,在大鼠脑缺血再灌注前给予1次不同
时程的电针治疗,研究1次不同时程电针诱导大鼠
脑缺血再灌注损伤的即时性,预置性保护作用的差
异.研究发现:缺血再灌注后EAA升高,经电针治
疗后EAA降低.电针10min就可以对脑缺血再
灌注所致的EAA异常有改善作用,尤其是在降低
Glu的含量上与模型组比较效果明显(P<0.05).
在降低Asp的含量上电针60min这个时程表现出
明显低于模型组(P<0.05),并且电针30min和
60min两时程组相比,Glu,Asp水平的变化均没有
显着性差异(P>0.05).
从针刺的效果来看,电针10min组与假手术组
有显着性差异,而30min和60min组与假手术组
相比却无显着性差异,说明针刺的诱导保护作用在
电针30min时才能达到较好的效果.在这段时程
当中,针刺改善了脑循环,从而为脑提供充足用氧,
增强胞膜稳定性,使EAA释放减少,并保障神经元
EAA再摄取能力;随着电针时间延长到60min,针
刺效果进一步增加,尤其是Asp含量的变化较为突
出.研究结果发现:两种EAA降低程度并不同步,
我们推测首先与EAA的合成有关,Asp的合成由
Glu和草酰乙酸在转氨酶的作用下生成,所以针刺
引起的Asp水平降低慢于Glu;另外考虑EAA的
摄取途径有类同之处,主要靠神经末梢和胶质细胞
摄取,但并不完全相同,可能与针刺激活了不同
EAA的摄取系统有关.
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(上接第233页)
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