血塞通对COl4高脂低蛋白诱导大鼠肝脂肪变性脂质过氧化的影响

血塞通对COl4高脂低蛋白诱导大鼠肝脂肪变性脂质过氧化的影响 血塞通对COl4高脂低蛋白诱导大鼠肝脂肪 变性脂质过氧化的影响 56云南中医中药杂志2010年第3l卷第3期 血塞通对OOI高脂低蛋白诱导大鼠肝脂肪变性脂质过氧化的影响 马洁,徐师禹,殷华,王芳 (1.云南中医学院基础医学院,云南昆明650200;2.云南白药集团文山七花有限公司, 云南文山663000) 摘要:目的:观察血塞通胶囊对四氧化碳(CC1)诱导大 鼠肝脂肪变性脂质过氧化的影响.方法:复制CCl高脂低蛋 白大鼠肝脂肪变性模型,给予血塞通灌胃,进行预防性治疗3 周,并以东宝甘泰为对照,观察各组大鼠血清ALT,AsT;肝 组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.结 果:与正常组比较,模型组大鼠血清AI,AST明显升高, S0D活性明显下降,MDA含量显着升高,表现为显着的脂质 过氧化损伤和肝损伤.经药物治疗后,血塞通组血清ALT, AST明显下降,SOD活性升高,MDA含量降低,显示有抗肝 损伤和抗肝脂质过氧化作用.结论:血塞通具有一定的抗肝 损伤作用,其机制可能与抗脂质过氧化有关. 关键词:脂质过氧化;CC14;血塞通 中图分类号:R285.5文献标识码:A 文章编号:1007--2349(2010)03--0056--02 脂肪在肝脏合成,但是不能在脂肪储存,由于各种因素引 起的肝脏脂肪代谢功能发生障碍,脂类物质的动态平衡失调, 致使肝细胞内脂肪蓄积过多,肝细胞发生了脂肪样变.当肝 细胞内脂质蓄积超过湿重的5,或组织学上每单位面积有 1/3以上肝细胞脂肪变时称为脂肪肝?1].临床上分为酒精性 和非酒精性,最近几年非酒精性脂肪肝的发病率不断攀升并 且呈现年轻化,更有甚者会发展成肝纤维化,所以防治脂肪肝 的发生发展有重大的意义. 与脂肪肝发病密切相关的肥胖,高血脂症,2型糖尿病,病 毒性肝炎等均存在明显的血液流变学变化及动力学异常,如 高血脂症可以引起血液流变学异常,后者又可作为高血脂症 中的一个中问环节或促进因子[2].近年来国外学者DayCP 等I3提出胰岛素抵抗(IR)和氧应激的两次打击学说被认为是 统一发病机制学说,说明过氧脂质化影响了肝脂肪变性的发 生发展,所以在脂肪肝的治疗中,通过抗过氧脂质化来缓解肝 损伤,成为了治疗脂肪肝的一个重要环节.中医药治疗脂肪 肝,前景广阔,普遍认为中药能改善肝脂质代谢,促进脂肪肝 逆转].本次实验复制ccl高脂低蛋白大鼠肝脂肪变性模 型,以东宝甘泰为对照,观察血塞通对CCI诱导大鼠肝脂肪 变脂质过氧化的影响. 1材料 1.1实验动物SD大鼠41只,雄性,清洁级,体重(120? 10)g,购自四川I省医学科学院实验动物研究所,许可证号: SCXK(J~f)2OO4一l6,云南中医学院动物房饲养,造模及观察. 1.2药物东宝甘泰(复方蛋氨酸胆碱片),国药准字: H22O24764,通化东宝药业股份有限公司生产,购自云南一心 堂药店.血塞通,国药准字:Z53020833,购自云南白药股份有 限公司. 1.3主要试剂及仪器 1.3.1试剂CC1,分析纯,购自天津市化学试剂六厂,批 号:20040712;橄榄油(oliveoil),化学纯,上海化学试剂站分装 厂生产;丙氨酸转氨酶(alanineaminotransamine,ALT)测定试 剂盒,批号:20071206;天冬氨酸转氨酶(aspartatetransamine, AST)On,,]定试剂盒,批号:20071206;超氧化物歧化酶(S0D)测 定试剂盒,批号:20071207;丙二醛(MDA),批号:20071207;以 上试剂盒均购自南京建成生物研究所. 1.3.2仪器uV一,1600型紫外可见分光光度计,北京瑞 利分析仪器公司.立式低速冷冻离心机(上海市离心机械研 究所)编号:0308064;HZS—H超级恒温水浴振荡器,购自哈 尔滨市东联电子技术开发有限公司.编号:20020503;BD一 600LT--86I一1超低温保存箱,青岛海尔特种电冰柜有限公 司;AR2140电子分析天平,上海奥豪斯公司;轮转切片机 (RM2035),HI1220烤片机,HI1210恒温水浴,均购自德国 Leica公司. 2方法 2.1模型制备[5将实验大鼠随机分成正常组,模型组,东 宝甘泰组和血塞通组,共4组.正常组8只,其余每组11只. 除正常组外,其余组首次皮下注射(k0.5mL/100g体重,以 后每周2次皮下注射40(h一橄榄油溶液0.3mI/100g体 重,共3周.在1,2周给予高脂玉米粉饲料(79.5玉米粉+ 20猪油+0.5胆固醇),第3周予单纯玉米粉饲养,自由饮 用自来水.正常组予普通饲料饲养. 2.2标本采集大鼠3周末治疗结束后处死,留取血清,肝 组织,--80?保存. 2.3药物制备血塞通胶囊根据使用剂量说明(3次/d, 2粒/次,每粒含生药量0.05g);东宝甘泰片的制备根据使用 剂量说明(3次/d,4粒/次,每粒含生药量0.4g)换算成大鼠 的等效剂量所需生药量,然后根据等浓度把药物溶于蒸馏水 中,4?冰箱密封保存备用. 基金项目:云南省教育厅科学研究基金项目资助项目(编号:07CA0207) 作者简介:马沽(1977一),女,云南泸西县人,讲师.E-mail:mi961078@yahoo.com.cn 2010年第31卷第3期云南中医中药杂志57 2.4指标检测 2.4.1肝功能测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),血清门 冬氨酸氨基转移酶(AST)活性. 2.4.2肝组织超氧化物歧化酶(sOD)及丙二醛(MDA)含量. 2.4.3肝脏标本的HE染色观察 2.5统计分析计量资料用(y-?S)表示,实验结果用计算 机统计软件SPSS进行单因素方差分析,并用LSD程序进行 两两比较及一组与多组的比较. 3结果 3.1血塞通胶囊对cch脂肪肝模型大鼠血清AL,AST活 性的影响与正常对照组比较,模型对照组血清ALT,AST 含量显着升高,差异有统计学意义(P<O.05);与模型对照组 比较,血塞通组和东宝甘泰片组血清ALT,AST含量降低,血 塞通组血清AST,AST含量差异有统计学意义(P<O.05),东 宝甘泰片组虽有降低但无统计学意义.见表1. 表1血塞通胶囊对0014脂肪肝模型大鼠血清 ALT,AST活性的影响(is) 与正常组比较,AP<0.05;与模型组比较,P<0.05 3.2各组大鼠肝组织SOD,MDA含量变化见表2. 表2血塞通胶囊对~x314脂肪肝模型大鼠肝组织 SoD,MDA的影响(E-?) 与正常组比较,?P<0.05;与模型组比较,P<0.05 与正常对照组相比较,模型对照组肝组织MDA活性显 着升高,差异有统计学意义(P<O.05);与模型对照组相比较, 血塞通组和东宝甘泰片组MDA活性明显降低,差异有统计 学意义(P<O.05).与正常对照组相比较,模型对照组肝组织 SOD活性显着降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型对 照组相比较,血塞通组和东宝肝泰片组SOD活性明显升高, 差异有统计学意义(P<O.05). 3.3肝脏标本的HE染色观察模型组大鼠肝细胞普遍发 生脂肪变性,肝细胞变圆变大,胞浆疏松,内含大大小小的脂 肪滴,有的将细胞核挤压向胞膜,局部可见散在的点状的坏死 灶,并可见炎性细胞浸润.血塞通组与东宝甘泰组的肝脂肪 变性程度明显减轻,脂滴数量减少,肝细胞体积变小,可见散 在的点状坏死灶. 4讨论 本实验以CC1结合高脂低蛋白饮食方法诱导大鼠肝脂 肪变性,从本实验结果看该方法肝脂肪变性造模比较成功,且 造模时间短,费用低,采用了化学损伤和高脂饮食复合因素造 模,与临床脂肪肝的发病机理相接近.但是从病理HE染色 结果看,肝损伤的情况较为严重,考虑可适当降低CC1的使 用量或者采用高脂饮食单因素造膜. 血清ALT,AST和在模型组中有较大幅度的升高,而在 血塞通组中显着降低,病理切片HE染色显示模型组肝细胞 普遍发生脂肪变性,脂滴较大,且见明显肝坏死病灶,而两用 药组脂肪变性程度均较模型组轻.表明血塞通有显着抗肝损 伤的作用. 超氧化物歧化酶(SOD)是体内重要的抗氧化酶,是细胞 进行有氧代谢所必需的酶,它对机体的氧化与抗氧化平衡起 着重要的作用.SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由 基的能力.MDA的量常可反映机体内脂质过氧化的程度,间 接反应出机体组织细胞受自由基攻击的严重程度.肝脂质过 氧化增加是NAFLD的形成则涉及了5个相互关联的病理生 理环节_6]之一.本文实验中,模型组SOD含量显着下降, MDA含量明显升高,而两用药组中SOD含量明显上升, MDA含量明显降低,提示血塞通抗肝脂肪变性的作用可能与 抗脂质过氧化作用有关.血塞通胶囊能在一定程度上改善模 型大鼠肝功能,因为生物膜是生命系统中最容易发生脂质过 氧化的场所,本研究中发现其可以降低脂质过氧化终产物 MDA的量,说明其可以减轻脂质过氧化,减少MDA对肝细 胞膜的损伤,减少了膜蛋白的共价交联与聚合,保证了膜的正 常功能,因此对肝功能有一定保护作用. 参考文献: [1]范建高,曾民德.脂肪肝研究进展[J].胃肠病学和肝病学杂志, 1999,8:149,1561. E2]赵春亭.临床血液流变学[M].北京:人民卫生出版社, 1984:2391. r3]DayCP,James()Fw.Steatohepatitis--ataleoftwo"hits"EJ].Gastro, enterology,1998,114:842~845. [4]李勇.脂肪肝中医研究进展[J].山东中医杂志,2005,24(5):5. [5]何东仪,胡义扬,刘平等.健脾活血方对CCIt高脂低蛋白诱导大 鼠肝脂肪变性的影响[J].中国中国药科技,2001,8(1):13,15. [6]YounossiZM,DiehlAM,OngJP.Nonakoholicfattyliverdis—ease: anagendaforclinicresearchEJ].Hepatology,2002,35:746~752. (收稿日期:2009—11—09)