东北淫羊藿活性成分研究

东北淫羊藿活性成分研究 第12卷第4期沈阳药科大学 1995年10月总65期JournalofShenyangPba珊aceIl土c越University Vo1.12No.4P.266 Oct.1995Sum65 ‘6/, 东北淫羊藿活性成分研究 孙朋悦赵吉福文哗裴玉萍张桂芳王志学陈英杰 ——一蕾匕阳药科大掌中药蕞沈阳110015 徐颖’ 忱阳药科大学药学蕞沈阳110015 获原幸夫竹田忠蜮 日奉国名古量市立药科大学药学系 f工摘要自末北荏羊藿(imedi~koreo~numNa~ai)的地上部分,分离得到4十单体化合 物,根据理化敦据和光谱分析鉴定为-垒丝桃甙(hyperin)(1),荏羊藿甙.I(icarlsidI)(2),荏羊藿 甙一I(icarialdI)(3)和荏羊藿甙(ieariin)(4).其中,垒丝桃甙在本种植钶中首次分离得到,同时, 我们又利用’H-Hcoay和”C一’Hcosy谱,对原文献中化合钶2部分C 信号的归属进行了1搴正.另 外,药理实验结果明?荏羊藿甙(icarrln)对氢化可的橙造成的小鼠阳应有一定的拈抗作用. 嚣其 中,化合物1是从本种植物中首次分离得到.另外,对化合物2的部分C信号依据H:Hcosy 和”C一’Hcosy谱对原文献的归属顺序进行了修正. 化合物1.Molish反应阳性tHCI—Mg粉反应阳性,uV光谱为典型的黄酮类化合物吸收, 化合物1酸水解检出有半乳糖或葡萄糖,说明化合物1是黄酮甙类化合物.IR光谱示有羟基 (3400cm),羰基(1650cm),苯环(1608,1500cm)存在.在uV光谱中,样品+NaOAc 带I位移了14.4nm,说明7位有酚羟基存在}样品+NaOMe带I位移了51.4nm,强度不下 降,示有4一羟基存在;样品+NaOAc/H,BO,带1位移了17.8nm,表明B环有邻二酚羟基, 同时比较样品+Alcl,和样品+AIC[/HCI的uv光谱,带I在AICI中较在AICI./HCI中红 移2O.8nm,进一步说明B环邻二酚羟基的存在,除已确定的4一羟基,另一个应为3’-羟基.在 HNMR谱上,a12..57(1H,s)处的单峰为5位游离酚羟基质子信号;同时, 在HNMR谱的芳 香区域内,可见到5个质子引起的吸收峰,通过H一Hcosy谱可知a7.81(1H,dd)处的吸收峰 与87.48(1H,d),6.81(1H,d)两处的吸收蜂有偶合关系,其偶合常数分别是2.0Hz和8.6Hz; 86.2O(1H,d)处的峰与86.41(1H,d)处的蜂有弱的偶合关系,其偶合常数为2.0Hz,结合前 面所述,可判断a7.81,7.48和6.81ppm处的3组峰信号是由B环上的6,2和5位三个质 收藕日期t1994-09—06第一作者,3o岁.男.研究生 第4期孙朋悦等,东北淫羊藿活性成分研究 子引起的}86.20和6.41ppm处的峰信号由A环上6,8位上的二个质子引起.在”CNMR谱 上,可看到一个吡哺半乳糖或D一吡喃葡萄糖的c信号(a101.68,75.72,73.07,71.09, 67.81,60.02ppm).在HNMR谱上,a5.39(1H,d,J=7.0Hz)处的峰是由该糖端基质子引起 的,从偶合常数(J一7.oHz)值可判断该糖为p构型.通过’H一Hcosy谱,可知化学位移3.66 ppm处的宽单峰是由该糖4位质子引起,从该峰的裂分情况分析,此质子在该糖吡喃环上只 能处于平伏键位置,结合前边所述,可确证此糖为D一吡喃半乳糖.在HMBC谱上,可观察到 该糖的端基质子(a5.39ppm)与母核的3一c信号(~133—36ppm)有偶合关系,因此,可知该糖 的端基连在甙元的3位上.故推定1为5,7,3,3,4r_五羟基一黄酮-3一O一吡喃半乳糖.该化 合物结构与金丝桃甙(hyperin)--致,在本种植物中首次分离得到. 化合物2.Molish反应阳性,HCi-Mg粉反应阳性,uV谱具有黄酮类化舍物吸收特征,酸 水解,检出有鼠李糖,因此,确定为黄酮甙类化台物.HNMR和CNMR谱数据与文献报道的 淫羊藿甙一I(icarisidI).相一致,故予以确认.但对该化合物鼠李糖部分的c信号重新进行 了归属.通过H-Hcosy谱归属鼠李糖上各个质子信号为a5—27(1H,brs,R—H),4—00(1H, brs,RrH),3.48(1H,RrH),3.15(1H,t,J=9.2H;,R._H),3.06(1H,m,R5一H),0.79(3H,J =6.1Hz,RrCHa),4.99(1H,brs,Rt—OH),4.66(1H,brs,Ra—OH),4.74(1H,brs,R’一OH). 通过”c一Hcosy谱归属鼠李糖上的c信号为a101—86一R1,69.98一R2,70.22-Ra,71.03-R., 70.55一,17.36一,而文献归属顺序为3101.86一R1,70.22’R2,70.55 一R|,71.03?R.,69.98一 R5,17.36一R6. 此外,化合物淫羊藿甙一I(icarisidI)(3)和淫羊藿甙(icariin)(4)同时被分离得到 表1化台袖2,4的HNMR谱化学位移数据 洼,500MHz(DM—d.)定.J单位.TMS做内标.H为a-L.毗喃鼠李糖的基.H为毗喃葡萄糖的氢 我们选用淫羊藿甙进行了助阳活性研究.结果表明:60mg/kg的淫羊藿甙能部分拮抗氢 化可的松所致的船虚小鼠的体重减轻.同时30mg/kg和60mg/kg的剂量可部分对抗阳虚小 鼠的肾上腺萎缩.结果见表2. 1仪器材料 kofler型显微熔点测定仪(未校正),红外:lR.27红外分光光度计;紫外:UV-260紫外分 沈阳荮科大学第l2卷 光光度计I校磁;JEOLGSX400,JEOLA500I质谱:JMS—SX102. 东北淫羊藿购于辽宁省药材公司,薄层层析及柱层析用硅腔系青岛海洋化工厂生产川,鼠 由本校动物室提供. 衰2淫羊藿甙对阳直小?的作用 住I1)’.P<o1..P<0.5与对厦组相比l2)?P<0.0l,P<05与阳直 组相比 2提取分离,结构鉴定及活性研究 中药淫羊藿25.0kg用70乙醇提取,回收乙醇,浓缩液经大孔树脂吸附 水洗后,分别用 40,95的乙醇洗脱.洗脱液回收乙醇并浓缩.取部分40的乙醇洗脱物 (25Og),硅胶柱层 析,氯仿;甲醇梯度洗脱,其比例为3?1时的洗脱物经聚酰胺层析,甲醇 洗脱,得化台物1 (100rag)l取部分95乙醇洗脱物(127g),硅胶柱层析.氯仿t甲醇梯度 洗脱,其比例为20? 1时得到化台物2(100mg)和3(20g);其比例为5t1时,得到化台物4(5g). 化台物1.黄色颗粒状结晶(甲醇),mp230231?,1R(KBr)cm, 3400,1650,1608, 1500.Uv磁盘 (nn1){256.2.359.0l271.8sh,327.2,410.4(+NaOcH{)I274.0t422.0 (AICl,)l268.8,362.8,401.2(+AICl,/HCI)I270.6,32O.8sh,403.8(+NaOAc)I260.2, 376.8(+NaOAC/HIB0,).HNMR(DM90-d6)(ppm):812.57(1H,s.,5-OH),7.81(1H, dd,J=2.0,8.6H0,6一 H),7.48(1H,d,J=2.0Hz,21_H),6.81(1H,d.J=8.6Hz.51_H),6.41 (1H,d,J=2.0Hz,8-H),6I20(1H,d,J=2.0Hz,6-H),5.39(1H,d,J一 7.0Hz,1H).CN— MR(DMSO—d.)(ppm){177.50(4-C),164.06(7一C),161.11(5一 C),156I19(2-C),156.12(9一 C),148.36(4J-C),144.72(3一 C),133.36(3-C),l21.87(1-c),12098(6x-C),115.84(21_C), 115.08(51_C),103.79(10一C),98.57(6一C).93.41(8一 C);G:101.68(1-C),71.09(2一C),73.07 (3一C),67.81(4—C),75.72(5-C),60.02(6一C). 化合物2.黄色针晶(甲醇),mp202203?,U?:(nm):270.6,300.4,350.0sh; 280.8,380.2(+NaOMe)I279.6,306.0sh,342.0(+A1C1{)l280.4,304.~sh,340.4(+A1Cl3/ Ha)I280.4,372.4(+NaOAc)I271.8(+NaOAc/HjBOj).”CNMR(DMSO—d’)(ppm); 177.89(4一C),161.66(7一C),161.19(5-c),l58.77(4一 C),156.66(9-C),153.70(2一C),134.33 (3一C),131.95(13一C),130.33(2,6’-2C),122.31(1一C),122.18(12一 C),113.97271.4,325.6,374.4;261.0,417.2(+NaOMe)I268.2,355.6,433.6(+ 第4期孙朋悦等?东北溪羊藿活性成分研究269 AICII)I268.6,354.6,435.0(+AICII/HCI)}261.0,362.4,420.4(+NaOAc)I271.0,326.4, 374.8(+NaOAc/H?BOI).EIMS(m/z){368,313,353,300,165,135.”CNMR(DMSO—d) (ppm)l176.40(4-C),160.53(7一C),160.02(5一C),158.46(-C),l52.62(9一C),l46.81(2-C). 136.09(3一C),131.04(13-C),129.26(2,6’-2C),123.32(1一C),122.23(12 一C),1l4.04(3,51. 2C),1O7?94(8一C),104.37(10一 C),97.32(6-C),25.39(14-C),21.32(11-C),17.82(15.C.). 55.3l(4-OCH;)}Gl100.34(1一C),73.27(2一 C),76.46(3-(3),69.54(4-C),77.06(5一C),60.53 (6-C).HNMR谱数据见表1. 化台物4.黄色颗粒状结晶(甲醇),mp222~223?,Molish反应阳 性,HCI—Mg粉反应阳 性.IR(KBr)cm,3350,1650,1600,1500.u? (rim)l269.6,315.0,349.4sh;275.0,364.4 (+NaOMe)I279.0,305.6sh,343.6,410.8(+AICI;)I279.4,304.8,340.0,411. 8(+AIa./ HCI)}269.6,315.0,348.8(+NaOAc)I269.8,316.0,349.8(+NaOAc/H.BOI).1.CNMR (DMSO-d’)(ppm){178.19(4--C),161.31(7--C),160.41(5--C),158.98(4--C),157. 23(9 -- C),152.9l(2一C)t134.54(3一C),131.03(13一C),130.47(2,6一2C),l22.15(1一C), 122?02(12一C),1l3.98(3,5一2C),lO8.2l(8一C),105.49(10一C),98.02(6一C),25.36(14 -- C),21.31(11一C),17.45(15一C),55.41(4一OCHs)}R;101.88(1一C),69.56(2一C). 69.97(3一C),7O.60(4一C),70.21(5一C),l7.75(6一OCHI)}G:100.43(1一C),73.26(2一 c)t76?50(3--C),71.00(4--C),77.08(5一c),60.15(6一c).HNMR谱数据见表1. 取欲水解化合物(1,2,3和4)少许,加1,2滴甲醇使之溶解,再加入1,2滴浓盐酸与之 混台均匀,然后,将其吸入毛细管内,两蛸封cjI后,置于60?环境中3h水解完全,硅胶薄层板 检查,与标准糖相对照,确定糖的种类(展开剂.氯仿一甲醇5?2.5}显色剂,邻苯二甲酸苯胺). 活性研究选用雄性小鼠,将其随机分为对照组,阳虚组及阳虚给药组(高,低剂量),每组 10只,分别灌学.1888.23.672 2MizunoM,Hanlokls’Su=ukiN?F~vonolllideIFlavohelgh~cousMefrom Epimedlum8aglttatum.Phyt~hemietry. 1987.26-861 (下转第306页)