小儿热毒清冲剂质量标准研究

小儿热毒清冲剂质量标准研究 小儿热毒清冲剂质量标准研究 更新日期:2010-12-22 点击: 沈 豪 提要 采用薄层层析对小儿热毒清冲剂中主要组成药物金银花、大黄进行了定性研究，并采用薄层扫描法测定冲剂中金银花的主要成分绿原酸含量。测得绿原酸平均回收率为97%， RSD为1.02%。该法简便快速，重现性好，为小儿热毒清冲剂质量标准的制订提供了依据。 关键词 小儿热毒清冲剂; 大黄; 金银花; 绿原酸; 薄层扫描法 小儿热毒清冲剂是由金银花、大黄、黄芩、甘草四味中药加工制成的冲剂，具有清热解毒、凉散风热之功。主要用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒诸证。其中所含绿原酸为其抗菌抗炎主要成分。为提高成品质量，提高药物疗效，本文就大黄、金银花进行薄层定性，对其绿原酸成分进行定量研究。 1 仪器与试药 岛津 CS-930型双波长薄层扫描仪，DR-2型数据仪(日本);微量注射器(中国上海保西玻璃仪器厂);聚酰胺薄膜(浙江黄岩);硅胶 G 预制板(青岛海洋化工厂);绿原酸标准品、大黄酚标准品(中国药品生物制品检定所);小儿热毒清冲剂(通州市中医院制剂室);所用试剂均为分析纯。 2 实验部分 2.1 金银花的薄层鉴别,1, 2.1.1 供试品液制备:精密称取冲剂1 g，加入50 ml 乙醇，于水浴上回流1 h，冷却，过滤，回收乙醇，加入30%中性 Pb(AC)2 30 ml，待沉淀完全后，抽滤，再将沉淀悬浮于50 ml 水中，加入5% H2SO4 40 ml，充分搅拌，静置分层，过滤，反复洗涤沉淀物。滤液中加入乙酸乙酯萃取6次，经无水 Na2SO4 过滤，减压回收溶剂，置于50 ml 容量瓶中，用乙酸乙酯加至刻度，即成样品液。 2.1.2 阳性对照液制备:取金银花药材1.0 g，加乙醇回流提取30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加入2 ml 甲醇溶解，即得。 2.1.3 精密称取绿原酸标准品10 ml置容量瓶中，甲醇定容至刻度，配成1 mg/ml 标准品液。 分别吸取上述3种溶液各2 μl，点于同一块聚酰胺薄膜上，以18%的醋酸作为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外灯(365 nm)下检视。结果在供试品色谱中，在与对照品溶液、阳性对照液色谱相对应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液色谱中无相应的荧光斑点。 2.2 大黄的 TLC 鉴别,2,:取样品10 g，研碎，加甲醇50 ml 回流提取2 h，提取液回收蒸干，残渣加 1?10 盐酸水溶液40 ml，于沸水浴中加热30 min，冷却、滤过，滤液用乙醚萃取3次，10 ml/次，合并萃取液，回收蒸干，残渣用少量甲醇 溶解，作为供试品溶液。取大黄酚对照品，加甲醇制成每 ml 含0.1 mg 的溶液，作对照品溶液。 吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30,60?),甲酸乙酯,甲酸(15?5?1)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外灯(365 nm)下检视，在供试品溶液中，在与色谱中对应的位置上显相同颜色的斑点。 2.3 绿原酸的含量测定,3,: 2.3.1 标准曲线的制备:精密吸取绿原酸标准品液0.2、0.4、0.6、0.8、10 ml 于10 ml 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别配成含绿原酸浓度为20、40、60、80、100 μg/ml 的标准品液，定量毛细管分别吸取20 μl 上述标准液，点样于硅胶 G 板上，以醋酸乙酯,甲醇,水(7?3?2.5)充分饱和的上层溶液为展开剂，展开，晾干，紫外灯下于365 nm 检视，定位，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，在波长 λ S=330 nm， λ R=210 nm 处进行双波长扫描。测出吸收度峰面积。以峰面积( A)为纵坐标，标准溶液浓度( C)为横坐标，绘出吸收度峰面积-浓度相关图(见表1、图1)。结果表明本品在0.4,2.5 μg 范围内呈良好的线性关系，回归方程 A=195.36+9758.3 C，相关系数 γ=0.9997。 表1 线性关系考察 浓度 C(μg/ml) 峰面积 A 浓度 C(μg/ml) 峰面积 A 20 195241.1 40 388106.6 80 786039.6 60 582966.1 100 970100.1 图1 浓度相关图 2.3.2 供试品液的测定:供试品液的制备见 TLC 鉴别项下。精密吸取供试品液20 μl，对照品液20 μl，在同一块板上，点3个样品点和2个对照品液点，展开，定位，扫描，测定供试品吸收度积分值，按外标法计算含量，得出样品中所含绿原酸量。各批号分别测定3次，取其平均值，见表2。 表2 不同批次样品中绿原酸含量(%) 批号 绿原酸含量 平均含量 总平均含量 第1次 第2次 第3次 970301 0.144 0.119 0.106 0.123 970320 0.088 0.085 0.090 0.088 0.165 970410 0.206 0.219 0.206 0.210 970504 0.081 0.074 0.070 0.075 2.3.3 加样回收率实验:精密称取绿原酸标准品约1 mg，加入到已知含量的样品中，依照样品测定方法进行分析，结果见表3。 表3 加样回收率试验结果 序号 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) 1 1.0060 0.9710 96.5 2 1.0205 0.9804 96.6 96.0 3 1.0147 0.9678 95.4 2.3.4 精密度试验:精密称取同一批样品。按样品测定方法制备测定。重复测定5次，结果见表4。 表4 绿原酸精密度实验(%) 测定项 测定次序 平均 RSD 1 2 3 4 5 绿原酸 含 量 0.211 0.210 0.209 0.212 0.211 0.210 1.02 3 小结 -咖啡酰喹咛酸，见光易分解。绿原酸对照品溶液应贮存在棕色3.1 因绿原酸为3 瓶中，于冰箱冷藏。 3.2 样品提取液条件的选择，以乙酸乙酯萃取6次含量最高，绿原酸完全溶出为最佳条件。 作者单位:江苏省通州市药品检验所 226300 参考文献 1 俞 滢，李 墩，徐红辉，等.含漱口服液的质量标准研究.中成药，1998，(7)?11 2 刘庆武，周田华.理气静神片 TLC 的鉴别研究.中药材，1997，(1)?64 3 张英华，冯世开.薄层扫描法测定银颐口服液绿原酸含量.长春中医药大学学报，1998，(9)?47