新生儿溶血病血清学检查操作规程

遵医附院输血科 主题：血清学技术操作规范 编号：01-3    ：新生儿溶血病血清学检查操作规程 第1页  共 3 页  版本2008 修订 颁布日期：2008年8月 修订日期：2008年7月 新生儿溶血病血清学检查操作规程 原理 新生儿溶血病是由母婴血型不合引起，可见于ABO、Rh及MN等血型系统。胎儿和新生儿红细胞被来自母亲的IgG抗体包被，并在婴儿的单核-巨噬细胞系统（网状内皮系统）受到免疫性破坏，出现溶血，表现出相应的症状。病情严重程度因个体差异、抗体类型、抗体效价等不同而异。 目的 规范新生儿溶血病血清学检查操作；查找新生儿溶血病发生的原因，协助临床进行实验室诊断及治疗；保证临床用血的安全性和有效性。 职责 输血科技术人员负责新生儿溶血病血清学检查。 适用范围 母婴血型不合引起的新生儿溶血病的血标本。 支持文件 《中国输血技术操作规程》（血站部分）.天津：天津科学技术出版社1997 《输血技术学》第2版.北京：人民卫生出版社，2002 《输血科（血库）工作手册》莞市中心血站2006 或设备 1、 材料  抗-A、抗-D定型试剂、抗球蛋白试剂、ABO反定型试剂红细胞、筛选细胞、谱细胞、生理盐水、新生儿静脉血、产妇及患儿父亲血标本 2、 设备  血清雪专用离心机、电热恒温水浴箱、水浴振荡仪、显微镜、小试管、滴管、小玻棒 操作步骤 一、 血标本采集及处理 采集患儿及其父亲与母亲血标本各3-5ml，分离出血清，配制3%-5%红细胞盐水悬液。如果患儿血标本为不抗凝血，则在一小玻璃漏斗颈部置一适当大小的棉球上，一边加生理盐水，一边用玻棒挤压血块，收集漏斗下面的红细胞悬液。 二、 患儿血标本 具体操作执行《ABO和Rh血型鉴定操作规程》。ABO血型测定只做正定型。 1、 直接抗球蛋白试验 具体操作执行《抗球蛋白操作试验规程》中的直接抗球蛋白试验部分。 2、 游离抗体检测 1、 取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，每管加患儿血清2滴，再分别加入3%-5%的A、B、O、反定型试剂红细胞悬液1滴。 2、 37℃致敏1h后取出，若发生凝集，不必继续往下做。 3、 若不凝集，用盐水充分洗涤3次反应物后加入抗球蛋白血清1滴。1300g离心15s，轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。若肉眼不见凝集，以显微镜检查。按表一析结果。 3、放散实验 依据结果，采用合适的放散方法进行放散试验，具体操作执行《放散试验操作规程》，放散试验结果判断见表二 三、 患儿母亲血标本 1、 血型鉴定（执行《ABO和Rh（D）血型鉴定操作规程》） 2、 IgG抗-A（B）效价测定 具体操作执行《IgG抗-A（B）效价测定规程》 3、 抗体筛选、鉴定试验 具体操作执行《红细胞血型抗体筛选、鉴定操作规程》 四、 患儿父亲血标本 ABO和Rh（D）血型鉴定。 具体操作执行《ABO和Rh（D）血型鉴定操作规程》 五、根据表三，分析结果 表一 患儿血清中游离抗体检查结果意义 指示红细胞 意义 Ac    Bc    Oc +      -      - -      +      - +      +      - +/-    +/-      + -      -        - 游离的抗-A 游离的抗-B 游离的抗-A、抗-B或者抗-AB 游离的ABO系统以外抗体 无游离抗体 表二 患儿红细胞抗体释放试验意义 指示红细胞 意义 Ac    Bc    Oc +      -      - -      +      - +      +      - +/-    +/-      + -      -        - 放散出IgG抗-A 放散出IgG抗-B 放散出抗-AB，或同时放散出IgG抗-A或抗-B 放散出ABO血型以外的抗体 没有放散抗体 表三 新生儿溶血病检测结果判断 直抗试验        游离试验      释放试验                结论   -              -              -  不能证实为血型免疫引起的新生儿溶血   +              -              -            可疑为新生儿溶血   -              +              -            可疑为新生儿溶血              -              -                +    能证实为血型免疫引起的新生儿溶血                                  +              -              +    能证实为血型免疫引起的新生儿溶血                                  +              +              -    能证实为血型免疫引起的新生儿溶血                                -              +              +    能证实为血型免疫引起的新生儿溶血                                  +              +              +    能证实为血型免疫引起的新生儿溶血                                注意事项 1、 新生儿血标本要求比较高，要求采集血液4-5ml，分为大约相等的两份，一份不抗凝，另一份采用EDTA抗凝。 2、 如果只有不抗凝血标本，不宜在试管中用竹签挤压血块。 3、 脐血标本不宜作为检测标本，尤其对ABO新生儿溶血病容易出现无临床意义的阳性指标。 4、 一旦怀疑为新生儿溶血病时，应立即尽送检，5天后采集的血标本检出阳性率的机会很少。 5、 母亲IgG抗-A抗-B效价高低具有参考价值说法不一，刘达庄主编《免疫血液学》2002上海科学技术出版社P137 为64以上有参考意义。王培华主编《输血技术学》P233效价256以上有参考意义；512以上有明显临床症状的较多；Rh（D）溶血抗D效价大于32有临床意义。 6、 采集患儿父亲血标本的主要目的是，当新生儿血型鉴定困难时，可以根据双方的血型推断新生儿血型。