【2016年】高效液相色谱-蒸发光散射法测定驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量【药学论文】

【2016年】高效液相色谱-蒸发光散射法测定驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量【药学论文】 药学论文-高效液相色谱-蒸发光散射法测定驴胶补血颗粒 中黄芪甲苷的含量 【关键词】 高效液相色谱 摘要:目的建立驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。方法采用高效液 相色谱(HPLC)法,蒸发光散射检测器，色谱柱采用安捷伦C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)柱, 乙腈水(37?63)为流动相,流速为1.0 ml,柱温为40?, 漂移管温度 105?;载气流速为2.7 ml?min-1。结果结果表明黄芪甲苷进样量在 2.505~12.525 μg范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.999 1,平均回收率为 100.1%,RSD为0.54%(n=6)。结论该方法简便,准确，重现性好,可作为该制剂的 质量控制。 关键词:高效液相色谱蒸发光散射法; 驴胶补血颗粒; 黄芪甲苷 Determination of Astragaloside in Lvjiaobuxue Granule by HPLC-ELSD Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method for determination of astragaloside in Lvjiaobuxue Granule.MethodsWith Agilent XDB C18(4.6 mm×250 mm,5 μm) , acetonitrile-water(37?63) was used as the mobile phase, the temperature of drift tube was 105?.ResultsThe linearity was obtained from 2.505~12.525 μg(r=0.999 1).The average recovery was 100.1% with RSD=0.54%(n=6).ConclusionThe method is sensitive ,simple ,specific and accurate for determination of astragaloside in Lvjiaobuxue Granule. Key words: HPLC-ELSD; Lvjiaobuxue Granule; Astragaloside 驴胶补血颗粒由阿胶、黄芪、党参、熟地黄、白术、当归等组成，具有滋阴补血、健脾益气、调经养血之功效。主要用于久病体虚、血亏气虚、妇女血虚、经闭、经少等症。方中黄芪具有益气养血的功效，而黄芪甲苷是其中主要化学成分。本文采用高效液相色谱-蒸发光散射器法对黄芪甲苷含量进行研究。 1 仪器与试药 日本岛津LC-2010C高效液相色谱仪，class-vp ver.6.1色谱数据处理工作站;Alltech ELSD 2000ES。驴胶补血颗粒(湖南九芝堂股份有限公司);乙腈为色谱纯，水为重蒸水(新鲜制备)，其余试剂均为国产分析纯。黄芪甲苷对照品(批号0781-200109，中国药品生物制品检定所)。 2 方法与结果 2.1 色谱条件与系统适用性实验色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(安捷伦C18，4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为乙腈-水(37?63);流速1.0 ml;进样量15 μl;ELSD参数:漂移管温度105?;载气流速2.7 ml?min-1;柱温40?。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4 000。用蒸发光散射检测器检测。 2.2 溶液制备 2.2.1 对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷适量，加甲醇制成0.5 mg/ml的溶液，即得。 2.2.2 供试品溶液的制备取本品细粉约10 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40 ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4 h，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣加水10 ml，微热，使溶解，加水饱和的正丁醇振摇提取4次，40 ml/次，合并正丁醇液，用氨试液振摇提取2次，40 ml/次，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 ml使溶解，放冷，通过已处理好的D101型大孔吸附树脂(内径1.5 cm，长12 cm)，以水50 ml冲洗，弃去水洗液，再用40%的乙醇30 ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%的乙醇80 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 2.3 测定法精密吸取对照品溶液10，20 μl，供试品溶液15 μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。 2.4 方法学考察 2.4.1 流动相的选择分别以甲醇-水(40?60)、乙腈水 四氢呋喃(33?67?4)、乙腈水(32?68)及乙腈水(37?63)为流动相。结果表明，以乙腈水(37?63)为流动相，色谱峰分离效果最佳，无干扰，且保留时间短，故选用该流动相。 2.4.2 柱效的考察按正文方法测定，得到芍药苷对照品以及供试品的色谱图(见图1~2)。暂定理论塔板数黄芪甲苷峰计算应不低于4 000。 图1 对照品溶液色谱图(略) 图2 样品色谱图(略) 2.4.3 阴性干扰实验按本品处方工艺及正文供试品溶液制备方法制备不含黄芪甲苷的阴性对照溶液，按正文含量测定方法进行测定，所得到的色谱图中，在与黄芪甲苷对照品峰相应的保留时间位置无干扰峰检出，即阴性无干扰。见图3。 图3 阴性干扰色谱图(略) 2.5 线性关系考察精密称取对照品黄芪甲苷20.04 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取2.5 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密量取5，10，15，20，25 μl，注入液相色谱仪，以峰面积的常用对数对进样量(μg)的常用对数进行线性回归，得回归方程:Y=1.049X，6.380(r=0.999 1)。结果表明黄芪甲苷进样量在2.505~12.525 μg范围内呈良好的线性关系。 精密度实验取同一浓度(0.501 mg/ml)黄芪甲苷对照品溶液，按色谱 2.6 条件连续进样5次，进样量20 μl/次，记录峰面积，RSD为 0.71%。结果表明本法精密度较好。 2.7 稳定性实验取本品细粉10.002 g，按正文含量测定方法制备供试品溶液，按正文色谱条件每隔6 h进样1次，进样20μl/次，记录峰面积，RSD为2.11%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定性较好。 2.8 重现性实验取同一批号(批号050205)样品，按正文含量测定方法，分别配制6份供试品溶液进行测定，计算含量，RSD为1.14,。结果表明本法具有良好的重现性。 2.9 加样回收实验分别取重现性实验项下用样品(含量为0.236 7 mg/g)约7 g，共6份，精密加入黄芪甲苷对照品溶液1.0 ml(0.501 mg/ml)，按正文含量测定方法中供试品制备方法制备样品，测定。结果见表1。结果表明方法的准确性较好。 2.10 样品测定分别取5个批号的样品，按正文含量测定的方法进行测定，计算含量。结果见表2。 表1 加样回收率测定结果(略) 表2 样品含量测定结果(略) 讨论 3 3.1 据文献记载,1,，黄芪甲苷含量测定方法很多，有比色法、分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法等，但由于黄芪甲苷仅在200 nm波长处有微弱吸收，因而干扰大、灵敏度低。ELSD为通用型质量检测器，特别适合无紫外吸收的化合物的含量测定，目前在黄芪等含皂苷类药材及制剂等药品质量控制中使用较多,2,，具有灵敏度高、结果可靠的优点。因此笔者采用了HPLC-ELSD法对驴胶补血颗粒中黄芪甲苷的含量进行了测定。 3.2 实验中选用乙腈-水(37?63)及乙腈-水- 四氢呋喃(33?67?4)为流动相，二者均达到了满意分离效果，黄芪甲苷峰与相邻峰分离度大于1.5，理论塔板数以黄芪甲苷峰计算均大于4 000，综合考虑，在测定中选用乙腈-水(37?63)为流动相。 3.3 结果表明，该法操作简便，重现性好，可用于驴胶补血颗粒的质量检测。 参考文献: ,1, 池玉梅，姜海英.HPLC士差折光检测测定黄芪及其注射液中黄芪甲苷含量,J,.中国药学杂志，2001，36(1):49. ,2, 徐希科，李慧梁，柳润辉，等.HPLC-ELSD法测定黄芪药材中黄芪甲苷,J,.中草药， 2005,36(11):1720.