空心莲子草与氯硝柳胺复配灭螺作用的研究

空心莲子草与氯硝柳胺复配灭螺作用的研究 空心莲子草与氯硝柳胺复配灭螺作用的研 究 国媒介生物学及控制杂志生旦笙鲞箜塑望』盟!旦!:呈!Q!:21: 文章编号:1003—4692(2008)05—0439—03 空心莲子草与氯硝柳胺复配灭螺作用的研究 谭苹,张学俊,杨建明.,肖少玉 ? 439? 【论着】 【摘要】目的探讨空心莲子草与氯硝柳胺复配用药的灭螺效果.方法采用室内浸杀法,将不同浓度的空心莲 子草水浸液以及0.0625mg/L氯硝柳胺与不同浓度空心莲子草水浸液的复配溶液,在(22?2)?室温条件下浸泡钉螺 24hN48h,观察钉螺上爬,闭厣及死亡情况.结果不同浓度的空心莲子草水浸液单用浸杀灭螺24h半数致死量 (LG.)为388mg/L,将0.0625mg/L的氯硝柳胺分别与不同浓度的空心莲子草水浸液复配后,灭螺24hu降为 116mg/L,增效~L(SR)>3.当空心莲子草水浸液浓度为800mg/L~以上时,能使钉螺闭厣率在30min内达76.7%以上, 有效抑制了钉螺上爬.结论空心莲子草具有显着灭螺及抑制钉螺离水上爬的作用,且与0.0625me./L氯硝柳胺复配后 能明显增强杀螺效果. 【关键词】空心莲子草;氯硝柳胺;联合用药;增效作用;钉螺 中图分类号:R383.24文献标识码:A StudyonmolluscicidaleffectofniclosamideandiIsmixturewithAlternantheraphiloxeroides刚Ping,『GXue- jun,4 『,Jian—ming,XIAOShao-yu.*DepartmentofParasitology,MedicalCollegeofWuhanScienceandTec hnical University,Wuban430065,China 【Abstract】ObjectiveToinvestigatethemollusdcidaleffectofniclosamideanditsmixturewiththeextractof Alternantheraphiloxeroides.MethodsTheinmlersionmethodwasusedinthisstudy.Oncomelaniahupe nsisWaSimmerses indifferentconcentrationofA.iloxeroidesextractandthemixedsolutionof0.0625mg/Lniclosamidean ddifferent concentrationofA.iloxeroidesextractat(22?2)?inthelaboratory.Aftertreatmentfor24hand48h,investigatethe up—climbing,operculumclosingandmortalityofO.hupensis.ResultsThe0ofA.iloxeriodessolution was338mL aftertreatmentfor24h.However,itsLq0reducedto116mLafter0.0625mg/Lniclosamideanddifferentc oncentrationof A.iloxeriodessolutionmiXled.Thesynergismratioexceeded3.TheoperculumclosingrateofO.hupens isWasmorethan 76.7%witlain30minattheconcentrationof800mL,whichwouldeffectivelyrestraintheup—climbingofsnail.Conclusion TheextractfromA.iloxeroidescouldeffectivelykillsnailandrestrainitsup—climbing.0.0625mg/Lnic losamidecould greatlyenhancethekillingeffectofA.iloxeroides. 【Keywords】Alternantheraphiloxeroides;Niclosamide;Combiningmolluscicide;Synergism;Oncomelaniahupensi s 目前世界卫生组织(WHO)唯一推荐使用的灭螺 药氯硝柳胺的最大缺点是低浓度下钉螺 (Oncornelaniahupensis)离水上爬,逃避药物的作用, 严重影响杀螺效果,且其价格昂贵,对鱼类及两栖类动 物毒力强.空心莲子草(Alternantheraphiloxeroides, AP)是苋科莲子草属草本植物,经研究发现其茎,叶干 燥粉末浸液有明显的抑制钉螺上爬和杀螺作用.为探 讨空心莲子草的灭螺效果以及与氯硝柳胺联合灭螺能 否减少药物用量,达到增效作用,我们在实验室进行了 空心莲子草的灭螺实验以及与氯硝柳胺联合灭螺作用 的研究. 作者单位:1武汉科技大学医学院寄生虫学教研室(武汉430065);2贵 州大学化学工程学院;3湖北大学生命科学学院 作者简介:谭苹(1961一),女,湖北人,副教授,主要从事寄生虫病防治 研究. 1与方法 1.1药物 1.1.1空心莲子草采自贵阳市近郊,经清理,去除 黄色老叶及根部,保留茎,叶部分,置8001200W微 波炉内处理2,3min,重复3,4次,然后晾干,碾磨成 粉末,过60,120目筛,保存其干燥细粉于密封塑料瓶 内备用. 1.1.2氯硝柳胺(niclosamide,Nic)50%氯硝柳胺 乙醇胺盐可湿性粉剂(商品名:螺灭杀),四川省化学工 业研究设计院赠送. 1.2钉螺采自湖北省洪湖市近郊,置(22?2)?室 温下,实验室饲养1,2d,经逸蚴剔除阳性螺,选择活 力强的7,8旋阴性成螺用于实验. 1.3实验分组及溶液的配制实验共分4大组:(1) 空心莲子草组,按10g空心莲子草干粉溶于1000ml蒸 ? 440?主垦竖生塑堂盘查Q生旦箜鲞第5期 -JVectorBio&Control,October2008,v_0I_19,No.5 馏水的浓度配制成空心莲子草水浸液,置(22?2)?室 温下浸泡24h后,5层纱布过滤,取滤出液加去氯水配 成6个浓度组:50,100,200,400,800,1600mg/L;(2) 氯硝柳胺组,按药物的有效含量配成0.03125, 0.0625,0.125mg/L组;(3)低浓度空心莲子草水浸液 与0.0625mg/L氯硝柳胺复配组,包括5个空心莲子 草浓度组:50,100,200,400,800mg/L,其中分别含 0.0625mg/L的氯硝柳胺;(4)清水对照组1个.共计 l5个小组,每组300ml溶液盛于300ml的玻璃瓶中,每 组2份,分别供24,48h浸泡实验观察. 1.4浸杀钉螺实验按WHO规定的”杀螺剂实验 室终筛方法”的浸泡法进行,将钉螺分别浸泡于上述 30个盛有实验溶液的玻璃瓶中,每瓶投螺30只,即按 每螺/loml溶液比例浸泡于实验溶液中,溶液满至瓶 口,加盖尼龙网塞,使钉螺完全浸泡于溶液中并便于观 察钉螺上爬附壁,闭厣及脱落情况.置于(22?2)?的 室温中浸泡24,48h.实验开始后连续观察4h,记录 钉螺上爬率和闭厣率,于浸泡24,48h时分别取出钉 螺,及时用去氯水冲洗沥干,盛于培养皿中,置 (22?2)?的室温下,分别于取出浸泡液24h后用水测 法及针刺法鉴别钉螺死活,计算各组钉螺死亡率.实 验重复3次,以3次平均值计算. 1.5计算半数致死量及增效比采用寇氏法计算钉 螺24h半数致死量(L)及其95%可信限(95% );t检验测定空心莲子草单用及与氯硝柳胺联合 用药L.值的差异有无统计学意义;采用四格 检验l3]测定空心莲子草单用以及与氯硝柳胺联合用药 的两两对应剂量组死亡率差异有无统计学意义;增效 比(SR)根据单独用药的LG.值与联合用药的LG. 值进行比较,SR=药物单用LG./联合用药LG.,若 SR=1,表示该复方溶液的作用类似单用药物作用;若 SR>1,有增效作用;若SR<l,有拮抗作用. 2结果 实验组中不同浓度空心莲子草,氯硝柳胺单用,以 及0.0625rag/L氯硝柳胺与不同浓度空心莲子草复配 用药的灭螺效果见表1. 2.1对照组钉螺在去氯水中的活动状态实验钉螺 被投入装满去氯水的玻璃瓶后迅速沉入瓶底,随后伸 出头足部吸附于瓶底,并不断伸缩运动其头足部,少数 钉螺向瓶壁移行,附壁钉螺随浸泡时间延长而逐渐增 多,其明显不同于钉螺受药物刺激后的上爬逃逸现象, 也没有闭厣脱落现象. 2.2单用空心莲子草的灭螺与抑螺效果经寇氏法 计算得到单用空心莲子草水浸液24hL.为 388mg/L(95%:324,465mg/L).当空心莲子草 水浸液浓度为200rag/L及以下时,钉螺上爬率在2h内 呈上升趋势,达4h后开始下降,提示此时钉螺开始出 现闭厣脱落现象;当浓度达400mg/L及以上时,钉螺 在接触药液的15min内出现较高的上爬附壁率,但很 快闭厣,上爬率呈明显下降趋势,药物在短时间内有效 抑制了钉螺的上爬而使其陷于浸泡液中,故灭螺效果 较好,钉螺24h死亡率达60%,100%. 2.3单用氯硝柳胺对钉螺的影响氯硝柳胺浓度在 0.03125,0.125mg/L范围时,钉螺的闭厣率均为0, 与去氯水对照组相同,说明在此浓度范围内氯硝柳胺 表1空心莲子草单用以及与氯硝柳胺联合用药的灭螺效果 药物浓度(rng/L)闭厣率(%)上爬附壁率(%) 4h 0.O 3.3 16.7 80.0 00.0 000 O.O O.O 0.0 3.9 6.7 50.6 91.1 00.0 0.0 圭主 24h48h Nic H2O 50 100 200 400 800 1600 0.03125 00625 0.125 50+0.0625 100+0.0625 200+0.0625 400+0.0625 800十0.0625 079OO0709490O00 0????铝罟8???0 O22OO0089392600 0???0勰弱铝?0 -l7768OO4O17637O3 一O0?%i己踟”0 74663O146O12963 加加0??墙 63436O461414373 加0加;呈诣un 34778O83l373207 0们 0O041O000OO613O OO0%?OO0OOm%O 00007O00OO0O39O OO00?O0OO0O30 000O3OOOOOOO030 0OOO3O0O0OO0O 国媒介生物学及控制杂志2008年Q筮鲞筮塑望』!旦i!堕Q:1:Q: 不具备使钉螺闭厣之功效,且在此浓度范围钉螺的上 爬率随浸泡时间延长而明显增加,提示钉螺对该药物 刺激敏感而产生逃逸现象,使得该浓度范围内的灭螺 效果较差,钉螺24h死亡率仅在28.9%以下. 2.4联合用药的灭螺与抑螺效果联合用药组钉螺 闭厣率的升高较单独用药组更为明显,上爬附壁率则 随钉螺闭厣率的上升而下降,钉螺死亡率随之明显上 升.实验结果显示,50,100,200,400,800mg/L空心 莲子草水浸液与0.0625mg/L氯硝柳胺联合用药后, 浸泡24h死亡率分别由0,2.2%,12.2%,60.0%及 80.0%上升至33.3%,48.9%,61.2%,85.6%及 100%;经四格表检验测定单独用药与联合用药两 两对应浓度组死亡率的差异有统计学意义,得到的5 个对应组Y值分别为:9.720,14.403,12.129,4.176, 4.630,提示50,100,200mg/L3个浓度组差异具有统 计学意义(P<0.01),400,800mg/L2个浓度组差异 亦有统计学意义(P<0.05);经寇氏法计算得到联合 用药组钉螺24hL.为116mg/L(95%CI:92-- 145mg/L),其明显低于单独用药组24hLC5值 (388mg/L),经检验显示单用空心莲子草.值与 联合用药LC5.值差异具有统计学意义(t:11.187, P<0.001);SR>3,显示空心莲子草与氯硝柳胺联合 杀螺作用增效明显. 2.5钉螺的死亡状态不同药物组钉螺的死亡状态 不同,空心莲子草用药组的死亡钉螺呈闭厣状态,而氯 硝柳胺组的死亡钉螺呈开厣状态,钉螺头足部伸出螺 壳之外,且明显肿胀,联合用药组的死亡钉螺则部分呈 开厣状态. 3讨论 目前,国内外主要采用单一的化学药物氯硝柳胺 灭螺,但单用氯硝柳胺存在一定的缺陷,如价格较贵, 低浓度下钉螺有离水上爬现象,对鱼类及两栖类动物 毒性较大等.为进一步完善氯硝柳胺的灭螺效果,国 内专家正致力于复方用药或杀螺增效剂方面的研究, 现已有相关方面的报道[5],但目前尚无理想的产品. 空心莲子草是苋科莲子草属草本植物,本研究证实其 茎,叶干燥粉末浸液具有抑制钉螺上爬和杀螺作用,且 低浓度空心莲子草与0.0625mg/L氯硝柳胺合用时, 钉螺死亡率明显上升,其单独用药与联合用药的 SR>3,表明空心莲子草与氯硝柳胺联合杀螺增效作 用明显.同时联合用药可减少氯硝柳胺的用量,从而 达到降低其毒性的作用. 从钉螺上爬附壁率结果中可看出,钉螺接触 200mg/L及以下浓度空心莲子草水浸液时,其上爬附 壁率在2h内随浸泡时间的延长而增加,提示此时该浓 度抑制钉螺上爬作用不明显,浸泡时间达4h后上爬附 壁率开始下降,提示此时钉螺在药物作用下开始出现 闭厣脱落现象;当空心莲子草水浸液浓度达到 400n1g/L及以上时,钉螺在接触药液的15min内表现 出较高的上爬附壁率,可能是对药物刺激的反应,但随 后钉螺在短时间内逐渐闭厣,上爬附壁率随之明显下 降;当浓度达1600mg/L时可使钉螺立即闭厣不动,无 法逃逸而陷于浸泡药液之中,表明空心莲子草水浸液 中含有促使钉螺闭厣而停止其运动之成分,若将该抑 螺成分提取,纯化并人工合成,则可弥补氯硝柳胺,烟 酰苯胺等类化学灭螺药的缺陷,并可极大程度减少其 他灭螺药的用量. 另外,不同药物组钉螺的死亡状态不同,是否提示 不同药物的灭螺机制有所不同?有待进一步研究. 参考文献: [1]毛守白.血吸虫生物学与血吸虫病的防治[M].北京:人民卫生出版 社,1990:705. 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