[精品]痛泻要方与乙酰胆碱对家兔离体小肠平滑肌作用的研究

[精品]痛泻要方与乙酰胆碱对家兔离体小肠平滑肌作用的研究 痛泻要方与乙酰胆碱对家兔离体小肠平滑肌作用的研究 关键词 痛泻要方 乙酰胆碱 离体小肠 实验研究 痛泻要方出自《景岳全书》，由白术、白芍、陈皮和防风组成，功效为疏肝利脾，是治痛泻证的主方。临床医家在应用本方时多主要是围绕着“痛、泻”为主证而加减应用。肠易激综合征(IBS)即是以“痛、泻”为主要临床表现，故本方是中医治疗IBS最常用的基本方。有文献报道，肠易激综合征患者血中乙酰胆碱(Ach)水平较高,1,，故笔者通过对家兔离体小肠作用的研究，探讨了痛泻要方与乙酰胆碱对小肠平滑肌振幅、基线和频率的影响，以进一步明确痛泻要方治疗肠易激综合征的，为痛泻要方的临床治疗IBS提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 药品:痛泻要方水提剂，由云南中医学院中药化学实验室提供，这四味药按一定比例配成本实验所用的痛泻要方。氯化乙酰胆碱，上海三爱思试剂有限公司出品，批号为 (由NaCl 8g，KCl 0.2g，NaHCO,31g，MgCl,2 0.1g，NaH,2PO,4 0.05g，20030620。Tyrode液 CaCl,2 0.2g，葡萄糖1g，加蒸馏水至1000ml配制而成)。 1.2 仪器:Powerlab,8s生物信号采集系统及恒温浴槽，澳大利亚埃德公司。软件为Powerlab chart 4.2.3;Precisa XS 125A电子分析天平，瑞士产。 1.3 动物:清洁级家兔，体重2,2.5kg，雌雄各半，由承德医学院实验动物中心提供。 1.4 结果的计算方法:按如下方法。 1.4.1 振幅:以小肠平滑肌收缩的振幅变化率表示，中药0剂量组变化率=(Ach相应剂量的振幅-未加Ach的振幅),未加Ach的振幅×100,，各中药组变化率=(Ach相应剂量的振幅-中药相应各组的振幅),中药相应各组的振幅×100,。 1.4.2 基线(张力):以基线(张力)下降mV差值数表示。 1.4.3 频率:以小肠平滑肌收缩的频率变化率表示，中药0剂量组变化率=(Ach相应剂量的频率-未加Ach的频率),未加Ach的频率×100,，各中药组变化率=(Ach相应剂量的频率-中药相应各组的频率),中药相应各组的频率×100,。 1.5 统计学处理:所有实验数据采用x?s表示。 2 实验结果 2.1 痛泻要方对Ach所致的家兔离体小肠收缩的作用:清洁级家兔禁食24小时，击其头部处死后取出小肠，立刻浸入营养液中，剪去系膜后制成1.5cm的小肠标本，置于含有20ml台氏液(37?0.5?)的离体器官浴槽内，一端连于张力换能器，另一端连于通气钩，持续通入95,O,2+5,CO,2混合气体，加负荷1g左右，平滑肌张力变化通过张力换能器记录于Powerlab,8S生物信号采集处理系统。平滑肌在营养液中稳定30分钟，待产生规律恒定的收缩后，先记录一段正常曲线，再开始实验。先分别加入不同剂量的Ach，再分别加不同剂量的痛泻要方。每组加药前，均冲洗标本3次，待舒缩恢复到用药前水平后再加下一组药，实验中所用药物浓度均以最终浴槽浓度计算。观察给药后小肠平滑肌的收缩幅度、基线(张力)、频率的变化，结果见表1、2、3。 2.2 先加痛泻要方后加Ach对家兔离体小肠平滑肌的作用:制作家兔离体小肠标本，方 法同前，实验方法与操作同上，记录一段正常曲线后，分别加入不同剂量的痛泻要方，再分别加不同剂量的Ach。观察给药后小肠平滑肌的收缩幅度、基线(张力)、频率的变化，结果见表4、5、6。 3 讨论 胆碱能神经元是种系个体发育中最早发现的神经元，也是肠神经系统内数目最多的神经元,2,。AchE阳性神经是肠道动力疾病研究的重要指标,3,。乙酰胆碱作为胆碱能神经释放的一种兴奋性神经递质，对胃肠运动调节有重要作用,4,，经常用于研究生理或病理状态下胃肠运动变化,5，6,。由胆碱能神经元释放的乙酰胆碱可激动胃肠平滑肌细胞膜上的M受体，M受体是G蛋白耦联受体，M₂受体与配体结合后通过G蛋白与腺苷酸环化酶(AC)耦联，抑制该酶的活性，使胞内环磷酸腺苷(cAMP)浓度下降，通过细胞膜信号传导系统，导致胞内钙离子浓度升高,7,，兴奋胃肠平滑肌并产生强烈的收缩运动,8,。当先给予不同剂量的Ach作用时，痛泻要方可显著性地抑制Ach所引起的小肠平滑肌的收缩(P<0.01，P<0.05)，使振幅变小，基线(张力)下降，频率减慢;而当先给予不同剂量的痛泻要方时，痛泻要方可事先显著性地预防Ach所引起的小肠平滑肌收缩(P<0.01，P<0.05)，此结果提示痛泻要方对肠管产生抑制作用可能与M胆碱受体被阻断有关。至于痛泻要方对肠管的作用还与何靶点有关，将在后面的实验中研究。 4 参考文献 本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。
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