黄芪提取物对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用

黄芪提取物对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用 黄芪提取物对小鼠急性化学性肝损伤的保 护作用 安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2009Jun;13(6)?603? 黄芪提取物对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用 邱 (1.合肥市第一人民医院药学部,安徽合肥 季,桂双英 230061;2.安徽中医学院药学院,安徽合肥230031) 摘要:目的探讨黄芪提取物(AE)对CC1致小鼠急性化学性肝损伤模型的保护作用.方法采用 CC1诱导小鼠急性肝损伤 模型,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(AlJrr),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝匀浆中丙二 醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD), 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)含量,HE染色法对肝脏作病理检查.结果AE能显着降低小 鼠血清A,AST,肝匀浆MDA水 平,升高SOD和GSH—Px酶活性,减轻肝细胞损伤.结论AE对CC1致小鼠急性化学性肝损 伤模型具有保护作用. 关键词:肝损伤;黄芪提取物;四氯化碳 Protectiveeffectofastragalusextractonacuteliverinjuryinmice QIUJi,GUIShuang?ying (1.DepartmentofPharmacy,FirstRenminHospital,Hefei230061; 2.SchoolofPharmacy,AnhuiCollegeofTraditionalChineseMedicine,Hefei230031) Abstract:AimToexploretheprotectiveeffectofastragalusextract(AE)onacuteliverinjuryinmice.Met hodsAliverinjurymodel wasinducedbyCC14.Theofalanineaminotransferase(AI),aspartateaminotransferase(AST)inplasm a,thecontentsofalondiadchyde (MDA),superoxidedismutase(SOD),glutathioncperoxidase(GSH—Px)inliverhomogenateweremeasured.Hepaticpathologicalchan— gesoflivertissuewereobserved.ResultsAEsignificallyloweredserumAI|rr,AST,decreasedMDAandi mprovedSOD,GSH—Pxinliver homogenateaswellasreducedthepathologicaldamageOilliver.ConclusionAEhasprotectiveeffectOil acuteliverinjuryinmice. Keywords:liverinjury;astragatlusextract;CC14 黄芪为豆科多年生草本植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的根, 味甘,性微温,归脾肺经….黄芪提取物主要含是黄芪皂甙, 具有补气升阳,益卫固,清热利湿,解毒泻火之功效.现代 药理学研究表明它有调节免疫,抗病毒,降低肝损伤,抗氧化 及抗突变等多种作用.本研究采用CC1诱导小鼠急性化 学性肝损伤模型,观察黄芪提取物对小鼠急性肝损伤的保护 作用,为其临床应用提供试验依据. 1材料 1.1药物与试剂AE:黄色粉末,由安徽医科大学临床药理 向lovastatin合成的碳源减少,所以可以适量减少了缓慢利用 的氮源A粉的量,从而达到提高产量的目的. 该正交又重复试验,九组配方的发酵相对百分效价 分别为62.23%,71.56%,60.35%,86.85%,87.81%,85. 43%,111.32%,83.48%,74.65%,对重复试验的结果进行 分析得知,此实验有重现性. 为了证实这一最佳配方的发酵水平,配制10只摇瓶发 酵,平均相对百分效价为113.63. 试验证明用A粉可以完全代替豆粕粉,由正交试验得到 了最佳发酵主要配方:A粉5.5%,蛋白胨0.5%,葡萄糖12. 5%,麦精2.0%,发酵单位提高了13.63%,并明显减少了泡 沫.A粉价格较豆粕粉价格低,且用量较豆粕粉少,此配方可 以降低发酵成本. 3批量验证试验 选择A3Bc,D:在12吨发酵罐上进行连续5批发酵验证 结果见表4. 表4批量发酵验证结果 试验号12345平均对照 相对发酵效价107.60101.79108,4111.34109.40107.70100.00 产品质量合格合格合格合格合格一合格 批量试验表明用A粉代替豆粕粉在生产上是可行的,发 酵单位得到提高,原材料成本降低,具有很好的经济效益.在 试验过程中,菌丝形态,菌丝浓度与原配方无明显区别,试验 过程中泡沫明显减少,从而可以提高装料系数,发酵水平的提 高得到保证,从而产生更好的经济效益. 参考文献: [1]GoldsteinJL,BrownMS.Regulationofthemevalonatepathway[J]. Nature,1990.343(6257):425—30. [2]AlbensAW,ChenJ,KuronG,eta1.Mevinolin:ahighlypotentcon— petitiveinhibitorofhydroxylglutary—coenzymeAreductaseanda cholesterolloweringagent[J].ProcNatlAcadSeiUSA,1980,77 (7):3957. [3]吴波,陈长华,杨琳.洛伐他汀发酵培养基配方优化及15L 罐放大[J].中国抗生素杂志,2007,32(7):409. [4]储炬,李友荣.现代工业发酵调控学[M].2版.北京:化学工 业出版社,2006:275. [5]孙荣桓.应用数理统计[M].北京:科学出版社,1998:218. [6]RichardC,KennedyHJ,ParkC,eta1.Aspectsofthebiosynthesisof non—aromaticfungalpolyketidesbyiterativepolyketidesynthases [J].AntonievanLeeuwenhoek,2000,78(3):287. (收稿日期:2008—10—30) 安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2009Jun;13(6) 研究所提供,主要含黄芪皂苷I,IV;联苯双酯(bifendate, Bif):浙江医药股份有限公司新昌制药厂生产,批号:050803; 四氯化碳(carbontetrachloride,CC1):安徽省蚌埠电化试剂厂 产品,批号:20060204;丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotrans— ferase,AIJT)测定试剂盒:南京建成生物工程研究所产品,批 号:20060313;天冬门氨酸氨基转移酶(aspartateaminotrans— ferase,AST)测定试剂盒:南京建成生物工程研究所产品,批 号:20060313;超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)测 定试剂盒:南京建成生物工程研究所产品,批号:20060313;谷 胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,GSH—Px)测定试剂 盒:南京建成生物工程研究所产品,批号:20060308;丙二醛 (malondiadehyde,MDA)测定试剂盒:南京建成生物工程研究 所产品,批号:20060310;考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒:南京 建成生物工程研究所产品,批号:20060306. 1.2动物昆明种小鼠20g?2g,由安徽医科大学实验动 物中心提供(合格证号:皖医实动准01). 1.3仪器GL一20A全自动高速冷凉离心机:湖南仪器仪表 厂离心机厂产品;LD4—2A型高速离心机:北京医用离心机厂 产品;7530可见紫外分光光度计,上海分析仪器厂产品;TN— B型托盘式扭力天平:上海第二天平仪器厂产品;AA200DS 型电子分析天平:Denver仪器公司产品;78HW一1型恒温磁力 搅拌器:杭州仪表电机厂产品;XW一80型旋涡混合器:上海医 科大学仪器厂产品;电热恒温水浴锅:上海医疗器械五厂产 品. 2实验方法 2.1分组与给药昆明种小鼠90只,雄性,体重(18,22)g, 按体重随机分成6组,分别为正常组,CCI模型组,AE三个 剂量组(10,20,40mg?kg),联苯双酯组(100mg?kg). 造模前灌胃给药,每天给药1次,连续7d,正常对照组和模型 组给予等量溶媒. 2.2造模方法末次给药后1h,除正常组外,其它各组 小鼠按10mI.体重腹腔注射0.1%CC1精制花生油溶 液,正常组注射相应体积的生理盐水,禁食18h后,自小鼠后 眼眶静脉丛采血,取肝脏,脾脏,胸腺称重作相关指标检测. 2.3观察指标(1)收集血液,分离血清检测A,AST水 平;(2)取肝脏,脾脏,胸腺称重,计算肝脏,脾脏,胸腺指数. (3)取肝右叶制备10%肝匀浆,分别采用相关试剂盒测 MDA,SOD,GSH—Px.(4)取肝左叶经10%甲醛固定,进行组 织病理学检查. 2.4统计分析病理组织学检查结果采用Ridit分析方法, 其它数据均以均值?差(?s)表示,采用ANOVA,Dun— can’Stest进行分析处理. 3结果 3.1黄芪提取物对小鼠血清转氨酶的影响表1结果显示, 模型组小鼠血清ALT,AST水平显着升高.与模型组比较, AE(10,20,40mg?kg),和Bif(100mg?kg..)均能显着 降低CC1升高的ALT,AST水平. 表1CAF对CCI所致肝损伤小鼠血清 ALT,AST水平的影响(n=10,i?) 注:与正常组比较,P<0.05,P<0.Ol;与模型组比较,P< 0.05.P<0.01 3.2黄芪提取物对小鼠肝,脾,胸腺指数的影响表2的结 果表明,与正常组相比较,模型组小鼠的肝脏,脾脏和胸腺指 数均显着升高.与模型组比较,AE(20,40mg?kg)能显 着降低CC1升高的肝指数,升高胸腺指数,AE(20mg? kg)还能显着降低脾指数;Bif(100mg?kg)能显着降低 肝,脾指数. 3.3黄芪提取物对肝匀浆SOD,MDA,GSH-Px的影响表 3的结果表明,CC1使小鼠肝匀浆中SOD和GSH—Px酶活性 显着下降,同时MDA含量显着升高,给予AE(10,2O,40mg ? )可显着升高肝脏GSH—Px酶活性,同时降低MDA水 平,AE(20,40mg?)还可显着升高SOD酶活性. 表2AE对CCI所致肝损伤小鼠肝,脾,胸腺指数的影晌(n:10.?s) 注:与正常组比较,P<0.Ol;与模型组比较,P<0.05,尸<0.01 表3AE对CCI4肝损伤小鼠肝匀浆MDA,SOD和GSH?Px水平的影响(n=10.?5) 注:与正常组比较,P<0.0l;与模型组比较,P<0.05,,P<0.O1 安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2009Jun;13(6)?605? 图1正常小鼠肝组织(HE,100X)图2CCI诱导的化学性 肝损伤小鼠肝组织(HE,100×) 3.4黄芪提取物对小鼠肝脏病理的影响表4,图1,3显 示,正常肝组织未见明显病理改变,模型组肝内出现弥漫性分 布的肝细胞变性坏死,炎细胞呈弥漫性浸润.AE(20,40mg ? kg)和f(100mg?kg)组均可降低肝脏组织病理评 分,减轻组织病变范围与程度,使炎细胞浸润减少. 表4AE对CCI肝损伤小鼠病理 的影响(n=10,?) 注:与正常组比较,P<0.01;与模型组比较,P<O.05,,P<0.叭 黄芪提取物能显着降低CC1诱导的急性化学性肝损伤 小鼠血清A,AST水平;降低肝匀浆CC1升高的MDA水 平,并且升高SOD和GSH—Px酶活性;病理组织学结果表明, 黄芪提取物能使CC1诱导的肝细胞损伤减轻.提示黄芪提 取物在10—40mg?剂量范围对小鼠急性化学性肝损伤 具有保护作用. 4讨论 四氯化碳中毒肝损伤模型较为稳定,易于掌握,其引起的 肝损伤主要与脂质过氧化的损伤机制有关,近有报道可能 和大鼠的免疫功能失调有关.该模型的病理学特征与人 类病毒性肝炎极为相似,是目前推崇的研究保肝药物作用及 机制的理想模型,常用于滋肝补肾方剂研究.黄芪具有抗 炎,抗氧化和免疫调节作用,能促进肝细胞的DNA合成,促进 淋巴细胞的转化及抗体的合成,增强机体的抵抗力J.此 外,黄芪可以通过促进中枢免疫器官的发育,调节机体异常的 免疫功能,对离体肝细胞的试验证明黄芪总提取物可明显 降低由CC1和H0升高的肝细胞MDA含量,并可使降低的 GSH含量及GSHPX活性升高或恢复,因而减轻膜脂质过氧 图3AE(20mg?kg)治疗化学性 肝损伤小鼠组(HE,200×) 化和细胞膜通透性的增加,提示黄芪总提取物对肝细胞损伤 的防治作用可能与其抗氧化作用有关.本研究选择小鼠 CC1肝损伤模型,测定ALT,AST及肝匀浆中MDA,SOD和 GSH—Px含量,结果表明,AE能明显降低CC1引起的血清转 氨酶和MDA的增高,升高SOD和GSHPx酶的活性.AE各 给药组均不同程度地改善了肝细胞变性,坏死病变.提示黄 芪提取物在10,40mg?kg剂量范围对小鼠急性化学性肝 损伤具有保护作用.本研究可为进一步将黄芪提取物开发为 一 种防治肝炎的中药提供理论和实验依据. 参考文献: [1_吴发宝,陈希元,黄茂.药理作用研究综述[J].中药材,2004, 27f3:232—4. 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