5％声振人血白蛋白注射液的细菌内毒素检测方法的研究

5％声振人血白蛋白注射液的细菌内毒素检测方法的研究 5,声振人血白蛋白注射液的细菌内毒素检 测方法的研究 第20卷第1期 2004年2月 广东药学院 ACADEMICJOURNA1OFGUANGDONGCOLLEGEOFPHARMAC~ ,o1.20No.1 Feb.2004 5%声振人血白蛋白注射液的细菌内毒素检测方法的研究 晏媛郑萍陈志良 (第一军医大学附属南方医院药学部,广东广州510515) 摘要目的:建立测定声振人血白蛋白注射液细菌内毒素检查的方法,方法:确定合理的声振人血白蛋白注射液的内毒素 限值,利用不同厂家的鲎试剂对不同批号的声振人血白蛋白注射液选行千扰试验,以确定最大稀释倍数结果:声振人血白 蛋白注射液稀释6O倍,对细菌内毒素检查鲎试剂反应没有干扰作用结论:方法简便,快速,准确用本法检测声振人血白蛋 白注射液中的细菌内毒素是可行的 关键词声振人血白蛋白注射液;细菌内毒素试验;干扰试验;限值 中图号R927.1文章编号:l006—8783(2004)0l一【)()l9,O2文献标识码:A Experimentalstudiesonbacterialendotoalntestof5%sonicated humanalbumin YANYuan,ZHENGPing,CHENZhi—liang (PharmacyDepartmenfofNanfangHospital,theFirstMilitaryMedicalUniversit),Gaangzh Olt,Guangdong510515) AbstractObjective:Toestablishamethodfi)rthedeterminationofbacterialendotoxinjn5%S onieatedHmilanAlbumin. Methods:Setupareasonablelimitofbacterialendotoxinf()r5%sonicatedhumanalbumin.T heinterfereneetestwasconducted byusingTALreagentfromthedifferentfactoriesinordertoestablishthemaxinumtimesofdil utedliquid.Result:Sonicated HunlanAlbumindiluted60timesshowednointerfereinbacterialendotoxinintestwithSonic atedHumanAlbumin.Conclusion: ThismethodWaSfoundtobesimple.quick,accurateandissuitableforthedeterminationofba cterialendotoxinnsonicated humanalbumin. Keywordssonicatedhumanalbumin;bacterialendotoxintest;interferingtest;limit CLCnumberR927.1ArticleID:1o06—8783(20o4)01一o019—02Documentcode:A 5%声振人血白蛋白注射液是我院成功研制的 一 个二类新药.由5%的白蛋白生理盐水溶液特殊 处理后,形成包裹空气的白蛋白微球制剂,通过外周 静脉注射经肺循环的左心室超声造影剂,可显着增 强左心室内膜的分辨效果.我们对5%声振人血白 蛋白注射液的细菌内毒素检查进行研究,探讨以细 菌内毒素检查法替代热原检查法检测5%声振人血 白蛋白注射液的可行性. 1 1.1试剂5%声振人血白蛋白注射液:第一军医 大学南方医院提供,规格1OmL,不同批号若干;弃 G因子鲎试剂(TAL):批号010604,标示灵敏度 0.25EU/mL,每支0.1mL(厦门鲎试剂厂);鲎试剂 作者简介:晏媛,女,大学本科,主管药师. 研究方向:药品分析和质量控制. (TAL):批号02031ll,标示灵敏度0.25Eu/mL,每 支0.1mL(湛江安度斯生物有限公司);细菌内毒素 国家标准品:批号98l,效价9000EU/支(中国药品 生物制品检定所);细菌内毒素检查用水(以下简称 BET水),批号000509,湛江安度斯生物有限公司. 1.2仪器旋涡混合器,恒温水浴锅,吸管,试管等 经除热原处理(250?干烤至少1h). 2方法与结果 2.1TAL标示灵敏度复核用BET水将细菌内毒 素标准品稀释成2,1,0.5,0.25k的标准内毒素溶 液,按细菌内毒素检查法进行实验,结果见表1. 两批TAL的灵敏度复核结果与一致,符 合使用要求. 广东药学院(ACADJGCP)2004,20(1) 表lTAL灵敏度复核试验 Tab.1TestresultsofTALsensitivity Nc:阴性对照(Negativecontro1) 2.2细菌内毒素限值的计算和最大稀释倍数的确kg. 定,J:K/M=5.0/0.3=16.7EU/mL 药品,生物制品的细菌内毒素限值(L)一般按 以下确立L:K/M.按规定给药途径,本品 静脉注射其内毒素阈值()为5.0EU/(kg?h); 为人用每公斤体重每小时最大剂量,本品第1次 注射剂量为0.8mL/kg,若显影效果不行,则第2次 注射剂量为0.22mL/kg,所以本品M定为0.3mL/ 样品的最大稀释倍数 MI/D=,J?C/A:16.7×1.0/0.25=67 2.3样品的干扰试验 考虑66.7倍不好稀释,我们用BET水将样品 稀释6O倍,按细菌内毒素检测法作检品的干扰试 验,结果见表2. 表2样品干扰试验结果 Tab.2Resultsoftheinterferenceexperiment 当0.5??2时,可以认为样品在该浓 度不干扰试验.试验结果表明:对两个不同厂家的 鲎试剂,二批样品稀释60倍对BET检测没有增强 抑制作用,勿需再做更多灵敏度更大稀释倍数的干 扰试验.也就是说:用细菌内毒素检查法对5%声 振人血白蛋白注射液的半成品及成品进行热原检查 是可行的.检查方法:取本品用BET水稀秆60倍 后,依法检查,每1mL样品中内毒素不超过l6.7 EU 3讨论 3.1本法与传统家兔法比较灵敏度高,无个体差 异,受外界影响小,重现性好,设备简单,费用低廉, 适合厂家对生产全过程的热原监控和中间产品检 测.及时发现出毒素污染程度,提高产品质量,具有 指导生产的意义. 20 3.2内毒素法检测人血白蛋白,国外药典未收载, 国内报道全鲎试剂检测人血白蛋白,测得值比实 际含量高,易造成假阳性.本法选择两个不同厂家 的弃c因子TAL和普通TAL进行干扰实验,当样 品稀释60倍时,两者均能消除干扰,得到满意的试 验结果,这可能与白蛋白浓度低有关 参考文献 [1]中和国药典,2000版二部[S].附录XIE.86—87, [2]同上.附录.204. [3]李治安,龚培力,吕清,等.5%声振A_A白蛋白注射液左 心声学造影增强左室内膜的?期多中心临床研究 【j].中国医学影像技术,2000,16(5):361. 『4]千剑平,张雅莉,蔡磊,等.细菌内毒素试验用于人血白 蛋白生产中的热原检测[1].中国输血杂志,1998,1(3): l49. (2003—05—06收稿)