为了正常的体验网站,请在浏览器设置里面开启Javascript功能!

化疗对造血微环境的影响及化疗后回输自体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用

2017-12-12 8页 doc 23KB 22阅读

用户头像

is_963767

暂无简介

举报
化疗对造血微环境的影响及化疗后回输自体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用化疗对造血微环境的影响及化疗后回输自体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用 化疗对造血微环境的影响及化疗后回输自 体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用 生望查液学杂志2001E月第22卷第7期Chi口JHemarol,Jdv2001,Vol丑No7 化疗对造血微环境的影响及化疗后回输 自体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用 刘静纪树茎用琳丽陈惠仁 l摘要】目的观察化疗对造血祖细胞,造血微环境的影响,化疗后回输体外扩增的自体骨髓基 质细胞(ABMSC)对造血功能恢复的作用.方法对化疗患者进行骨髓C}IJ-GI~I,CRJ-E,...
化疗对造血微环境的影响及化疗后回输自体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用
化疗对造血微环境的影响及化疗后回输自体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用 化疗对造血微环境的影响及化疗后回输自 体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用 生望查液学杂志2001E月第22卷第7期Chi口JHemarol,Jdv2001,Vol丑No7 化疗对造血微环境的影响及化疗后回输 自体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用 刘静纪树茎用琳丽陈惠仁 l摘要】目的观察化疗对造血祖细胞,造血微环境的影响,化疗后回输体外扩增的自体骨髓基 质细胞(ABMSC)对造血功能恢复的作用.方法对化疗患者进行骨髓C}IJ-GI~I,CRJ-E,I~IJ-E及基质 细胞集落(CVO-F)培养,长期骨髓培养,观察基质层融台情况,计算基质层覆盖率及完全融合时间.长 期化疗的l0例患者进行自身前后对照,在同一化疗下,单纯化疗与化疗后回输体外扩增的ABMSC [(1.1,8.7)xl0B/次]作对比,观察两者造血恢复情况.结果?长期化疗组的CRJ-Gbl,BFU-E,cFU- E,CI~'-F显着低于正常对照组及短期化疗组,后两组差异无显着性;?三组基质层覆盖章及完全融合 时间差异无显着性?长期化疗组ABMSC输注后的CFU.GM,CF1J.E,I~FIJ-E,CFIJ-F显着高于未翰注 组;?输注AIIMSC后自细胞计数及血小板计数降至最低点的值显着高于未输注组,前者自纽胞计数 及血小板计数恢复正常时间较后者明显缩短;?基质细胞回输过程及翰后临床观察无不良反应.结 论长期化疗明显损伤造血祖细胞,基质祖细胞,但对骨髓基质细胞融合功能无明显影响.化疗后给 予ABMSC可加速造血功能的恢复. 【美量词】骨髓基质细胞;细胞培养;造血功能;微环境 血哪睫el'曲酋咖m旺呷亨帆hI删豳Il珥融'c硼幻r0蚰瑚岫tJmd~'eetel'翻畦b嘶el口脚瑚 minicellhl蛔onthere?唧ath知耐0p0afterd岫m}螂L/UJ蜥,鼎,ZHOU伽, a1.l甲删of呻?,AirC.eneral爿缸.Bei~is,g100036,China 【A删】Ob.)~rveTo0bBeetheintlueneeofchemotherapyonhem~ieliePlen0r.elk(帆) 蚰dk血毗叩0i口啦珊?l(哪E).ob鲫ewhetheri帅vn珥k-'ff~ional1唧岫b0I.err哪T0 曲|I由l0elIs(JU~SC)Dar}dedinvitlm恤liml~ovethehematc~iedc血?ctioII.M—l,0凼Culturescu.GM, BE,C刊.E蚰d8缸帅I由lpl0rcells(CFU.F)fi~rnnommleorm~l蚰d&enw,ther~c叫ien饵Iep啊一 hn耐.出wBs阳拙吕船of蝴n鼬k郇c帆出 (ASSC)BrdtheIIM.1en吐r0mcellsreeehcorl~erlce("rc).erecoveryIlem丑tap如n吐in t明nchemctllErar脚蚰dlongem-chemotherapy,tllOrwilh0LlAB^I:埘(1.1s7)xl旷 chemctll咖r吼w皓0b日er.髓捌?Theyiel~0rC兀_-GM,BFIJ-E,CFU—E蚰dCFFi廿nnche? metl~py脚sigi伽l由1l-l且lIthatinm衄lg~ouporinsh0^termeh哪he? I.og?ific蚰I&T即oearr眦threeointheASSC蚰d代Inlongch眦I盱聊g删p,the州出0f CFIJ-GM,c耵J.E,BnE蚰dcFu.F血ercIlerrl0rawitllB?infil~nIe6?_I【blli蚶ll舶呲 wm?哪lBMsc_岫.Inl叩g帅ch?蜘f0p,thelowest试tebIo0dc?(c)and—Ellet 血em[r叩,rlIlBhtscir血0Ilw鹕si~earalylli—Hthan?l毗thoutBMSCin丘画叽.Thetill豳hwB(: andateIebIeoeredto瑚皿呲l岫sicandv8h眦町in删sc仉Ipnl帅in,~ithoaBMsc1ar3eI 髓c- tj0Ilwas0bwilIlABinfilgon0嘶曲商珊kngtermchemotl~re~ollhsinseverej哪,ai工II 唧吐HPc aIIdmN~emtorcell(眦),bIltImm0usinfluence0ntheinvitmB^Isc?胡1|肌ll~yerferal- fion.h-h-鹏iruDn0f既par-dedABMSC咖0~elemtetherecoveryl帕氆10p0i嗍i8血 erd瑚T10出哪 lK姆岫】‰?~romaleell~Ceuculture;H咖aicf蚰;廿呻nvi埘llem 骨髓基质细胞(B^,sC)是造血微环境的重要组 成部分,是维持造血活动的基本结构.我们观察了 长期化疗对基质祖细胞,造血祖细胞的损害;对长期 化疗的患者化疗后输注体外扩增的自体BNSC (ABMSC),观察其促进化疗后造血功能恢复的作 作者单位:100036北京.解放军空军总医院 用,现报告如下. 材料和方法 ? 论着? 1试剂碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)购自美 国Chemie,~公司,IL-3,GM—CSF购自Si蛐公司,0 csF购自日本中外制药公司,Epo购自日本麒麟公 司,胎牛血清(FCS),马血清(HS)购自中国医学科学 院血液学研究所. 2对象正常对照组1O名,系健康献髓者,男6 名,女4名,平均年龄28岁(15,51岁).短期化疗 组l0例,连续接受标准剂量化疗方案2,3个疗程. 骨髓象正常者;男6例,女4例,平均年龄32岁(12 , 64岁),急性髓系白血病(AML)4例,急性淋巴细 胞白血病(ALL)4例,非霍奇金淋巴瘤(NHL)2例. 长期化疗组10例,均按标准剂量连续化疗6个疗 程,骨髓象正常者;男6例,女4例.平均年龄34岁 (1l一62岁),其中AML2例,ALL4例,NHL4例 3化疗方案AIJ|患者采用VDLP(长春新碱,柔红 霉素,左旋门冬酰胺酶,泼尼松),鬼臼噻吩甙+阿糖 胞苷,MA(米托蒽醌,阿糖胞苷)方案;AML患者采用 DA(柔红霉素,阿糖胞苷),HA(高三尖杉酯碱,阿糖 胞苷),MA方案;淋巴瘤患者采用CHOP(环磷酰胺, 阿霉素,长春新碱,泼尼松),CMOP(环磷酰胺,米托 蒽醌,长春新碱,泼尼松)方案. 4取材及观察项目 4.1取正常对照者和化疗患者骨髓行CFU.GM, CFU.E,BFU.E,基质细胞集落(CFU.F)培养,基质层 观察.化疗患者化疗结束15,18d,骨髓象正常后 取髓.粒,红系祖细胞培养采用甲基纤维素法. CFU.F培养在文献[2]报道的基础上有所改动,采用 古体积分数为20%FCS,l耐mlbFGF的IMDM培养 液,细胞接种浓度为1×l,ml.CFU.F计数:每皿 接种1ml,12,14d计数,40个细胞以上为1个集 落.基质层观察:25ml容积的培养瓶接种4ml,例 置显微镜下动态观察其融合程度及完全融合时间. 融合程度以覆盖率表示,即瓶表面被基质层覆盖的 百分比. 4.2长期化疗组患者再次化疗采用与前次相同的 方案,化疗结束第2天回输体外扩增的ABMSC,15, 18d后取骨髓行CFU.GM,CFU.E,BFU.E,CFU.F培 养,观察基质层. 4.3观察长期化疗组患者前后两次化疗后血常规 变化情况.外周血白细胞计数,血小板计数虽 低值及恢复到正常的时间. 5ABMSC体外扩增长期化疗组患者化疗结束2 — 3周,骨髓象恢复时,从髂后上棘多点抽取骨髓约 8oml,分离出单个核细胞,按1×l/ml置于含体积 分数为20%的FCS1rbFGF的IMDM培养液中 培养,每周半量换液,2,3周待贴壁细胞完全融合 后收集.其中2例按1:3传代,1周后融合,融合后 收集贴壁细胞. 6ABMSC收集及输注弃去培养液,细胞用IMDM 培养液清洗3遍,置于OO2孵箱中,用IMDM培养液 浸泡30min,取出,经2.5WL胰酶+0.2g/LEI)TA 消化5min,弯头吸管吹打,收集所有贴壁细胞离心 洗涤,过4号针头,计数,放人生理盐水100ml中于 化疗结束第2天静点,输前给予地塞米松2rag(壶 注),30nfin输完,回输基质细胞的数量为(1.1, 8.7)×1个.输时及输后注意观察患者的症状及 体征 7统计学分析组间比较采用不配对t检验,输注 BMSC组与未输注BMSC组之间采用配对t检验. 结果 1长期化疗对骨髓造血祖细胞和BMSC的影晌 长期化疗组CFU.GM,BFU.E,CFU.E,CFU.F显着低 于正常对照组与短期化疗组,正常对照组及短期化 疗组CFU-GMBFU.E,CFU.E,CFU-F差异无显着性 (P>0.05).基质层覆盖率及完全融合时间三组间 差异无显着性(P>0.05)(表1). 2输注ABMSC对骨髓造血祖细胞和BMSC的影响 长期化疗患者输注ABMSC后CFU.GM,BFU.E, CFU-E,CFU.F较未输注时显着升高输注与未输注 ABMSC两者间基质层覆盖率,基质层完全融合时间 差异无显着性(P>0.05)(表2). 3输注ABMSC对血常规的影响长期化疗组化疗 后输注ABMSC者其血常规中白细胞计数及血小板 计数降至最低点值明显高于化疗后未输注ABMSC 时,白细胞计数,血小板计数恢复至正常的时间也明 显缩短(表3). 表1化疗对骨髓造血祖细胞和BMSC的影响(it) 注:与长期化疗组相比*P<Ool;#P<0.o5 中华血棱学杂志2fl01年7月第恐鞋第7期cn 裹2输注ABMSC对长期化疗患者骨髓造血祖细胞和BMSC的影响(?) 注:与轴注AB~SC组相比.*P'0OI;?P(0,001;P'0.05 寰3输注ABMSC对长期化疗患者血常规的影响(?) 注:与轴注AB~SC组相比.*P'0.OI;#P(0.1301 讨论 治疗造血及非造血系统肿瘤采用的标准剂量化 疗及大剂量放,化疗可导致短暂或永久性造血和基 质祖细胞成分的损害.本实验中,患者接受短期 化疗后,并未显示出粒,红系祖细胞及基质祖细胞数 的明显减少,说明经短期标准剂量化疗后,患者经过 骨髓抑制期,通过造血干,祖细胞增殖,分化,骨髓造 血恢复正常;同时基质桓细胞从静止期进入增殖期, 通过增殖,分化,使造血微环境恢复正常.而长期化 疗患者的粒,红系祖细胞及基质祖细胞数显着低于 正常人及短期化疗患者,说明化疗药物的反复毒性 作用可对骨髓造血及造血微环境造成明显损害.这 种细胞毒药物的累积作用可导致造血微环境,造血 功能的长期甚至永久性损害,还可影响到骨髓移植 或外周血干细胞移植后的造血重建. 在本实验中,我们并未发现长期化疗对基质祖 细胞形成基质融合层有影响.说明尽管长期化疗可 造成基质祖细胞量的减少,但尚不足以造成基质融 合功能的损害.基于此,我们采取体外扩增技术,使 基质祖细胞得到大量扩增,于化疗后回输给患者. 通过自身前后对比可见,输注体外扩增的ABMSC后 较未输注时,粒,红系祖细胞及基质祖细胞显着升 高,外周血白细胞,血小板计效降至最低点的值显着 升高,白细胞,血小板计效恢复正常的时间明显缩 短.说明输注BMSC缩短了骨髓抑制期,促进了造 血的恢复. 最近,Koe等给予进展期乳腺癌患者大剂量 化疗后混输自体外周血干细胞与体外扩增的BMSC, 输注的基质细胞量为(1.0—2.2)xl,kg,结果有效 地促进了造血恢复,尤其血小板恢复加快.我们培 养的BMSC与Koe等培养的BMSC在形态上无差异, 均为梭形,多角形成纤维样细胞.经扩增后可密集 融合戚片,其问仅夹杂很少量圆形细胞,经传代后可 获得均一的成纤维样细胞.我们在培养中加用了 bFcF,结果显示加bFGF后可显着促进基质祖细胞 生长.我们建立的培养体系能在3—4周内产生1.1 ×1以上的BMSC,明显提高了临床应用价值.收 集前去除FCS,10例患者单纯输注一代或二代 BMSC,输注总量达(1.1—8.7)×l个,输注后无不 良反应.赵杰等将ABMSC及其培养上清液输注 给化疗后患者,观察到加用上清液亦可促进其造血 功能的恢复. 综上所述,自体基质祖细胞可以被分离并迅速, 大量地扩增,输注给化疗后患者,能够加速造血恢 复. 参考文蕾 I剂秀珍,主缠.遣血袒jl臆培养技术实验手册第1版北京:北 京出版社,1993.'40-lOO 2张鸿来,刘及.人骨蕾成纤维细胞集落形成培养方法的研究.白 求恩医科大学.19蠲.14:2l1-213. 3OCD,N,VatquegL,d.Hd凹lto PBSC'T越lditsirrflnealceOI1bemm叩.izeswe~峨?, 1999.84:5lI-516. 4KoeON,G舯SL,GBW,dR叩homtopolefi,eizeswe~ .0ofmt,degem-blootlstemcells.rodmmar- 1wm?日h吐舢edh_}?IMvastczmcerp出蛆med~ing d呻ed吲幔唧.JClinOncol,2000,18:307-316. 5赵杰,暑永#,姚程.自悻骨蕾蓦质细胞轴洼促进化疗后造血功 能的恢复.中华内科杂志.1997,36:550-551. (收藕日期:2txD..o6-t~) (校对:王叶青)
/
本文档为【化疗对造血微环境的影响及化疗后回输自体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。 本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。 网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。

历史搜索

    清空历史搜索