五酯胶囊甘利欣胶囊对拉米夫定片药物动力学影响的研究（可编辑）

五酯胶囊甘利欣胶囊对拉米夫定片药物动力学影响的研究（可编辑） 中南大学 硕士学位论文 五酯胶囊/甘利欣胶囊对拉米夫定片药物动力学影响的研究 姓名:黄琪 申请学位级别:硕士 专业:药理学 指导教师:刘世坤 20070501中文摘要 五酯胶囊/甘利欣胶囊对拉米夫定片 药物动力学影响的研究 摘要 一、目的 研究五酯胶囊或甘利欣胶囊对拉米夫定片的人体药动学是否具有 影响,为临床合理用药提供参考。通过动物实验对药动学影响的机制做 初步探讨。 二、方法 采用随机、三周期拉丁方交叉试验,洗脱期天。名健康受 试者按男女分别进行拉丁方,分别先后服用甘利欣胶囊粒、五 酯胶囊粒串或空白胶囊粒::天,并于第天同时服拉 米夫定片。于服用拉米夫定前后,.,.,.,,.,, ,,,, ,,. 肘静脉采血。利用.法测 定拉米夫定的血药浓度,计算拉米夫定药动学参数,并比较三个周期的 药动学参数差异。 只大鼠随机分为组,用高、中、低不同浓度五酯胶囊混悬液和 生理盐水灌胃天干预后,在大鼠在体肠内灌流拉米夫定,于,, ,,,,,,,从灌流液中取样,并用 法测定拉米夫定的浓度,计算小肠对拉米夫定的吸收量、吸收速率常数 以及相对吸收百分率并比较四组的差异。 三、结果 .健康受试者拉米夫定单次给药药动学参数 :.. ,:.?. :~,彳~:.? ?一。 . , /:.?.~,/:.?. .五酯胶囊和甘利欣胶囊对拉米夫定的药动学相互影响 五酯胶囊对拉米夫定药动学的影响 拉米夫定的药动学参数明显缩短.,而嗽、/、 、/与单独服用拉米夫定组相比没有显著性变化.。 ?硕.学位论文 中文摘要 甘利欣胶囊对拉米夫定药动学的影响 与单独服用拉米夫定组相比,拉米夫定的药动学参数戤、。、/、 彳伙、己伊均没有显著性变化.。 .五酯胶囊对大鼠在体肠吸收拉米夫定的影响 在灌流药物浓度在?。的情况下,大鼠全小肠段小时内平 均吸收拉米夫定的量为..,平均吸收率为..%,吸收 速率常数为×。 高、低浓度两种不同浓度的五酯胶囊组较空白对照组拉米夫定绝对 吸收量和吸收百分率有所增多,但经过统计分析后显示没有显著性差异 .。 四、结论 .’中国健康男女受试者拉米夫定单次给药药动学参数与国外文献报 道相似。 . 中国健康男女受试者合用甘利欣胶囊,对拉米夫定的单次给药药 动学参数无影响,提示从药动学角度上来说临床可以安全合用; 合用五酯胶囊后显著缩短拉米夫定‰,对、,/、.。:、 /没有显著性影响,提示五酯胶囊可以加速拉米夫定的吸收过 程。 . 五酯胶囊加快拉米夫定吸收的机制不能肯定是五酯胶囊增加小肠 对拉米夫定吸收的通透性。 关键词: 五酯胶囊,甘利欣胶囊,拉米夫定,药动学,药物合用英文摘要 硕七学位论文 ? ? ? ? ,. . . , ., , . .,.,.,,.,. ,,,,,,,,. .. . ,.,./. 英文摘要 硕士学位论文 .::.. ,觚:.. ?一,彳明‰: .. ,/:.. .~:,/:.?. 乃.. 。 . .、/、 ,】., 么艮、/ .. , ‰小孙/、 艮 、/、 .. .“?~,. . 一。 , ..%,, .. . ? . . 英文摘要 硕士学位论文 , . 甜 ,艮 ”,/、 / ’ . .’ ’.:, , , ,, 硕二学位论文 副舌 月吾 随着医学“回归自然’’的潮流,中药以其确切的疗效逐渐被西方国家接受, 中 西药联用治疗应用于临床已成为广泛存在的现实,与之而来有关于中西药联 用产生 相互作用的报道也逐渐增多,尤其是中西药联用后引起毒副作用的报道引起医药界 广泛重视。中药与西药一样,只要多种药物合用,就有发生相互作用的可能,其相 互作用可以发生在药动学和药效学的各个环节。 乙肝是临床上的多见病,据中国疾控中心调查,从年到年,我国乙 肝的发病率呈持续上升趋势,报告病例数从年的.万例上升到年的. 万。大量的研究表明【卜,慢性肝病的病死率和肝癌发病率的危险与乙肝病毒的持续 复制有关,抑制病毒复制是疾病进展延缓、减少和停止的关键所在。亚太肝脏研究协 会就把清除和持久抑制复制作为治疗的首要目标】。目前,针对乙肝治疗还没 有特效药,中西药结合治疗乙肝取得的疗效引起广泛关注。临床上常以国际上公认 抗病毒药物如干扰素、核苷类似物拉米夫丁、阿德福韦酯、恩替卡韦治疗为主【】, 辅以降酶、抗病毒、调节免疫、抗纤维化等不同作用的中药或中成药联合治疗。其 中常用降酶的药物有五味子、甘草酸二胺等;抗病毒药有柴胡、栀子、鱼腥草、板 蓝根、蒲公英等;调节免疫的药物有黄芪、党参、冬虫夏草等;抗纤维化有丹参、 三七、桃仁、当归等【】。中药以其毒性低、药物不良反应低等特点,受到广大患者 和临床医师的信赖。在临床上联合用药的情况比较普遍,但是药物合用时中药是否 对抗病毒药物产生药动学影响无人研究。 五酯胶囊是慢性、迁延性肝炎谷丙转氨酶升高者降低血清谷丙转氨酶的常用中 成药,为华中五味子的醇浸膏胶囊,主要有效成分是五味子甲素。甘利欣胶囊是甘 草中提取的有效成分甘草酸二铵,具有较强的抗炎、保护肝细胞及改善肝功能作用。 五酯胶囊和甘利欣胶囊大量临床试验表吲?】,能有效的降低转氨酶,临床上常与其 他的抗病毒药物联合用药,广泛应用于慢性乙型肝炎的治疗。 众所周知,中药的成分复杂,作用靶点多,而且多数中药的药物代谢机制、作 用机理还不清楚,这方面的研究还不完善。甘草素有“能调和百药之说,就反映 了中药的作用机理复杂,目前,关于五味子和甘草对其他药物的药动学的影响研究 主要集中在对药物代谢酶的诱导作用方面,尤其是诱导肝药酶】;而对于药硕学位论文 前言 物吸收、分布或排泄等其他药物动力学环节影响的研究和报道不多。【】等 研究发 现五味子乙素能改变四种过度表达.的细胞系人红白血病/、人乳腺癌 细胞/、人表皮样癌和/的特征,认为五味子乙素是 .的潜在抑制剂。 拉米夫定,系核苷类似物。目前临床上主要用于适用于伴有丙 氨酸氨基转移酶升高和病毒活动复制的,肝功能代偿的成年慢性乙型肝炎病 人的治 疗。其作用机理为在细胞内磷酸化,成为拉米夫定三磷酸盐~并以环腺苷磷 酸形式通过乙型肝炎病毒多聚酶嵌入到病毒中,导致链合成中 止。 拉米夫定的临床研究试验表明:口服吸收迅速,锄“约为 。单次给药口服 拉米夫定片,生物利用度为%%。体外研究显示拉米夫定与血清白蛋白结合 率%~%,平均表观分布容积..一。国外研究报道【】,单次口服拉米夫定 、.。分别为.士. ,双、/、 、.士.?~、 .士.、..??~、. 士.??~。国内报道仅/有差别,为. 。 ?. ,较国外文献稍长,其他药物动力学参数相似【 拉米夫定主要以药物原型经肾脏排泄,肾脏排泄约占总清除量的%左右,仅 %~%被代谢成反式硫氧化物的衍生物。拉米夫定主要是以活性有机阳离子的 形 式清除.在与具有相同排泄机制的药物同时使用时,特别是当该药物的主要清除途 径是通过有机阳离子转运系统的主动肾脏分泌时,应考虑其相互作用。已有的药物 相互作用研究显示:三甲氧苄氨嘧啶、磺胺甲嚼唑可使拉米夫定的暴露量增加%。 在对拉米夫定上市后的临床观察中发现比较多的不良反应有肝脏脂肪变性、过 敏反应、横纹肌溶解,哮喘、甲沟炎、椎体外系反应等怕。曾有报道表明【,拉 米夫定的抗乙肝病毒量效关系在口服剂量约/次左右达到效能,口服拉米夫定 超过/次以上时,不良反应的发生率增加。上述不良反应的发生,尤其是横纹 肌的溶解、哮喘以及肝脏脂肪变性是临床上很严重的不良反应。五酯胶囊或甘利欣 胶囊常用于转氨酶增高的肝病患者,而临床上伴有转氨酶增高的乙肝患者是拉米夫 定抗病毒的较好时期,因此临床上常把五酯胶囊或甘利欣胶囊等降酶药与拉米夫定 合用,且拉米夫丁口服剂量一般为/次/日。五酯胶囊或甘利欣胶囊与拉米夫定 合用,这两种中药合用是否会影响拉米夫定的药动学参数,因而导致不良反 应发生 率的增高,尚无人研究。 硕:学位论文 前言 故本课题选择了五酯胶囊和甘利欣胶囊对拉米夫定药物动力学影响进行研究, 一方面通过研究五味子或甘草酸与拉米夫定合用在药动学上是否合理,为临床用药 提供实验室依据;另一方面尝试创建一种实验方法,来研究中西药联合用药后中药 对西药化学药物药动学的影响,为中药更多的进入临床,扩大中西药物的合理 用药提供依据。 符号说明 硕:学位论文 本文所用英文缩写词表 中文全称 缩写 英文或拉丁文全称 每日三次 每日两次 细胞色素细胞色素酶 ” 曲 .高效液相色谱.紫外检测 彳 血药浓度一时间曲线下面积 ~ 血药浓度一时间曲线下面积 血药峰浓度 锄似 甜 达峰时间 半衰期速率常数 ‘抽。 生物利用度校正的表观分布容积 ??。、?”。’?。。。 平均滞留时间 波动度 生物利用度校正的清除率 , 相关系数 相对偏差 酸碱度 多药耐药阿霉素 ? 拉米夫定三磷酸盐符号说明 硕:学位论文 英文全称 中文全称 缩写 糖蛋白 ? 标准差 乙型肝炎病毒 脱氧核糖核酸 社会科学统计软件包 硕:学位论文 声明 原创性声明 本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取馒的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的 地方外,论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包 含获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同 工作的同志对本研究所作的贡献均已在本论文中作了明确的说明。 作者签名: 壹丛 日期: 垫年 关于学位论文使用授权说明 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有 权保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论 文的全部或部分内容,可以采用复印、缩影或其他手段保存学位论文; 学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。 期: 兰:年?月硕士学位论文 .测定人血浆中拉米犬定的浓度 论文正文 第一部分 测定人血浆中拉米夫定的浓度 拉米夫定,,化学名为:.顺式..氨基..一羟甲基.,.氧硫 杂环戊一一基.一嘧啶..酮。为核苷类似物,可在细胞内磷酸化,成为拉米夫 定三磷 酸盐.,并以环腺苷磷酸形式通过乙型肝炎病毒多聚酶嵌入到病毒中, 导致链合成中止。主要用于治疗伴有丙氨酸转移酶升高和病毒复制的、肝功 能 代偿的成人慢性乙型肝炎。国内外已有拉米夫定血药浓度测定的报道【,本 文结 合国内外文献建立了.法,简化了血样处理的步骤,测定人体内血浆中拉 米夫定的浓度。/ 帅 臼 图拉米夫定的化学结构 仪器及材料 .仪器 岛津.高效液相色谱仪二元泵,二极管阵列检测器,自动进样器,柱 冷冻变速离心机,.低速自动平衡 温箱,.色谱工作站, 离心机,电子分析天平,一型超声清洗器,涡旋器混 合器。 .试剂与药品 拉米夫定对照品 ..,.,纯度.%;甲醇色 谱纯,美国公司;磷酸二氢钾、高氯酸为分析纯;水为二次蒸馏水。.测定人血 浆中拉米犬定的浓度 硕一:学位论文 .溶液的配制 精密称取拉米夫定对照品适量于容量瓶中,用水:甲醇:溶解并定容至刻 度,配制成浓度为?。的拉米夫定储备液。置于?冰箱保存,需要时用水: 甲醇:将其稀释成相应浓度。 试验方法 .色谱条件 . 色谱柱: 。柱 ,?,序号为;保护柱: 。柱;柱温:?;流动相: ?一磷酸二氢钾:甲醇:;流 速:. ?一;检测波长 ;进样量:此。 .血样处理 血样经离心后取上清液,置于 管中,加入%高氯酸,涡 旋 ,?。高速离心 ,取上清进样此。 结果 .色谱图 在该试验条件下,空白血浆、口服甘利欣或五酯胶囊,空白血浆加拉米夫定对 照 品、受试者服药后血浆供试品色谱图见图.。拉米夫定的色谱峰形良好,保留 时间 为. ,血浆中内源性物质以及合用的中药肝利欣与五酯胶囊不干扰样品的分 离 测定。 硕十学位论文 .测定人血浆中拉米夫定的浓度 兰 .测定人血浆中拉米犬定的浓度 硕上学位论文 图色谱图 :拉米夫定; :空白血浆;:服五酯胶囊血浆;:服甘利欣胶囊血浆; :空白血浆拉米夫定;:受试者服拉米夫定后实际血样 .线性关系考察 用空白血浆将拉米夫定标准溶液 .?。配制成不同浓度,, ,,,,, ?‘的标准液,余照“血样处理”项下操作,拉 米夫定峰面积。以拉米夫定的峰面积舯与浓度进行线性回归,得回归方程 为..,. ,,结果表明:拉米夫定在~ ?‘ 范围为线形良好图,定量下限为 ?~。 拉米夫定标准曲线 硕十学位论文 .测定人血浆中拉米夫定的浓度 .回收率与精密度的考察 空白血浆中加入适量的拉米夫定溶液,配成低、中、高三个浓度、、 ‘。的质控血浆各份,按“血样处理”项下操作,并进样测定,记录拉米夫定 峰面积;另取拉米夫定溶液适量,用流动相配成同样浓度的对照品溶液,取此 进样,记录其峰面积 ,计算~ 的值,作为萃取回收率的考察指标。将代 入标准曲线,求出拉米夫定的浓度,将实测浓度与己知加入浓度相比,得方法 回收 率。 同样配制低、中、高三个浓度、、 。。的质控血浆,按“血样处 理”项下操作,每个浓度做份,日内连续进样,求算各实测浓度的日内;每日 每个浓度做份,连续重复做,求算日间作为精密度考察指标。结果表 .显示拉米夫定的萃取回收率稳定,方法回收率在%.%之间,日内与日间 尼伙%,符合方法学要求。 表卜 回收率和精密度考察,士 .血样室温放置稳定性考察 空白血浆中加入适量的拉米夫定溶液使其浓度为 一,置于室温下,分别 于、、、、 取样,按“血样处理”项下操作,测定其浓度,求得为. 内稳定。 %,表.。结果表明:拉米夫定血样室温下存放 表血样室温放置稳定性 浓度 放置时间//. . . . . . . . .硕学位论文 ?测定人血浆中拉米夫定的浓度 .血样反复冻融稳定性考察 空白血浆中加入适量的拉米夫定溶液使其浓度为 ?一,置于.冰箱中 保存,取上述血样反复冻融次,每次融化后,按“血样处理”项下操作,测定其 浓度,求得脚为.%,表卜。结果表明:拉米夫定血样反复冻融次以内稳 定。 表血样反复冻融稳定性 浓度 冻融次数/次 。血样长期冻存稳定性考察 空白血浆中加入适量的拉米夫定溶液使其浓度为 ?~,置于.?冰箱中保 存,分别于、、、、取出,按“血样处理”项下操作,测定其浓度,求 得为.%,表卜。结果表明:拉米夫定血样冻存内稳定。 表血样长期冻存稳定性 浓度 冻存天数/天 /。一???????了?‘?了 % . . . . . . . . . 讨论 . 国内外关于拉米夫定血药浓度测定的报道多是.抛法。结合本实验 室条件,决定选用.法测定血浆中拉米夫定的浓度。 .在血浆样品预处理方面,采用操作简便的高氯酸沉淀法。国外文献【】中有选用 液液萃取法,最低检测浓度为 ?。国内文献【】利用固相萃取法能测到 一,但考虑到固相萃取法操作复杂,费用昂贵,故考察用甲醇、乙腈、高氯酸 沉淀蛋白,甲醇沉淀虽然杂质很少,但仅能测到?~,不能满足低浓度测定 的要求,高氯酸沉淀法能测到?~,故最后决定用高氯酸沉淀法。 硕士学位论文 .测定人血浆中拉米夫定的浓度 .流动相选择方面考察了乙腈和甲醇对拉米夫定测定的影响,发现乙腈不能使杂 ,质与药物峰分离。使用磷酸盐缓冲液和甲醇作为流动相时,调值不能很好的将杂 质干扰减小,将甲醇比例从%减小到%发现血浆杂质与药物峰分离良好,适于低 浓度拉米夫定的测定。但是在测定结束时,发现柱压升高、柱效明显下降,考虑水 相的比例过高,可能导致柱内塔板塌陷。建议以后用%水相柱,如 .高耐水色谱柱。 .扫描图谱,确定最大吸收波长为 ,所以本法选定作为检测波长。 .拉米夫定在酸性条件下超过小时后不稳定,所以在处理样品后应及时进样。 结论 该方法简单,快速,准确,灵敏,适用于临床拉米夫定血药浓度监测、药动学 及药物相互作用的研究;由于水相比例过高对普通色谱柱的损耗太大,建议选择 %水相柱。 五酯胶囊和?利欣胶囊对拉米夫定人体内单次给药药动学影响 硕士学位论文 第二部分 论文正文 五酯胶囊/甘利欣胶囊对拉米夫定人体内单次给药药动学影响 目前临床治疗肝炎中往往采取中西药结合治疗,在慢性乙肝中尤为普遍。虽有 些合用取得一定的疗效,但是,由于目前治疗肝病的中药种类繁多,作用机制未完 全明确,有的中药合用时非但不能对疾病产生积极作用,反而改变西药的原有药动 学参数,加重肝脏的负担,产生药害,甚至可能影响其他药物的作用。药物在肝病 治疗过程中尤其是中西药药物合用相互影响方面缺乏实验室依据作为指导。 拉米夫定是临床上为数不多的几个治疗乙型肝炎的药物之一。 主要用于治疗伴有丙氨酸氨基转移酶升高和病毒活动复制的肝功能代偿的成年慢性 乙型肝炎。 拉米夫定主要以药物原型经肾脏排泄,肾脏排泄约占总清除量的%左右,仅 %~%被代谢成反式硫氧化物的衍生物。国外研究报道【】单次口服拉米夫定 ,射时/、‰、.。分别为.. 、..?~、 ..、.. ,??~、...??~,目前缺乏与中药合用时的药动 学研究。 五酯胶囊的成分是五味子醇浸膏。五味子在肝病中的作用主要有降低谷丙转氨 酶,减轻中毒致病因子对肝细胞线粒体和溶酶体的破坏,减轻肝脂肪变性,调节免 疫等。五味子对谷丙转氨酶没有直接灭活作用,但是可明显降低谷丙转氨酶的活性, 由于对乙肝表面抗原阳性者效果差,停药后反跳,故认为五味子为可逆性地抑制谷 丙转氨酶。 甘利欣胶囊的主要成分是甘草酸二铵,具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善 肝功能的作用。甘利欣能保护肝细胞膜结构,稳定溶酶体,抑制肝脏对皮质激素的 还原代谢,显示糖皮质激素样作用,从而减轻肝细胞充血、水肿和坏死。 治疗乙肝的关键是抑制病毒复制。拉米夫定主要是治疗伴有丙氨酸氨基转移酶 升高和病毒活动复制的慢性乙肝,拉米夫定的抗乙肝病毒量效关系在口服剂量约 /次左右达到效能,口服拉米夫定超过/次以上时,肝脏脂肪变性等严重, 不良反应的发生率明显增加【。五酯胶囊和甘利欣胶囊的主要作用为降低转氨酶, 对病毒复制虽没有直接的作用,由于其显著的降酶护肝功效,故临床常作为辅硕士学位论文 五酯胶囊和。利欣胶囊对拉米大定人体内单次给药药动学影响 助用药与抗病毒的药物合用。五酯胶囊或甘利欣胶囊与拉米夫定合用在药代动力学 上对拉米夫定有何影响目前还没有实验研究。 本试验以健康受试者为对象,采用随机三周期拉丁方交叉试验设计,研究在口 服五酯胶囊或甘利欣胶囊后,拉米夫定的药动学参数变化,为临床给药的制定 和中西联合用药合理应用提供药动学依据。由于拉米夫定代谢低,所以本课题研究 拉米夫定的药动学,未涉及其代谢物的药动学。 仪器及材料 .仪器 岛津?高效液相色谱仪二元泵,二极管阵列检测器,自动进样器,柱 冷冻变速离心机,.低速自动平衡 温箱,.色谱工作站, 离心机,电子分析天平,一型超声清洗器,涡旋器混 合器。 .试剂与药品 拉米夫定对照品 ..,.,纯度.%;拉米夫 定片商品名:贺普丁,葛兰素史克苏州有限公司,规格 /粒,批号; 五酯胶囊四川禾正制药有限公司,含五味子甲素./片,批号 ;甘利欣胶囊江苏正大天晴药业股份有限公司,规格/粒,批 号:;空白胶囊药学院自制。 甲醇色谱纯,美国公司;磷酸二氢钾、高氯酸为分析纯;水为二次蒸 馏水。 试验对象和方法 .试验对象 。名健康受试者,男女各半,均为中南大学湘雅医学院在校学生,年龄 ,体重: 岁,身高士 ,经检查血、尿常规,肝、肾功能,心电图等均 正常,无消化道、精神神经等疾病病史,无药物过敏史和药物依赖史,近未服 用过任何药物,最近三个月内未献过血或作为受试者被采样,试验期间禁食 烟、酒、 茶、咖啡等,不得服用其它非试验药物。本人签署书面知情同意书。试验方案经中 南大学湘雅三医院伦理委员会批准。 五酯胶囊和汁利欣胶囊对拉米大定人体内单次给药药动学影响 硕上学位论文 .试验方案 ..给药方案 本试验采用随机、三周期拉丁方交叉设计,洗脱期为。名受试者男女分 别进行拉丁方交叉,表?,分别按方案、和服药表.。 表受试者随机分组表 :甘利欣 :五脂胶囊 :空白胶囊 :拉米夫定 ..不良反应 硕上学位论文 五酯胶囊和。利欣胶囊对拉米夫定人体内单次给药药动学影响 注意观察可能发生的药物不良反应,如头晕、恶心、呕吐、腹胀、头痛、荨麻 疹、肌痛等不良反应。 ..取血方法和保存 周期内第天拉米夫定服药前和服药后.,.,.,,.,,, , ,,, ,. 由肘静脉取血 置肝素化离心管中,立 即离心,分离血浆,置.?保存待测。 .血药浓度测定方法 法测定拉米夫定的血药浓度. 采用 。柱 , :保护柱: ,序号为 ?磷酸二氢钾:甲醇:; 柱;柱温:;流动相: 流速:. ~;检测波长 ;样品处理:血浆样品经%高氯酸沉淀蛋白, 外标法定量。拉米夫定在. ?。范围内线性良好.,最低检测 浓度为 ?~,萃取回收率稳定,方法回收率在%一%之间,日内与日间 %, .参数计算 采用 .统计软件包计算拉米夫定三个周期的药动学参数,获得统计矩参 数。其中础以梯形面积法求得,‰。以彳‰。憾求得,丘即以药 时曲线消除相?点血药浓度的对数对相应时间进行线性回归后的最佳斜率乘 以 ,/以/ .求得,./。;戤、均用实测值,/齐量/求算。 .统计学处理 采用.统计软件包,文中药代动力学参数均值皆采用算术平均数?标准 偏差?或算术平均数范围表示;合用和单用差异比较,采用多因素的 方差分析,以处理因素、个体因素、性别因素及周期因素为混杂因素,.认为 硕士学位论文 五酯胶囊和甘利欣胶囊对拉米夫定人体内单次给药药动学影响 有显著性差异。 对合用后药动学参数改变显著性差异的进行多个样本的两两比较.检验。 结果 .不良反应 名受试者参加试验,均顺利完成三周期试验,受试者基本无不良反应发生, 只有例受试者口服五酯胶囊时出现了腹胀和轻微腹泻,未经过特殊处理,停 药后 消失。 .拉米夫定单独给药药动学 名受试者服用空白胶囊后口服拉米夫定的药物动力学,在服用拉米夫定前和 后各时间点测得相应拉米夫定的血药浓度,绘制药时曲线图?,并计算相关药 动学参数表?,附表。 图合用五酯胶囊/甘利欣胶囊前后。拉米夫定血一时曲线比较硕士学位论文 五酯胶囊和甘利欣胶囊对拉米犬定人体内单次给药药动学影响 .?. .?. .?. . 。,,‘“ .. .. .?. . .,?”.. .. .. 气 .。‘叫.?. .. .. . ,’ .. .. 气 .. 厶笙 .?. .?. .?.表个体、性别、周期因素对拉米夫定药动学的影响 影响因素 参数 个体值 性别值 周期值 . . . 。,。?。. . . .?。 . . . .。。。 . . . . /. , 』 “ .】 . . .五酯胶囊或甘利欣胶囊对拉米夫定药动学参数的影响 与单独服用拉米夫定组比较,合用五酯胶囊和甘利欣胶囊后:拉米夫定的药 动 学参数经统计分析,结果表明:三者之间的。。、。?、/、均没有显著性 变化,三者之间的乙。,明显缩短.。经过多相关样本两两比较的口检验,认为 合用甘利欣胶囊与单用拉米夫定的乙。。两两比较之间无明显差别,而合用五 酯胶囊与 单用拉米夫定的乙。两两比较之间有差别,见表?,图?。 合用五酯胶囊/甘利欣胶囊前后,.小时内药一时曲线 硕上学位论文 五酯胶囊和忖利欣胶囊对拉米火定人体内单次给药药动学影响 图舍用五酯胶囊/甘利欣胶囊前后,受试者拉米夫定乙。频数分布 :拉米夫定,:拉米夫定肝利欣,:拉米夫定五酯胶囊 讨论 .拉米夫定单次给药药动学参数 单次:服拉米夫定,所获得的药动学参数和国外报道【单次给药服用拉 米夫定的药动学参数基本一致,与国内报道的药动学参数半衰期相差较大,其他基 本一致,考虑可能与计算半衰期的时间点不同有关。国外计算半衰期的时间为~ ,国内计算半衰期的时间为 ,故国内报道的半衰期时间比国外报道的半衰期 时间长。本试验因服药后 的药物浓度仅部分能测出,故统一选择 的药物 一 浓度计算半衰期,与国外报道的方法一致,结果也相似。 .影响药动学因素 药物在药动学方面的相互作用包括药物的吸收、分布、代谢和排泄四个环节【, 研究五酯胶囊和甘利欣胶囊对拉米夫定片的药动学影响应从这四个环节考虑。首先, 从拉米夫定的药动学特征来看,拉米夫定血浆蛋白结合率低,体外研究显示拉米夫 定与血清白蛋白结合率%~%,主要以原型药物经。肾脏排出体外,仅~%经 肝脏代谢成转硫代谢物,所以拉米夫定与其代谢物之间发生相互作用的可能性小, 在分布和代谢环节受其他药物的影响作用也很小。吸收和排泄环节为研究影响拉米 夫定药动学的侧重点。 药物在吸收环节的相互作用主要有以下几种【】:一离子的作用:如含二价 硕一学位论文 五酯胶囊和叶利欣胶囊对拉米犬定人体内单次给药药动学影响 或三价金属离子的化合物、考来烯胺等可以与某些药物结合,影响药物的吸收。二 的影响:影响药物的解离度而影响吸收。三食物的影响:一般情况下食物 减少药物的吸收,有的药物在进食情况下吸收增加。四吸附作用:如白陶土、活 性炭能吸附药物减少它们的吸收。活性炭还可以通过阻断肠肝循环,降低己吸收入 血的药物的血药浓度。五胃肠运动的影响:胃排空的速度能影响药物到达小肠部 位的时间,因而能影响主要在小肠吸收的药物出现作用的快慢。六削弱肠吸收机 能:如新霉素、对氨水杨酸和环磷酰胺等能损害肠粘膜的吸收机能,引起吸收不良。 七一糖蛋白,?:?是在研究肿瘤化疗过程中肿瘤细胞对 多种药物产生的耐药性时发现的。主要功能是抑制药物在胃肠道、组织、细胞中的 吸收,因此又称 ,存在多态性。 拉米夫定主要以活性有机阳离子的形式清除,具有相同排泄机制的药物同时服 用可影响其排泄。如拉米夫定与三甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑同时服用后,使拉米夫 定的暴露量增加%。 . 五酯胶囊或甘利欣胶囊对拉米夫定片药动学的影响 甘利欣胶囊对拉米夫定的药动学无影响,试验结果表明:各药动学参数均未发 生显著性变化。首先考虑为甘利欣胶囊不影响拉米夫定的吸收,因为拉米夫定的如耐 和%删没发生显著改变;其次/没有改变,推测甘利欣胶囊也未影响拉米夫定的 排泄。 五酯胶囊对拉米夫定的药动学影响主要表现在‰似的缩短上,说明五酯胶囊能 提高拉米夫定吸收的速率;而锄烈无明显变化,可能因为拉米夫定口服本身吸收比 较完全,生物利用度~%。虽然五酯胶囊为酸性的中药,但是值改变主要是 通过影响药物解离度对药物吸收产生影响,而拉米夫定为核苷类似物,进入细胞后 才磷酸化,成为拉米夫定三磷酸盐,所以考虑值对拉米夫定吸收的影响不大;五 味子是否直接影响胃肠蠕动没有文献报道,曾有国内文献报道【 ,在治疗肠易激综 合症治疗的药方中有五味子;但是有两位受试者服用五酯胶囊时有腹泻的症状,停 药后消失,所以五味子对胃肠蠕动的影响很难明确;?主要功能是抑制药物在胃 肠道:组织、细胞中的吸收,当.受到抑制时,药物吸收可增加。虽然有研究推 断五味子乙素是.的潜在抑制剂,但五酯胶囊是否通过抑制肠道?达到促进 拉米夫定吸收,还需要进一步实验证实。可以进一步做在体肠灌流实验,排除值 和胃肠蠕动的影响,以考察五酯胶囊是否仍对拉米夫定的吸收有影响。 拉米夫定主要是以活性有机阳离子的形式清除,当合用药物的主要清除途径也 是通过有机阳离子转运系统的主动肾脏分泌时,才可能产生相互作用。五酯胶囊和五酯胶囊和廿利欣胶囊对拉米犬定人体内单次给药药动学影响 硕上学位论文 甘利欣胶囊未改变拉米夫定的排泄,说明两药的排泄机制非活性有机阳离子 形式清 除。 临床合用的安全性评估,合用甘利欣胶囊,对拉米夫定的单次给药药动学参数 无影响,提示从药动学角度上来说临床可以安全使用:合用五酯胶囊后显著缩短拉 米夫定‰“,对孙协驮、/没有显著性影响,提示五酯胶囊可以加 速拉米夫定的吸收过程。 结论 . 中国健康受试者拉米夫定单次给药药动学参数与国外文献报道相似。 .甘利欣胶囊对拉米夫定单次给药的药动学参数无影响。 .五酯胶囊能缩短拉米夫定的达峰时间,说明对拉米夫定的吸收有促进作用。 .五酯胶囊和肝利欣胶囊对常规口服剂量拉米夫定的血药浓度影响不大,与拉米 夫定合用不增加拉米夫定发生不良反应的危险,临床上可较安全的合用。 .考察五酯胶囊对拉米夫定的吸收的影响机制,有待进一步做在体肠灌流实验, 排除值和胃肠蠕动的影响。 五酯胶囊对大鼠在体肠吸收拉米夫定的影响 硕士学位论文 第三部分 论文正文 五酯胶囊对大鼠在体肠吸收拉米夫定的影响 在第二部分的实验结果中,五酯胶囊可缩短拉米夫定的‰“,说明五酯胶囊能提高 拉米夫定的吸收速率。导致‰甜缩短的原因有单位时间内药物的吸收量增多或胃蠕动增 强,使药物进入小肠的时间缩短。为探讨五酯胶囊促进拉米夫定吸收的机制,参考有关 文献‘?,采用大鼠在体肠循环方法,排除值和胃肠蠕动的干扰,以不同浓度的五 酯胶囊灌肠液预处理后对拉米夫定的小肠吸收进行研究。 仪器与材料 .仪器与动物 恒速泵湘雅二医院药剂科提供,恒温水浴箱为上海实验仪器厂,岛津.高效 液相色谱仪二元泵,二极管阵列检测器,自动进样器,柱温箱,.色谱工作站,, 冷冻变速离,机, 电子分析天平。大鼠为雄性,一 ,湖南农业大学实验动物学部提供。 .药品与试剂 拉米夫定对照品 ..,.,纯度.%;拉米夫定 片商品名:贺普丁,葛兰素史克苏州有限公司,规格 :/粒,批号; 五酯胶囊四川禾正制药有限责任公司,含五味子甲素./片,批号。 甲醇色谱纯,美国公司;酚红及配制氏液的试剂均为分析纯;水为二 次蒸馏水。 试验方法 .给药方案 本试验采用完全随机分组设计,只大鼠随机分为组,对照组予以生理盐水、其 他三组分别按低含五味子甲素./、中含五味子甲素./、高含 五味子甲素./浓度五酯胶囊混悬液灌胃/次,次/天,共天,试验前禁 食不禁水过夜。五酯胶囊混悬液的浓度根据体型系数换算‘,大鼠所用药量 大约为 人体用药量的%%。中浓度为直接换算量,高浓度为中浓度的两倍,低浓度为中 五酯胶囊对人鼠在体肠吸收拉米夫定的影响 硕七学位论文 浓度的/。 .肠循环液中拉米夫定的含量测定 采用 . 柱 , ,序号为;岛津.高效 液相色谱仪二元泵,二极管阵列检测器,自动进样器,柱温箱,.色谱工作站; 柱温:?;流动相:水:甲醇:乙腈::;流速:. ?一;紫外检测波长 ;样品处理:肠循环液经高速离心,取上清液稀释倍直接 进样.,色谱图见图.;日内与日间%,见表.。样本均在取样后一周内 测完。 图?色谱图 肠灌流液中的拉米夫定;空白肠灌流液 表拉米夫定回收率和精密度考察,?硕上学位论文 五酯胶囊对大鼠在体肠吸收拉米犬定的影响 .肠循环液中酚红的含量测定 采用 ×. 柱 ,“,序号为;岛津一高效 液相色谱仪二元泵,二极管阵列检测器,自动进样器,柱温箱,.色谱工作站; 柱温:。;流动相:水:甲醇:;流速:. ?~;紫外检测波长;样 品处理:肠循环液经高速离心,取上清液?稀释倍直接进样 .,色谱图见图.;日内与日间%,见表.。样本均在取样后一周内测完。 .目 幅?并?玛?虹峙柚嚣?并柚俘伸口仲 图?色谱图 肠灌流液中酚红;空白肠灌流液 表酚红回收率和精密度考察,士一? 翟 ‘ 。/% 萃絮懈 /% 日间 日内 方法回收率惕?爵墼‰广 .. . .?. . . .?. . .. . . .. . .。 , . .小肠灌流液的制各 ;%硕卜学位论文 五酯胶囊对大鼠在体肠吸收拉米夫定的影响 时?试剂.:将.,.,. ,., .,.葡萄糖定容于蒸馏水中。酚红液:精密称取的酚红,用 心.试剂溶解并定容至中。 供试液:取粒拉米夫定片/粒 碾碎,用酚红液充分溶解并定容至, 作为供试液待用。 由于实验过程中肠道能吸收或排泄水分,改变回流液的体积,从而影响测定的药物 吸收量的准确性。因此在拉米夫定溶液中加入一定浓度的酚红酚红为大分子络合物,不 被肠道吸收,而药物可以被吸收,测定不同时间的酚红浓度,根据浓度的变化计算不同 时间供试液的体积,结合药物的浓度,准确求算出药物的吸收量。 大鼠在体肠吸收 .实验分组 按照不同浓度五酯胶囊灌胃组用供试液分别配置含五酯胶囊相应浓度:空白、低含 五味子甲素./、中含五味子甲素./、高含五味子甲素./ 的灌流液,每次灌流。 .大鼠在体肠吸收实验方法 试验前大鼠禁食不禁水,称重,腹腔注射戊巴比妥/,麻醉后固定在手 术台板上。沿腹中线剪开腹部,在十二指肠上部与回肠下部各剪开小口,插管, 结扎, 如图.连接循环装置。以/流速用?生理盐水冲洗后,换成? 供试液以/流速循环,记为时,之后改为 /的流速循环并记时。 分别于循环,,,,,,,,,从灌流液中取样,样 品经. 超滤膜过滤一?保存待测,同时往灌流液中补加酚红氏液含酚红 /。 缌 弋缝 目盲部 十指肠 图大鼠在体肠循环图 .小肠吸收药量的计算五酯胶囊对丈鼠:体肠发收拉米人定的影响 硕上学位论文 具体计算方法如表.。 表拉米夫定吸收量的计算方法 矿 ?’陈 环 口 。环/ , .?. . , ? , 乃『..’, 。/ ,“, ’’ 。/ ,阢,、 ’ , 玖『,一’, : : : : : : : : : : : : : : : :。 匕三【监匕。,? : &三已。?匝】?:?. 拉米夫定的浓度;矿:酚红的浓度;正样品体积;:拉米夫定的剩余量 再将剩余药量的自然对数值剩余药量对时间作图,考察不同时间小肠吸收拉 米夫 定情况。以剩余药量的对数值与取样时间进行线性回归,由其斜率可求得透 过系数。 计算公式为:.×。 .统计分析 采用.统计软件包,绝对吸收量、平均吸收百分率采用算术平均数?标准 偏差?或算术平均数范围表示,采用方差分析比较干预组与对照组之间的 差异,.认为有显著性差异。 结果 .全小肠段对拉米夫定的吸收 在灌流药物浓度在?。的情况下,全小肠段小时内平均吸收量为.? .,平均吸收率为.?.%,透过系数为×。 .不同浓度五酯胶囊预处理后对拉米夫定的吸收的影响 经高中低三个浓度的五酯胶囊混悬液灌胃一周对大鼠进行预处理,用拉米夫定灌流 液配成含五味子甲素.?一、?.、?一的混合供试液进行肠灌流。中浓度组 因大鼠死亡只低于最小样本统计量未参与统计,高、低浓度两种不同浓度的五酯胶囊 组吸收拉米夫定较对照有所增多,经过统计分析,对照组和五酯胶囊组的绝对吸收量和 吸收百分率增加没有显著性差异,但也不能完全排除因样本量较少所致。见表.,图 .。 图?不同浓度五酯胶囊干预后灌流拉米夫定剩余药量一曲线图 空白 低浓度高浓度 表不同浓度五酯胶囊对拉米夫定吸收的影响 分组 吸收白.分率%吸收量 .. × . 对照组 .?. 低浓序 .. ... 高浓序.. .. ‘ . .讨论 五酯胶囊对拉米夫定小肠吸收的影响 在体肠试验利用恒流泵按固定流速使药液在小肠内循环,排除了胃肠蠕动对药物吸 收的影响;?试剂为模拟小肠值溶液,排除药物对药物吸收的影响; 其结果主要考察药物透过肠上皮吸收的情况。空白组与高、低浓度五酯胶囊组的值均硕士学位论文 五酯胶囊对大鼠在体肠吸收拉米犬定的影响 比较小,考虑为灌流液中药物含量过高,药物吸收达到饱和,灌流液中药物浓度变化不 大引起。当合用五酯胶囊后,拉米夫定在小肠部位的绝对吸收量和吸收百分率有一定程 度的升高,并没有出现显著性的差异,但也不能完全排除样本量较少的原因,由此推论, 五酯胶囊使拉米夫定以缩短的原因可能与增加小肠对拉米夫定的通透性增加无关,可 能为五酯胶囊增强胃蠕动,使药物进入小肠的时间缩短,从而使药物提前进入小肠吸收 有关。 .结论 .五酯胶囊加快拉米夫定吸收的原因不能肯定是通过增加小肠对拉米夫定的 通透性 增高完成的。 .五酯胶囊使拉米夫定缩短的原因可能是由于其增强胃蠕动,使药物提前进 入小 肠吸收所致。硕士学位论文 参考文献 参考文献 , , .】/ : ,,:. . , . 【 ,. ,,:~. .?, ,:,,: . 【】斯崇文.慢性乙型肝炎抗病毒治疗的进展】,,:~ 赵军年.慢性乙型肝炎中药的合理选择与应用.中西药学刊,,: 】秦刚,施光峰,宋艳艳,等.甘草酸二铵治疗慢性乙型肝炎例荟萃分析.中 华传染病杂志,.:. 【王良俊,杜新加.五味子在肝病中的应用】.中西医结合肝病杂 志,,:~ 】黄立言,李腾庆,龙家衡.拉米夫定联合甘利欣治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临 床观察】.广东药学院学报,,:~ 】李芳,崔众英.拉米夫定合用甘草酸二铵治疗慢性乙型肝炎的临床用药研究【】. 中国现代医学杂志,,:~ 【】徐艳霞,张锦楠,闰淑莲.甘草和五味子对大鼠丙咪嗪药代动力学的影?.首 都医科大学学报,,:~ 【】杨静,彭仁璜,孔锐等. .甘草酸二铵对大鼠肝脏细胞色素和相酶的 影响.】.药学学报.,:~ 】裴彬,蔡雄,缪晓辉等.五味子甲素对大鼠肝细胞色素影响的研究】. 肝脏.:~ ,. 】?. ,,:~ , , ,, 】 . .,: 【】江骥,胡蓓,谢宏红等,拉米夫定片剂在中国健康男女受试者体内的药代动力 学研究】.中国临床药理学杂志 ; :~ 】祝永明,王亚华.拉米夫定的不良反应和安全性评价】,药学实践杂硕士学 位论文 参考文献 志,,: . 【 】儿, . .,:. , 【 】 :. .,: 】 . ..,: ,. 【 , ,】 ,,: , , 【】 ,,? ; , “ ~,: , .’【 ,, , ,. ,,: 邵丽华,孙淑爱,郭冬梅.血清中喷西洛韦和拉米夫定浓度的测定.山东医科 大学学报,,: 薛克昌,顾宜,张三奇,蒋永培..法测定小鼠血清及脏器中拉米夫定的 】 浓度.中国药房,: 陈新谦,金有豫,汤光.新编药物学】.北京.人民卫生出版社,,? 】 刘治军,傅得兴,孙春华,等.体内药物相互作用研究进展】.药物不良反应 杂 志,,:~ 】 李凯风,梁逸强.疏肝扶脾温。肾法治疗老年肠易激综合征例时珍国医国 药,, : 【 沈凯,王景田.药物肠吸收实验进展】中国新药杂志,,: 】 杨照罡,孟幻,等.槲皮素对小肠吸收阿昔洛韦的促进作用】.北京大学学 报,,: 】 李高,丁文峰.利福平对地高辛小肠吸收作用的影响】.同济医科大学学 报,,:~ 陆彬.药剂学实验】.北京:人民卫生出版社,,~.硕士学位论文 参考文献 【】范玉玲,崔福德,张静.齐酞酸钠在大鼠肠道吸收动力学研究,中国新药杂 志,: 【陈奇,中药药理学研究方法学】.北京:人民卫生出版社,,硕士学位论文 附录 附录拉米夫定单用时人体药动学参教