性分化异常的细胞遗传学及分子细胞遗传学分析

性分化异常的细胞遗传学及分子细胞遗传学分析 性分化异常的细胞遗传学及分子细胞遗传 学分析 中国优生与遗传杂志2006年第l4卷第1期?43? 性分化异常的细胞遗传学及分子细胞遗传学分析 梁毓.何晓艳,王树玉.贾禅维(首都医科大学附属北京妇产医院,100006) 摘要:目的分析性分化异常患者中的染色体异常,协助其临床诊断.方法以常规细胞遗传学方法为主,结合荧 光原位杂交分析290例性分化异常患者的遗传学病因.结果在289例性分化异常患者中共检出染色体异常67例,12例 46,XY女性,异常检出率为27.3%.结论将常规细胞核型分析与荧光原位杂交相结合更有利于性染色体异常患者的诊 断,便于协助临床治疗. 关键词:性分化异常;染色体异常;细胞遗传学;荧光原位杂交 中图分类号:R588文献标识码:B文章编号:1006—9534(2006)01—0043—02 性分化异常是一种常见疾病,严重影响患者的身心健 康.其中一部分与染色体异常有关,现检测性染色体异常的 主要方法是细胞遗传学方法,但这种方法对某些微小染色体 异常无法辨认其来源.荧光原位杂交技术(fluorescencein situhybridization.FISH)对X,Y染色体数目异常及未明的标 记染色体的诊断有较大价值?J.我们将两种方法结合起来 对290例性分化异常患者进行了检查,现如下. 资料与方法 一 ,资料 290例前来我院就诊的性分化异常患者,其中包括:225 例原发性闭经患者;16例外生殖器两性畸形患者;23例内生 殖器发育异常患者;26例小睾丸,小阴茎患者. 二,方法 1.细胞遗传学检查 采用常规方法制备外周血淋巴细胞染色体检查标本,G 带,必要时C带,显微镜核型分析3—5个核型,计数30个, 嵌合体计数100个. 2.荧光原位杂交 探针选择:选用分别为x,Y染色体特异性CEPXspec- trumgreen.CEPYspectrumorange,双色探针,诊断细胞遗传学 方法无法诊断的疑难病例. 实验过程:标本固定,2×SSC孵浴,胃蛋白酶消化, 0.95%甲醛再固定,洗片,脱水,变性,再脱水,杂交,洗片和 DAPIII复染. 结果:暗室条件下,荧光显微镜观察,红色信号为Y染色 体,绿色信号为x染色体. 结果 常规细胞遗传学检查结果显示:290例性分化异常患者 中:46,XY女性12例(1例诊断为睾丸女性化综合征);46, XX男性1例;有67例染色体异常,总异常率为27.6%.其 中包含3例用细胞遗传学无法诊断的疑难病例.结果见表 1. 表167例性分化异常患者染色体诊断结果 棱型例教棱型倒教 45,X/46,X,+mar245,X/46,x,die(X)(q22)3 46,x,psudioX,t(x;x)146.x,terrea(x;x)1 45.Xl246.X/46.XX/47,XXX2 45,X/46,XX/47,XXX146.x,t(x;6)1 46,X,i(Xq)845.X/46.X.+rrmr/47.X.+2rrmr1 46,x.del(x)(pl1)345.X/46.XY1 45.X/46,XX345,X/46,XX/47,XXX2 45,X/46,XY,t(3;12)147.XXY13 45,X/46,x.i(Xq)246,XX/47,XXY2 45,XX/47,XXX746.XX/47,XXY/47,x,i(Xp),i(Xq)1 应用FISH技术对3例疑难病例进行分析,1例正常男性 作为对照.结果显示:正常对照男性200个间期淋巴细胞和 中期淋巴细胞核分裂相中,98%出现杂交信号,2个细胞缺失 x染色体信号,所有细胞均出现Y染色体信号.对3例细胞 遗传学疑难病例均做出了诊断.结果见表2. 表23例采用FISH方法确诊的疑难病 (下转第48页) ? 48?中国优生与遗传杂志2006年第14卷第1期 三,染色体的多态性, 1.小Y染色体小Y是指Y?21号染色体.有学者认 为小Y是一种多态性改变,不影响生育.也有学者认为小Y 的产生可能是由于Y染色体的部分遗传物质的丢失而导致 的,与多次自然流产,不育相关.人们发现Y染色体长臂上 存在着无精子基因AZF,部分缺失或者完全缺失AZF可以导 致少弱精子,甚至无精子.AZF位于Yql1,并分为AZFa, AZFb,AZFc,AZFd4个区域,其中AZFc的缺失最常见.检 测AZF缺失的方法有很多,最常用的方法是以STS为基础的 多重PCR.国外许多地方已经把Y染色体微缺失列为少弱 精子,无精子患者的常规化验之一.本研究未发现一例小Y 患者. 2.大Y染色体大Y是指Y?18号染色体.本研究发 现大Y3例,其中2例为少弱精.关于大Y是否与男性不育 相关还是只是Y染色体的多态性,目前说法不统一.有学者 认为大Y造成染色质中的DNA重复,重复的DNA可能易造 成有丝分裂发生错误,从而导致睾丸发育不全,精子生成障 碍等,重复的DNA功能仍不完全清楚.Buhler认为2%一 3%的人类Y染色体长度有明显的变异,除非Yq常染色质 也缺乏,否则不出现表型作用.贺爱军等对510对不良孕 产史的患者进行染色体分析发现46,XY(Yqh+)37例,其中 流产占45%,其余为生育低智儿(畸形儿)及不育.田佩 玲等对于376例大Y患者进行调查发现101例其妻曾有 过自然流产史,98例不育,82例其妻曾经生育先天缺陷儿, 15例其妻曾有死胎史,29例无精子,其余为小睾,隐睾,少精 子,死精子,精子畸形,外生殖器畸形等. 3.其他本研究发现46,XY,16h+;46,XY,14ps+; 46.XY.22s+各1例,为染色体的多态性表现.有报道染色 体的多态性和胚胎早期发育异常有关. 总之,我们认为应对不明原因的不育,尤其是少弱精子 症,无精子症尤其对将要进行ICSI辅助生育技术的患者,进 行染色体检查,以确诊病因并指导下一步的诊治.对某些高 度怀疑遗传问题的患者可以进行分子学检查,进一步确诊. 参考文献 [1]VogtPH.Moleculargeneticsofhumanmaleinfertility:fromgenesto newtherapeuticperspectives[J].CurtPharmDes,2004,10(5); 471. [2]袁萍,等.五例常染色体平衡易位伴男性不育[J].中华医学遗传 学杂志,2000,17—5 [3]许薇.等.45,XY,t(13;14)伴少精子症2例[J].中国优生与遗 传杂志,2005,13—2. [4]贺爱军,等.Y染色体异常与生育的关系【J].中华医学遗传学杂 志.2002,12:20-6. [5]田佩玲,等.大Y染色体核型376例分析[J].中国男科学杂志, 2004,18—2. 收稿日期:2005—09—06 (上接第43页) 3例疑难病例分析如下 病例I:为嵌合体:23%的细胞为45,x,77%的细胞为 46,x,+mar;即部分细胞只出现一个代表x染色体的绿色 信号,而部分细胞含既出现一个代表x染色体的绿色信号又 有一个代表Y染色体的红色信号.病例2:亦为嵌合体, 20%细胞只出现一个代表x染色体的绿色信号,35%细胞含 一 个代表x染色体的绿色信号和一个代表Y染色体的红色 信号,45%细胞含一个代表x染色体的绿色信号和二个代表 Y染色体的红色信号.病例3:15%细胞有一个代表x染色 体荧光信号,85%细胞出现二个代表x染色体荧光信号. 讨论 性分化异常种类繁多.临床表现各异,本研究的290例患 者的临床表现并结合遗传学检查概括如下:225例原发性闭 ,12例46,XY女性,异常率达 经患者中染色体异常为49例 27.1%;16例外生殖器两性畸形患者中染色体异常为2例;23 例内生殖器发育异常患者中染色体异常为1例;26例小睾丸. 小阴茎患者中染色体异常为15例,1例为46,XX男性,异常 率达61.5%.但其中包含3例不能确诊的疑难病例. FISH技术对鉴别未明的小标记染色体有较大价值,可 确定其来源J.我们对3例细胞遗传学方法不能确诊的病 例也做出了明确的诊断.3例患者社会性别均为女性且性发 育幼稚,身材矮小,部分患者伴智力低下等Turner综合征的 症状,据报道3这类患者如染色体核型中如含有Y染色体或 Y染色体片段,其性腺发生恶性母细胞瘤和无性细胞瘤的比 率高达10%一20%,明确诊断可做预防性手术切除双性腺. 因此,确定其标记染色体来源Y染色体还是x染色体对临 床治疗上有重要的指导意义. 综上所述,将细胞遗传学与分子细胞遗传学结合起来, 更有利于性染色体异常的诊断和治疗. 参考文献 [1]Ortes—GutierrezEl,Cerda—FloresRM,Silva—CudishJB,eta1. EvaluationofsexchromosomeaneuploidiesinwomenwithTurner's syndromebyG—bandingandFISH.Aserialc8?study[J].JRe- prodMed,2003Oct,48(10):8o4—808. [2]赵丽,李红,薛永权,等.荧光原位杂技术在遗传病诊断中的应用 [J].中华医学遗传学杂志,20(0.Dec,21(6):611-614. [3]Tolaya—ForgasJ,DeLeonJ,PowellWC,eta1.Prenataldiagnosis 0f47,xx,der(15),t(15;16)(ql3;p13.2)[J].PrenatDiagn, 2004Mar,24(3):209—212. [4】CavalcantiDP,ZanchettaIJM.Interphase—FISHstudrinth嗽pa- fientswithtetraploid/diploidmosaicism[J].EurJMedGenet,2005 Jan—M8r,48(1):4l一50.Epub2005Feb1. 收稿日期:2005—09—06