组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合蛋白酶体抑制剂对人套细胞淋马瘤细胞株Z-138生长调控研究（可编辑）

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合蛋白酶体抑制剂对人套细胞淋马瘤细胞株Z-138生长调控研究（可编辑） 组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合蛋白酶体抑制剂对人套 细胞淋马瘤细胞株Z-138生长调控研究 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师 或指导小组 的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发 与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则，承担相应法律责任。 一、、 【。L:，3l ―j，o 研究生签名:弓瑞嫣导师签章,以- 二级学院领导盖 l 。曩I ( 撕2年 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 1 导师签章; 研究生签名;乃磷娟 、1 为f工年?月知日 目 录 中文摘要………………………………………………………………………l 英文摘要………………………………………………………………………6 研究论文 组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合蛋白酶体抑制剂对人套细胞淋 巴瘤细胞株Z(138生长调控的研究 前言……………………………………………………………………((11 日【J舌……………………………………………………………………((1l 材料与方法……………((‘……………………………………………… 11 结果………………………………………………………………………15 附图………………………………………………(:……………………18 附表……………………‘……(:(………………………………………… 25 讨论……………………………………………………………………((28 结论……………………………………………………………………((32 参考文献………………………………………………………………((33 综述 组蛋白去乙酰化酶抑制剂在治疗淋巴瘤方面的研究进 展……………………………………………………………………36 致谢……………………………………………………………………………47 个人简历………………………………………………………………………48 中文摘要 组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合蛋白酶体抑制剂对 人套细胞淋巴瘤细胞株Z一138生长调控的研究 ( 摘 要 。 目的: cell 套细胞淋巴瘤 maIltle 霍奇金淋巴瘤的一个特殊亚型，其侵袭性高，预后差，临床上难以治 愈，尽管一些新的治疗手段如硼替佐米、利妥昔单抗等用于治疗套细胞 淋巴瘤，但患者的总生存没有明显的提高，急需寻找新的治疗手段。组 蛋白去乙酰化酶抑制剂 histone deacetylase 修饰为作用靶点，使组蛋白和非组蛋白乙酰化，通过多种途径诱导肿瘤 细胞的凋亡和分化，引起细胞周期阻滞，抑制肿瘤细胞增殖，并且与一 些抗肿瘤药物联用具有协同作用。本实验通过研究组蛋白去乙酰化酶抑 制剂SAHA联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米对人套细胞淋巴瘤细胞株Z( 138细胞生长调控的影响，探索其作用机制，以期为临床治疗提供理论 基础和实验数据，寻找套细胞淋巴瘤新的治疗手段。 方法: 1(细胞培养和传代 人套细胞淋巴瘤细胞株Z(138，培养于含体积分数10,的灭活胎牛 养液中，置37?、5,C02的培养箱中培养，每48(72h传代一次，实验 均采用对数生长期细胞，台盼蓝染色拒染率95,以上。 2(MTT法组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA和,或蛋白酶体抑制 剂硼替佐米对Z(138细胞生长的影响 2(1 SAHA抑制Z(138细胞增殖的实验 板，随机分为对照组和实验组 不同剂量SAHA组 。对照组加入loo山 72h向每孔中加入10m 中文摘要 一 养箱中孵育4h，然后离心培养板，小心吸去上清，向每孔中加入150山 二甲基亚砜 DMSO ，振荡器充分振荡，至结晶溶解后于酶标仪570nm 处测量各孔的吸光度值。 2(2硼替佐米抑制Z(138细胞增殖的实 验 ( 板，随机分为对照组和实验组 不同剂量硼替佐米组 。对照组仅加细胞 培养液，实验组依次加入终浓度为1、2、4、6、8、10I州硼替佐米，+ 同上述方法分别于加药后的24、48、72h测量各孔的吸光度值。 2(3 SAHA联合硼替佐米对Z(138细胞增殖的影响 板，随机分为对照组、SAHA组、硼替佐米组和SAHA+硼替佐米组，分 别于加药后的24、48、72h测量各孔的吸光度值，检测方法同上。( 3(流式细胞术检测SAHA和,或硼替佐米作用于Z(138细胞后细胞周 期和凋亡的变化 取对数生长期的Z(138细胞，以不同浓度S剐队和,或硼替佐米处理 聪ton(X100 1(O, 500山，4?反应30分钟，用流式细胞仪测定细胞周 期和凋亡率。 4(流式细胞术检测不同浓度SAHA和,或硼替佐米处理Z(138细胞后 NF(KB p65 蛋白的表达情况 取对数生长期的Z。138细胞，加入不同剂量的SAHA和,或硼替佐 体，室温避光反应半个小时后加入二抗，应用流式细胞仪检测NF(KB p65 蛋白的表达情况。 5(流式细胞术检测不同浓度SAHA和,或硼替佐米作用于Z(138细胞 后bcl(2蛋白的表达情况 取对数生长期的Z(138细胞，加入不同剂量的SAHA和,或硼替佐 个小时后加入二抗，应用流式细胞仪检测bcl(2蛋白的表达情况。 6(流式细胞术检测不同浓度的SAHA处理Z(138细胞后细胞表面 CD20的表达情况 中文摘要 (一 取对数生长期的Z(138细胞，调整细胞密度为5×105,ml，每瓶接 种 3m1，随机分成对照组和实验组，对照组仅加入细胞培养液，实验组依次 SAHA，培养24h后收集细胞， 加入终浓度为O(005、O(010、O(100pM 4?PBS洗涤，加入CD20抗体，避光反应1h后应用流式细胞仪检测 。 CD20的表达情况。 结果: 1(SAHA抑制Z(138细胞的增殖，其效应在一定的浓度范围内呈时 1(16?1(1 79(82?3(42 ,;72h的细胞抑制率分别为 11 ,、 28(64? 统计学意义 尸 O(05 。 2(在一定的浓度范围内，硼替佐米抑制Z(138细胞增殖，其效应呈 1(72 ,、 90(45?2(44 ,，差异均具有统计学意义 尸 O(05 。 3(SAHA和硼替佐米联用能协同抑制Z(138细胞的增殖。如: 0(10州SAHA、1nM硼替佐米、O(10“M O(25州SAHA、2nM硼替佐米、O(25“M 细胞抑制率分别为 16(65?1(45 ,、 11(24?O(39 ,、 50(79?1(99 ,。 4(SAHA单药或硼替佐米单药均可以诱导Z(138细胞凋亡，使细胞 阻滞在G2,M期，其效应呈剂量依赖性。随着药物浓度的增加，凋亡率 增加，处于G2,M期的细胞数增多。当SAHA和硼替佐米联用时，细胞 凋亡率明显增加，同时更多的细胞被阻滞在G2,M期。对照组、O(25州 3 中文摘要 一 SAHA、lO I蝴硼替佐米、1(OO出SAHA+10nM硼替佐米处理Z:(138细 5(在一定的浓度范围内，SAHA单药或硼替佐米单药均可以下调细 尸 O(01 。 有统计学意义 P O(05 。 结论: 1(在一定的浓度范围内，SAHA可以抑制人套细胞淋巴瘤细胞株Z( 138细胞的增殖，使细胞出现周期阻滞，其效应呈时间(剂量依赖性，其 机制可能与下调NF(1 B p65 和bcl(2蛋白的表达有关。 2(在一定的浓度范围内，SAHA联合硼替佐米可以协同抑制人套细 和bcl(2蛋白的表达有关。 3(小剂量SAHA可以上调细胞表面CD20的表达，增加细胞对利妥 昔单抗的敏感性，可能能够改善利妥昔单抗耐药，与利妥昔单抗联用可 能具有协同作用，但有待于进一步的研究证实。 关键词:组蛋白去乙酰化酶抑制剂;蛋白酶体抑制剂;套细胞淋巴 中文摘要 瘤;NF。1出 p65 ;bcl―2;CD20;协同;凋亡 英文摘要 Theinnuenceofhistone inhibitorwith deacetylase proteasome inhibitoronthe ofhumanmantlecen proliferation lymphoma ceUHneZ(138 ABSTRACT objective: Mantlecell B a cells，is l卿homa MCL ，deriVing舶mspecialsubtype of ischaracterizedas Non??Hogkin’s1舯phoma(It high andinc谢ble( new suchas prognosis A1thoughtherapies， bortezomib， been on of havenot rituximab，haveappliedclinic，the patients prognosis remarkable new are needed( improVemem(Therefore，therapiesu玛ently Histone as histone deacetylase acetylation， inhibitors HDACis targetmaking andcell the of tumOr inducing印optosiscyclea玳st，inhibitingprolif(eration imeraCt withsome cells(MoreoVer，HDACis syne唱istically ofthis isto t】睦 innuenceofSAHAwith d11lgs(Thepu印ose stIldy inVestigate bortezomibonhumanMCLceU1ineZ-13 me for 8，e 【ploremechanism，look new forMCLand and datas ther印y proVidetheo巧accordancesexp甜ment forclinic( Methods: 1(CellcultureofZ(138 ThehumanMCLcell Z一1 weremaintainedinRPMI1 line 38cells 640， 1O,fetalboVine OOunits,ml and1OO containing serum，1 penicillin p‖ml 38cellswereculturedat37?inahumidifiedof 5, C02 str印tomycin(Z一1 cellswere tbree or atmOsphere(The passagedeVe叫two days(Allexperiments were usinglog撕thmicallycells，and growing by blue trypan staining( 2(TheeffectofSAHAand,or Z一138cellstestedMTT bortezomibon by 2(1 ofSAHAinhibitedthe ofZ一138 experiment growth Z一138 in seededin96??well cells，whichexponentialstatc，were gro叭h a of2×l05 cells,m1(The wereadded1 plates，atdensity control粤(oups OO山 6 英文摘 wereaddeddi 行(erent thecellmltrient the nuid，aIldexperimental伊oups were of thefinalconcentrations concentrations SAHA，made O(10，O(25， O(50， 1 hoursbeforethe ending Opl O(75，1(OOpM，respectively(Four point，added the the MTTineach well，thencentri缸gateplate(ARerthis，discarding the untn 1 DMSOtoeach the well，sh描ngplate supematants，adding50pl theelisareadertomeasureeachwell’s precipitatedissolVed(Lastly，using absorbanceat570nm( 2(2bortezomibinhibitedthe ofZ―l38cells proliferation Z-l38cellsin intothecontrol Tal ing logarimmVegetalperiod，diVided the control wereadded and groups exp嘶mentalgroups，randomly(Thegroups were to 1 the 1，2，4， 6，8， OO山ceUculture，whileexperimental铲oupsexposed methodtomeasurethe 1OrtM theaboVe bortezomib，respeCtiVely，thenusing a_bsorbanceofeachwell( 2(3SAHAandbortezomib inhibitedthe ofZ-138 sylle唱istically growth cells in diVidedthesecells TheZ一138cells seeded96-well Were plates，then and intofour groups:controlgroup，SAHA MTTtomeasuretheabsorbanceof bortezomib test group，ra】[1domly(Using eachwell( 3(Assessmentof andcell cycle apoptosis Theextentof wereeValuated by apoptosis propidium wereculturedinthe orabsenceofSAHAand, orbortezomibfor Cells presence the cellswith 36h(After washingcells，stainingPI 50m‖m1 (Bothsamples deteCt ratioandcell were FCMto analyzedby cell印optosis cycle( of 4(T’estthe expressionNF一书(B p65 protein andthe 1龇Z一138 intothecontrol cells，diVided groups experimental were toSAHAa11d, orbortezomib groups(Thee 叩甜mentalgroupsexposed for t11econtrol wereaddedcellculture(ARer 24h，while only washing groups the with to an cells 4?PBS，added NF-1c13 p65 antibodyeach铲oup(Half intoeach FCMtotestthe hour 1ater，added deuto―antibodygroup，thenusing of expressionNF一1dB p65 protein( 7 英文摘要 5(Testthe ofbcl-2 eXpressionproteln into虹lecontrol T2lkeZ(138 cells，divided 38cellswere bortezomiband group ? 4 thecellswith bortezomibfor24h(ARer toSAHAan刮or exposed Washing at37? cellsreactionwi也bcl一2 bcl(2 antibody PBS，addedantibody，1eRing FCMtotest toeach forhalfan using ho甄addeddeuto(antibodygroup，then the ofbcl一2 eXpressionprotein( the ofCD20 6(Test expression culturedinculture 38 in Z(1 state，werc cells，whiche 【ponentialgrowth 38censintocontrol 5×l05cells,m1(DividedZ一1 a of groups bottle，atdensity cellnutriem co嘶ol wereadded and nuid， exp舐ment“’g献lps(Thegroups of wereaddeddif(ferentconcentrations whilethe SAHA， experimentalgroups OO madethefinalconcentrationsare O(005，O(01O，O(1 CD20 and theZ―l38 hours cells，adding later，c011ectingwashing Twenty(four the ofCD20( hour FCMtotest antibody(Onelater，using expression Results: ofZ-138 acertaindose inhibitedthe 1(Under proli6删ion scope，SAHA manner(?milethe atimeand cells，in concentration-d印endent ratiofor inhibition wasO(1 O，O(25，O(50，O(75，1(OO肛M，theco盯espondence 24h ceUinhibitionratio 50(16?1(80 ,;48h inhibitionratio cell 43(15?1(59 ,， 62(97?2(38 ,， 79(82?3(42 ,;72h di髓rencewas significant P O(05 ( 86(74?2(87 ,，the me ofZ- a dose 2(UnderceItain suppressedgrowth scope，bortezomib the manner(While 138 ina timeand cells， conceIltration(dependent cell concentI(ationofboIrtezomibwas 1，2，4，6，8，lOnM，thecorrespondence inhibitionratiofor24h ceUinmbitionratio 49(48?1(09 ,， 66(33?2(OO ,， 83(24?4(24 ,;48h 1? 3(36 ,， ratio cellinhibition waS 6(73? O(62 ,， 74(92?3(54 ,， 87(73?1(65 ,;72h 8 英文摘要 dif(ferencewas 2(44 ,，me significant P( O(05 ( with on 3(SAHAinteracted bortezomib the synergistically inhibiting ratio ofZ(138cells(For celliIlllibition pr01iferation eX锄ple，the was 6(65? SAHA，1r1】 ? 1(18 ,， 4(65?O(28 ,and 30(55?O(58 ,for0(10?M the bortezomibandthecombinationOfboth inhibitionratiofor nMbortezomibandthecombinationof O(25“MSAHA，2 both dmgs induce ofZ―l38cells 4(BothSAHAandboltezOmibcould the apoptosis manner( andcell a玎estatG2,M a cycle stage，inconcen仃ation-d印endent was withtheconcentrationratioOf raising， the Along adding，theapoptOsis cennumberatG2,M was CombinationSAHAand stage increasing( ratiowasmarkable bortezomib，ceH apoptosis morecellswerearrestedatG2,M contr01 stage(The SAHA+2nM nMbonezomibandO(25 group，2 group pM ratio was O(48?O(06 ,， 2(25?O(21 ,， 1(90? corresponding印optosis difrerencewas O(11 ,， 23(79?1(46 ,for36h，the and control SAHA OnMbortezomib 1(OO group，1(OOpM group，l group pM SAHA+1OnM ratioofcellsatG2,M bortezomib，the stagewas 9(07? 36h， dif梵rencewas I(espectiVely’the significant 尸 O(05 ( 5(UnderacertainconcentrationSAHAandbortezomibcould scope，both combination the of bcl―2，while downregulateexpressionNF―KB p65 and of bcl一2 markable was them，theexpressionNF-KB p65 and downregulated( Thecontrol SAHA nMbortezomibandO(50 pM group group，O(50 group，6 SAHA+6nMbortezomibtreatZ-138cellsfor 24h， theexpression ?M group of dif(ferencewas 242(78?17(12，respectiVely，the nMbortezomiband coll仃ol gr01叩，O(50“MSAHA伊oup，6 groupO(50? M nM treatZ一138cellsfor SAHA+6bortezomib of 24h，the group expression bcl(2 9 英文摘要 ,一―――――――― ?――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――一 was dif蚤玳nCe 1 ( significant _P O(O respectively'tlle ofCD20(ARer the 6(Atlow could expression dose，SAHAuprelugate of Z一138cellsfor SAHAtreatment difrerentconcentration 24h，theexpression ofthecontrol CD20 CD20wasincreased(The expression group，O(005肛M was SAHAa芏1d group groupO(010哗SAHA dif(ferencewas and significant f O(05 ( 559(49?5(2l，respectively，the Conclusions: inhibitthe SAHAcould a certainconcentration 1(Und盯 scope， 38aIldinduceceU a humanMCLcelllineZ(1 an? st，in of cycle proli向嘶on mechanismwas manner(The timeaIld conCen仃ation(d印endempossible bcl??2 the of protein( expressionNF-1 B p65 and downI咖late combinationSAHAwith 2(Undera certainconcen衄ation scope， ofZ-l38 inhibitthe bortezomibcould cells，the syne玛isticallyproliferation ofNF- the mechanismwas expression syne唱isticallydownregulate possible bcl一2 KB p65 aIldprotein( the of low AHAcould 3(At expression dose，S obviouslyupregulate amelioratecell thecellsto the rituximab，may CD20，increasesensitivi够of to with resistallcetoritllximaba11d rituximab，butneed如ther咖dy syne晤stic con而rmed( Words:histone Key deacetylaseinhibitor;proteasome cell lO 研究洽文 组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合蛋白酶体抑制剂对 人套细胞淋巴瘤细胞株Z一138生长调控的研究 前 言 cell 套细胞淋巴瘤 Mantle 液系统恶性肿瘤，是非霍奇金淋巴瘤的一个特殊亚型，大约占非霍奇金 淋巴瘤的5,(10,?，多见于老年男性，其侵袭性高，同时兼具有惰性淋 巴瘤难以治愈的特点，预后差，治疗后易复发。目前，常规的化疗 不能有效的控制该疾病，造血干细胞移植有望改善患者的预后，但大部 分患者发病时已为老年，无法接受移植。虽然一些新药，如利妥昔单 抗、硼替佐米用于治疗套细胞淋巴瘤，疗效有一定的改善，但患者的总 生存没有明显的提高，急需寻找新的治疗手段比1。 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 Histonedeacetylase 以乙酰化修饰为作用靶点，使组蛋白和非组蛋白乙酰化，通过NF(1出、 线粒体凋亡信号通路和氧化损伤等多种途径抑制肿瘤细胞增殖，发挥其 抗肿瘤的作用口3。蛋白酶体抑制剂主要通过抑制泛素一蛋白酶体通路来发 挥其抗肿瘤的作用。目前，体外实验和体内实验均证实了HDACi单药 或蛋白酶体抑制剂单药对多种实体瘤 如消化道肿瘤、乳腺癌 和血液 系统恶性肿瘤 如淋巴瘤、白血病 具有治疗作用?…。但关于两药联合 对人套细胞淋巴瘤细胞株增殖的影响国外偶有报道，国内尚未见相关报 、j二 遁。 本实验通过观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合蛋白酶体抑制 剂硼替佐米对人套细胞淋巴瘤细胞株Z―138增殖的影响，并对其可能的作 用机制进行研究，旨在阐明二者联合治疗套细胞淋巴瘤的作用机制，寻 找套细胞淋巴瘤新的治疗手段，为套细胞淋巴瘤患者的临床治疗提供实 验数据和理论基础。 材料与方法 1材料 研究论文 1(1主要实验仪器 产地 仪器名称与型号 日本三洋公司 C02培养箱 MCO(18AIC型 ( 新加坡Exco公司 超净工作台 全自动高压蒸汽消毒器 日本三洋公司 电热恒温干燥箱 天津市泰斯特仪 器有限公司 流式细胞仪 EPICS(XL型 Coulte忙o(Healeall， FL( 离心机 飞鸽TDL(40B 上海安亭科学仪器 厂 倒置相差显微镜 XD(101型 日本尼康 低温高速离心机 TTICH型 。德国heraeus公司 ”酶标仪 HT2型 奥地利ThenIlo公司 Ltd 美国Costar公司 无菌滤器 NipponMillipore 25cm2塑料培养瓶 Coming公司 BECTONDICKINSO公司 96孔U型细胞培养板 显微镜图像采集系统 北京健尔康医 疗设备有限公司 恒温水浴箱 温州永强医疗器械 厂 1(2主要试剂 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 SAHA selleck公司 蛋白酶体抑制剂 硼替佐米儿ortezomib selleck公司 Santa Cmz生物技术 Bcl(2抗体 股份有限公司 Santa Cmz生物技术 NF一1出 p65 抗体 股份有限公司 CD20抗体 北京四正柏生物科技有限公司 北京四正柏生物科技有限公司 IgG2a同型对照 二抗:抗鼠IgG(HRP Sigma公司 胎牛血清 Hyclone公司 改良型RPMll640培养基 Hvclone公司 四甲基偶氮唑蓝 MTT 美国SiglIla公司 二甲基亚砜 DMSO 天津永大化学试剂开发中心 一研究论文 。 注射用青霉素钠 华北制药股份有限公司 注射用链霉素 华北制药股份有限公司 。 1(3主要溶液配置: 1(3(1磷酸盐缓冲液 PBS :称取8(oogNaCl，O(209KCl，1(449 Na2HP04，O(249 灭菌后4?储存备用。 1(3(2 霉素100U,『ml，链霉素100“咖1，并加入胎牛血清至体积分数为10,， 即为含10,胎牛血清的改良型I冲M11640培养液，4?保存备用。 后分装，(20?保存。 1(3(4 然后充分混匀，用O(22岬孔径的(滤膜过滤后分装，(20?保存备用。 1(3(5 溶解，再用培基稀释成2×104山的储存液，过滤后(20?保存，临用前 ( 稀释至所需浓度。 1(3(6 蛋白酶体抑制剂硼替佐米:先用DMS0溶解，再用培基稀释成l ×107nM的储存液，(20?保存备用，临用前稀释至实验所需要的浓度。 2实验方法 2(1人套细胞淋巴瘤细胞株Z(138细胞的培养和传代 F培1 人套细胞淋巴瘤细胞株Z(138为北京大学第三医院血液科克晓燕教 授惠赠，常规悬浮细胞培养，培养液为含体积分数lO,的灭活胎牛血 于’37?、5,C02培养箱中培养，每48(72h传代一次，所有实验均采用 对数生长期细胞。 2(2MTT法检测细胞活力 1(00州，对照组仅加等量、等密度的细胞培养液，置于37?、5,C02 的细胞培养箱中孵育，分别于加药后的24、48、72h向每孔中加入10pI 研究论文 板，小心吸去上清，再向每孔中加入150山DMSO，振荡器充分振荡至 结晶溶解后于酶标仪570nm处测定各孔的吸光度值 A570 。 孔板，实验组依次加入终浓度为1、2、4、6、8、10nM硼替佐米，对照 组仅加等量、等密度的细胞培养液，同上法检测各孔的吸光度值 A570 。 孔板，随机分成对照组、SAHA组、硼替佐米组和SAHA+硼替佐米组， 依次测定各孔的吸光度值 A570 ，检测方法同上。 2(3流式细胞仪检测细胞周期和凋亡 取对数生长期的Z(138细胞，调整细胞密度为5×105,ml，随机分成 对照组、SAHA组、硼替佐米组和SAHA十硼替佐米组，置37?、 5,C02的培养箱中培养36h后收集细胞，4?预冷的PBS洗涤，加入碘 化丙碇 PI:50m‖ml，嘶ton。XlOO1(O, 500山，4?反应30分钟，用 流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率。 2(4流式细胞仪检测NF(心 p65 蛋白的表达情况 取对数生长期的Z(138细胞，密度为5×105,ml，随机分成对照组、 体，室温避光静置lh后加入二抗，待其反应1h后应用流式细胞仪检测 NF('cB p65 蛋白的表达情况。 2(5流式细胞仪检测bcl(2蛋白的表达情况 取对数生长期的Z(138细胞，密度为5×105,m1，随机分成对照组、 水浴箱中避光静置1h后加入二抗，待其37?避光反应1h后应用流式细 ( 胞仪检测bcl(2蛋白的表达情况。 2(6流式细胞术检测细胞表面CD20的表达情况 取对数生长期的Z(138细胞，调整细胞密度为5×105,ml，每瓶接种 3“，随机分成对照组和实验组，对照组仅加入等体积的细胞培养液，实 研究论文 体，避光反应1h后应用流式细胞仪检测CD20的表达情况。 3(数据处理与统计学分析: 应用SPSSl3(O统计软件进行统计分析。实验数据以均数士差 孑士s 表示，满足正态性分布的资料采用单因素方差分析，不满足正态 性分布的资料采用秩转换的非参数检验，两两比较时方差齐性者用t检 7检验。以P O(05表示差异有统计学意义。应用中 效 验，方差不齐者用t 原理计算两药物的协同作用指数CI。 D合l×D合2 D合1 (， D合2。、， x c12 1雨+1币+a1了1i1亏五两 注:CI l，表示两药为协同作用;CI 1，表示两药为叠加作用; 。 CI 1表示两药为拮抗作用。 结 果 1(在一定的浓度范围内，SAHA可以抑制人套细胞淋巴瘤细胞株Z( 138细胞的增殖，其效应呈时间(剂量依赖性。当SAHA的浓度为O(10、 1(80 ,;48h的细胞抑制率分别为 6(65?1(18 ,、 16(65?1(45 ,、 用时间的延长，SAHA对Z(138细胞的抑制率逐渐升高，差异具有统计 学意义 尸 O(05 ，见表1，F遮2。SAHA48h的IC50值为O(58肛M。 2(硼替佐米抑制Z(138细胞的生长，并在一定的浓度范围内呈时