无创产前基因检测在4168例产前筛查高风险孕妇中的应用[权威资料]

无创产前基因检测在4168例产前筛查高风险孕妇中的应用[权威资料] 无创产前基因检测在4168例产前筛查高风险孕妇中的应 用 本文档格式为WORD,感谢你的阅读。 摘要:目的 评估无创产前基因检测(noninvasive prenatal testing，NIPT)在胎儿染色体非整倍体筛查与诊断中的应用价值。方法 2012年8月,2014年2月在湖南省妇幼保健院产前诊断中心就诊的孕早期或中期生化筛查高风险(21-三体风险?1/270，18-三体风险?1/350)的4168例孕妇，对其进行NIPT，检测结果为高风险者进行传统的胎儿核型分析确认，检测结果为低风险者随访妊娠结局。结果 4168例孕妇中，NIPT高风险59例，有52例做了传统的胎儿核型分析，21-三体和18-三体符合率100%(32/32)，13-三体符合率0(0/1)，性染色体异常符合率31.58%(6/19)。4109例低风险孕妇随访到4000例，其中B超检查发现胎儿结构异常13例，引产12例。未发现21或18-三体出生。结论 NIPT对21-三体和18-三体检测具有较高的敏感性和特异性;作为二线筛查方法用于妊娠早期或妊娠中期筛查阳性病例，可减少98%由于筛查假阳性而造成的不必要的侵入性产前诊断操作。 关键词:无创产前基因检测;产前筛查;高风险;染色体非整倍体;侵入性产前诊断 我国的出生缺陷总发生率约为5.6%[1]，出生缺陷人口的历年递增严重影响我国人口的整体素质，不仅给家庭和社会带来沉重负担，也成为重大的社会人口问题之一，成为我国一个严重的公共卫生问题[2]。染色体病是导致严重出生缺陷的重要原因，发生率约为1/160[3]。染色体病无法根治， 可通过产前筛查和产前诊断进行预防。常规的生化检查-核型诊断-临床引产存在耗时长、有创操作等缺陷[4]。易增加孕妇流产概率及心理负担，同时由于唐氏筛查有较高的假阳性率，多数孕妇进行产前羊水穿刺并非必要。目前广泛开展的孕妇外周血中胎儿游离DNA大规模平行测序，检测胎儿非整倍体无创产前基因检测技术(noninvasive prenatal testing，NIPT)为当前的产前筛查诊断模式提供了新的选择。本研究针对高龄、唐氏生化筛查高风险孕妇，开展了NIPT检测，现如下。 1资料与方法 1.1一般资料 2012年8月,2014年2月在湖南省妇幼保健院产前诊断中心就诊的孕早期或中期生化筛查高风险(21-三体风险?1/270，18-三体风险?1/350)的孕妇，对其进行常规的侵入性产前诊断核型分析方法和胎儿非整倍体无创产前基因检测技术介绍，经过知情同意、自愿选择接受无创产前DNA检测，检募集4168例。年龄18,46岁，孕12,35 w，B超提示单胎，自然妊娠，无地中海贫血基因携带者、孕前3个月无输血或骨髓移植。 1.2方法 孕妇外周血胎儿DNA的无创基因检测与北京贝瑞和康生物技术有限公司合作，签署知情同意书后，选取愿意参与试验的孕妇4168例，采用Streck管收集外周血10ml，通过两次离心法从孕妇外周血中分享出血浆，使用商业化试剂盒提取血浆DNA，进行文库存制备，定量后进行簇生成，在Hiseq 2000测序仪上完成36 bp高通量单端测序。数据分析时首先将测序结果序列与人类基因组(hg19)进行比对，最后计算出待检样本的Z值，Z值=(待测样本目标染色体占全基因组的百分比-对照组正常组目标染色体占全基因组百分比平均值)/对照正常组目标染色体占全基因组百分比标准差)。 测序得出的原始序列落在每个染色体上的比值都处在一个固定的范围内(CV<1%，CV即变异系数=标准差/平均 值)，通过目标染色体序列占全基因序列比值是否偏离正常样本标准差便能判读出胎儿目标染色体是否为3条。 1.2细胞染色体核型分析 无创基因检测高风险者，15,24 w者在B超引导下行羊膜腔穿刺术抽取羊水20,30 mL，>24 w者在B超引导下抽取脐血0.5,1 mL，进行细胞染色体核型分析。 1.3对于无创基因检测低风险者，部分患者于妊娠结束时抽取脐带血，进行细胞染色体核型分析，其余随访其胎儿出生后情况。 2结果 2.1无创产前基因检测结果 检测的4168例孕妇中，结果显示为高风险共59例，阳性率为1.42%。其中21-三体高风险为33例，18-三体高风险5例，13-三体高风险1例，性染色体异常高风险20例。 2.2确诊结果 以羊水或脐血染色体核型分析的结果为金标准进行结果对照，检测出的33例21-三体高风险确诊29例为21-三体，另4例因未婚或无生育指标等原因拒绝侵入性产前诊断，自行引产，无法确定核型;检测出的5例18-三体高风险确诊3例为18-三体，1例超声发现多发畸形在外院引产和1例自然流产未确定核型;检测出的1例13-三体高风险确诊正常;检测出的20例性染色体异常高风险确诊6例性染色体异常，1例胎儿畸形，几乎无羊水平段未确定核型，13例确诊正常，见表1。 2.3 NIPT低风险孕妇妊娠结局随访结果 4109例低风险孕妇随访到4000例，其中B超检查发现胎儿结构异常13例(先天性心脏病6例、唇腭裂3例、肺囊性腺瘤样病变1例、多囊性肾发育不良1例、足内翻1例、左肾缺如1例)，引产12例。已分娩婴儿中未发现21或18-三体综合征出生。 3讨论 3.1 NIPT对胎儿染色体非整倍体检测的临床价值 胎儿染色体非整倍体的无创DNA产前检测(noninvasive prenatal testing，NIPT)，是利用大规模平行测序技术(massively parallel sequencing，MPS)对母体外周血中的游离DNA进行深度测序，获取胎儿染色体信息的方法。1997年香港中文大学的卢煜明教授等通过PCR扩增得到母体外周血中Y染色体的特异性DNA序列，从而证明怀有男性胎儿的母血浆中存在胎儿游离DNA(cell free fetal DNA，cffDNA)[5]。新一代测序技术的快速发展和成熟为cffDNA的检测提供了技术保障，从孕5 w开始，孕妇外周血中即可检测到胎儿的游离DNA，胎儿游离DNA含量随孕周增大而增加。目前的研究显示，NIPT对胎儿21-三体检测敏感性和特异性较高，对其他染色体非整倍体的检测目前也有了一些进展[6]。 本研究结果显示NIPT对21-三体和18-三体检测的特异性和敏感性均为100%，阳性预测值100%。1例13-三体高风险染色体结果正常，20例性染色体异常高风险染色体结果正常的有13例，提示目前的分析策略对13-三体和性染色体数目异常的识别率尚不理想。Chen等[7]采用非重复掩盖的人基因组参考序列提高测序短序列的比对匹配数量，并校正GC含量偏倚，这种新分析策略使13-三体识别率从36%提升到100%(25/25)。因此，分析技术的改进，将进一步提升对13-三体和其他染色体数目异常的识别能力，拓展NIPT的应用范围。本研究中4109例NIPT的低风险未发现21-三体假阴性，阴性预测值达到100%，但样本量有限，存在2.65%的失访率，还需更多检测数据证实。 3.2 NIPT避免了一部分常规产前筛查假阳性孕妇不必要的侵入性产前诊断操作 为了减少染色体病患儿的出生，目前国内推广对广大孕妇进行孕早期和孕中期血清学筛查[8]，可以发现染色体异常高危人群;而对高危孕妇进行羊膜腔穿刺等侵入性产前诊断技术行染色体核型分析是产前筛查后续重要的产前诊断方法，为临床的金标准[9]，但有创取样有 0.5%,2%的流产风险，且容易导致胎膜早破、绒毛羊膜炎、阴道出血、早产等并发症，而且这种筛查技术本身存在5%以上的假阳性率的问题[10]，导致高危孕妇接受率偏低，即依从性差。传统的有创产前诊断技术还存在诊断通量低下，专业人员缺乏，人员培训及实验室建设周期长，报告时限过长等诸多问题[10]。湖南省妇幼卫生信息监测显示，2012年，湖南省孕产妇数852982人，共行产前筛查330467人，筛查率38.74%。筛查高危孕妇20553人，有9559人接受产前诊断，高危人群产前诊断率为46.51%，尽管筛查工作的数量远远不够，但就目前的筛查量而言，后续的产前诊断的技术力量已经远远达不到要求。大量筛查阳性的病例缺乏后续诊断，失去筛查的意义。 本研究表明NIPT对21-三体和18-三体具有很高的敏感性，把NIPT作为二线筛查方法用于妊娠早期或妊娠中期筛查阳性病例，可减少98%由于筛查假阳性而造成的不必要的侵入性产前诊断操作，同时减少操作相关的不良后果，有效地缓解侵入性产前诊断技术力量不足的现状。 参考文献: [1]中华人民共和国卫生部.中国出生缺陷防治报告(2012)[EB/OL].[2013-08-01].http: //.gov.cn/gzdt/2012-09/12/content_2223371.htm. [2]边旭明，戚庆伟.染色体异常产前筛查和产前诊断工作任重而道远[J].实用妇科与产科杂志，2010，26(12):889-890. [3]Driscoll DA.Gross S Clinical practice Prenatal screening for aneuploidy[J].N Eng J Med.2009，360(24):2556-2563. [4]边旭明，戚庆炜.我国产前细胞遗传学诊断的现状与对策[J].中华妇产科杂志，2011.46(9):641-644. [5]边旭明.胎儿染色体非整倍体的无创DNA产前检测[J].实用妇产科杂志，2013，5(29):330-333. [6]宋亦军，刘俊涛.无创产前检测技术在胎儿非整倍体产前检测的应用现状及前景[J].中华围产医学杂志， 2013，10:626-631. [7]Chen E Z，Chiu R W，Sun H，et al.Noninvasive Preantal diagnosis of fetal trisomy 18 and trisomy 13 by maternal plasma DNA sequencing[J].PLoS One，2011，6(7):e21791. [8]蒋宇林，边旭明.唐氏综合征产前筛查模式的发展[J].中华检验医学杂志，2011，11(34):1053-1056. [9]Wang JY，Zheng DK，ZilbersteinME，et al.Non-invasive exclusion of fetal aneupliody in an at-risk couple with a balanced translocation[J].Mol Hum Rep rod，2000，6(2):103-106. [10]边旭明，蒋宇林，戚庆炜.产前诊断，走中国自己的道路[J].中华妇产科杂志，2012，47(11):801-803. 编辑/肖慧 文档资料:无创产前基因检测在4168例产前筛查高风险孕妇中的应用 完整下载 完整阅读 全文下载 全文阅读 免费阅读及下载 阅读相关文档:氟喹诺酮类药物门诊应用的调查分析 肺结核合并糖尿病患者血糖控制程度与抗结核治疗效果的关系研究 一体式输氧管临床应用效果观察 七叶皂苷钠搽剂联合牵引推拿治疗腰椎间盘突出症的疗效观察 96例脑卒中患者的护理干预效果观察 急性胆源性胰腺炎行手术治疗疗效观察 自身免疫性胰腺炎的临床及影像学表现分析 头部穴位留针治疗中风后抑郁的临床疗效分析 全身热疗联合化疗治疗晚期恶性肿瘤疗效分析 动力髋螺钉方法治疗老年转子间骨折临床效果观察 颅脑创伤患者并发下肢深静脉血栓临床分析 倍博特治疗非杓型高血压疗效观察 雾化吸入布地奈德在慢性阻塞性肺病急性发作中的临床应用 贝那普利治疗60例糖尿病心 最新最全【学术】【总结报告】 【演讲致辞】【领导讲话】 【心得体会】 【党建材料】 【常用范文】【分析报告】 【应用文档】 免费阅读下载 *本文收集于因特网，所有权为原作者所有。若侵犯了您的权益，请留言。我将尽快处理，多谢。*