白藜芦醇对兔离体肠管平滑肌收缩功能影响的研究

白藜芦醇对兔离体肠管平滑肌收缩功能影响的研究 白藜芦醇对兔离体肠管平滑肌收缩功能影响的研究 作者: 何冰, 陈小夏,王经韵 【摘要】 目的 研究白藜芦醇对兔离体肠管平滑肌收缩功能的影响。方法 在离体兔肠管上，观察不同浓度白藜芦醇对各致痉剂引起肠平滑肌收缩的影响。结果 白藜芦醇对氯化钡、氯化钙、乙酰胆碱引起兔离体肠管收缩的抑制作用呈一定的量效关系,表现出非竞争性拮抗的作用。结论 白藜芦醇对肠管的抑制作用可能由胆碱受体介导，或直接作用于肠道平滑肌，具有钙拮抗作用。 【关键词】 兔离体肠管平滑肌;氯化钡;氯化钙;乙酰胆碱;白藜芦醇 Abstract:Objective To study the effect of resveratrol on the contractility in rabbit ileum smooth muscle in vitro.Methods The samples of isolated rabbit ileum segment were prepared,and the effects of resveratrol at various concentration on the spontaneous contraction of isolated rabbit intestine induced by BaCl2,CaCl2 and acetylcholine (ACh) were studied.Results The spontaneous contraction of smooth muscle of rabbit ileum in vitro induced by BaCl2,CaCl2 and ACh was inhibited by reseveratrol in a dose dependently manner of unpetitive antagonism. Conclusion Inhibitory effects of reseveratrol on smooth muscle of rabbit ileum in vitro might be mediated by acetylcholinergic receptor,or act directly with calcium antagonism. Key words:smooth muscle of rabbit ileum in vitro,BaCl2,CaCl2,acetylcholine,resveratrol 白藜芦醇，化学名(E) 5 [2 (4 羟苯基) 乙烯基] 1,3 苯二酚，属于非黄酮类 多酚化合物，具有广泛的药理作用，如抗肿瘤、抗心血管疾病、抗炎、免疫调节、抗病毒、抗衰老及雌激素样活性等。本文进行了白藜芦醇对离体肠管平滑肌作用的研究，为进一步开发利用白藜芦醇提供理论基础。 1 材料与方法 1.1 药物和试剂 白藜芦醇，购自上海诺特生物科技有限公司，3%的二甲基亚砜稀释至所需浓度;氯化乙酰胆碱，购自上海三爱思试剂有限公司;氯化钙(CaCl2)，购自广州化学试剂厂;氯化钡(BaCl2)，购自天津北联精细化工开发有限公司;氯化钾(KCl)，购自广东省化学试剂工程技术开发中心，以上各试剂均为纯。 1.2 动物 成年健康兔，体质量2,3 kg，雌雄兼用，广东省实验动物中心提供，合格证号2017A004。 1.3 方法 参考 文献 方法，对家兔进行气栓法处死，切开腹部，迅速取出回肠，浸入台式液(mol/L: NaCl 0.14，KCl 0.002 7，MgSO4 7H2O 0.001 1，NaH2PO4 2H2O 0.000 42，NaHCO3 0.012，CaCl2 0.001 8 葡萄糖 0.005 6)中。用台式液冲洗肠腔并细心去除回肠周围的肠系膜后，将肠管剪成长约 1.5,2 cm放置于充满30 mL台氏液(37?0.5) ?的麦氏浴槽中，通以空气，上端接肌张力换能器，下端固定在金属钩上，标本初负荷2.0 g，用Medlab U/4C501生物信号采集处理系统(南京美易科技有限公司)肌张力变化，每15 min换1次营养液。平稳30 min后开始试验。 2 结果 2.1 白藜芦醇对离体兔肠自发活动的影响 常规制备离体兔肠,置于充满30 mL 台氏液(37?0.5)? 的麦氏浴槽中,调整张力换能器及生理记录仪描记肠段自发性收缩,待肠段收缩稳定后进行实验。每次给药体积为30 μL。结果如1所示，白藜芦醇的3 %二甲基亚砜溶液在3×10-9,3×10-5 mol/L范围内呈剂量依赖性地抑制兔回肠的节律性收缩。 2.2 白藜芦醇对乙酰胆碱所致离体兔肠痉挛的影响 待肠段收缩稳定后进行实验，每次给药体积为30 μL。以累积浓度法制作乙酰胆碱(ACh)的量效曲线，冲洗3次，重新平衡后，再给予不同浓度的白藜芦醇20 min后,再以累积浓度法制作乙酰胆碱(ACh)的量效曲线，以生理盐水对照组最大反应时的平均张力之平均值作为最大效应(Emax), 计算 各受试药对肠管收缩最大效应的抑制率(E/Emax,n= 5),以E/Emax对ACh浓度负对数值作图(见图2),可知ACh对兔离体回肠的兴奋有明显的量效关系。阿托品能使Ach量效关系曲线右移,但不降低标本的最大反应,属竞争性拮抗剂; 白藜芦醇的浓度分别为3×10-6mol/L、3×10-5 mol/L、3×10-4 mol/L，随着白藜芦醇浓度的增加，其对Ach所致离体兔肠痉挛的抑制作用越大。白藜芦醇对ACh所致离体兔肠痉挛有浓度依赖性抑制作用，曲线非平行右移。提示白藜芦醇能拮抗乙酰胆碱所致离体肠管痉挛。结果如图2所示。 2.3 白藜芦醇对CaCl2所致离体兔肠痉挛的影响 制作CaCl2(1×10-7mol/L,1×10-1 mol/L)的量效曲线，标本在改良Tyrode液 ( 除无Ca2+外，其余成分不变)中稳定30 ode液(除无 Ca2+外，原K+浓度升至150 mmol/L，Na+min后，换无Ca2+高K+ Tyr 浓度相应降为117 mmol/L，以保持溶液渗透压恒定)使其除极化，20 min后,以累积浓度法制作CaCl2(1×10-7mol/L,1×10-1mol/L)，然后用无Ca2+液冲洗 3次，重新平衡后，再给予不同浓度的白藜芦醇(浓度同上)。结果表明白藜芦醇使CaCl2的量效曲线非平行右移，最大效应降低，随着CaCl2的浓度增加，白藜芦醇对CaCl2所致离体兔肠痉挛的抑制作用越明显，呈浓度依赖性抑制作用，结果如图3所示。2.4 白藜芦醇BaCl2对所致离体兔肠痉挛的影响 制作BaCl2(1×10-8mol/L,1×10-1mol/L)的量效曲线，方法同上2.2，再给予不同浓度的白藜芦醇(浓度同上)。随着BaCl2的浓度增加，白藜芦醇对BaCl2所致离体兔肠痉挛的抑制作用越明显，白藜芦醇对BaCl2所致离体兔肠痉挛剂量也有依赖性抑制作用。结果如4所示。 3 讨论 目前研究认为胃肠道上主要存在胆碱能M受体、肾上腺素α和β受体 、组胺受体、5 HT受体及多种胃肠激素受体。乙酰胆碱是平滑肌内兴奋传递的化学物质能激动M胆碱能受体，Ach小剂量通过启动受体依赖型Ca2+通道(RDC)，大剂量通过启动受体操纵型Ca2+通道(ROC),来发挥兴奋胃肠道，从而增加肠管的收缩幅度和张力，而 BaCl2是通过释放细胞内的Ca2+而引起肠管平滑肌痉挛。本实验研究表明,白藜芦醇对兔离体回肠自发舒缩活动有显着抑制作用，且呈一定量效关系,同时对乙酰胆碱、BaCl2所致离体肠管痉挛量效曲线最大效应下降，呈非竞争性拮抗作用。钙是胃肠道平滑肌的兴奋-收缩偶联者，引起肠道平滑肌收缩所需的大部分钙是在动作电位发生时从细胞外进入肌细胞的，小部分来源于肌浆网，当胞内Ca2+浓度升高到一定水平时，触发平滑肌收缩[5,6]。维拉帕米主要影响钙离子的跨膜内流而致平滑肌松弛。将平滑肌置于高钾溶液中，降低了肌细胞膜内外K+的浓度差，肌细胞膜电位差减小，膜处于持续去极化状态，此时Ca2+通过电压依赖性钙通道内流，使胞内钙维持在较高水平，而产生去极化型肌张力，维拉帕米 也可阻断高钾性去极化型肌张力的产生[3,8]。本实验结果显示，上述作用也可被白藜芦醇阻断，且与维拉帕米的作用相似，并呈现剂量依赖性，提示白藜芦醇与维拉帕米一样，对电压依赖性钙内流所致的平滑肌收缩有抑制作用。综上所述，白藜芦醇对肠管的抑制作用可能由胆碱受体介导，或直接作用于肠道平滑肌，具有钙拮抗作用，同时呈现非竞争性拮抗胆碱受体的特征。 【 参考 文献 】 黎永胜，文军.白藜芦醇的药理作用研究进展[J].综述,2017,14 (3): 469-47 1. 谭毓治.药 实验指导[M].2版.广州:广东高等 出社,2017:39-40. GODFRAIND T，MILLER R，WIBO M. Calcium antagonize and calcium entry blocker [J].Pharmacol Rev，1986,38 (4): 321 韩坚，陈孝健. 离体肠管实验的研究概况[J]. 中医药导报,2017，14 (3): 94-97. YUE W H.The principles of smooth muscle contraction [J].Prog Physiol Sci,1981，12 (1): 1. BOLTON T B，PRESTWICH S A.Excitation contraction coupling in gastrointestinal and other smooth muscles[J].Annu Rev Physiol，1999，61: 8-115. BONDI A Y.Effects of verapamil on excitation contraction coupling in frog sartorius muscle [J]. J Pharmacol Exp Ther，1978，205 (1): 49-57. LONG P， YAN C H，ZhANG M S .Effects of methy lflavonolamine hydrochloride on eontractidty of isolated rabbit ileum[J]. Acta Pharmaco1ogica Sinica，1992，13 (1): 63.