亚硝酸盐氮的测定(N-(1-萘基)-乙二胺分光光度法)

亚硝酸盐氮的测定（N-（1-萘基）-乙二胺分光光度法）： 亚硝酸盐是氮循环的中间产物，不稳定，根据水环境条件，可被氧化成硝酸盐，也可被还原成氨。亚硝酸盐可使人体正常的血红蛋白（地铁血红蛋白）氧化成为高铁血红蛋白，发生高铁血红蛋白症，失去血红蛋白在体内输送氧的能力，出现组织缺氧的症状。亚硝酸盐可与仲胺类反应生成具致癌性的亚硝胺类物质，在PH值较低的酸性条件下，有利于亚硝胺类的形成。 水中亚硝酸盐的测定通常采用重氮-偶联反应，使生成红紫色染料。方法灵敏、选择性强。所用重氮和偶联试剂种类较多，最常用，前者为对氨基苯磺酰胺和对氨基苯磺酸，后者为N-（1-萘基）-乙二胺和a-萘胺。此外，还有目前国内外普遍使用的离子色谱法和新开发的气相分子吸收法。这两种方法虽然须使用专用仪器，但方法简便、快速，干扰较少。 亚硝酸盐在水中可受微生物等作用而很不稳定，在采集后应尽快进行分析，必要时冷藏以抑制微生物的影响。 1、实验原理 在磷酸介质中，pH1.8±0.3时，亚硝酸盐与对-氨基苯磺酰胺反应，生成重氮盐，再与N-（1-萘基）-乙二胺偶联生成红色染料。在540nm波长处有最大吸收。 2.干扰及消除 氯胺、氯、硫代硫酸盐、聚磷酸钠和高铁离子有明显干扰。水样呈碱性（PH>11）时，可加酚酞溶液为指示剂，滴加磷酸溶液至红色消失。水样有颜色或悬浮物，可加氢氧化铝悬浮液并过滤。 3.方法的适用范围 本方法适用于饮用水、地表水、地下水、生活污水、和工业废水中亚硝酸盐的测定。最低检出浓度为0.003mg/L;测定上限为0.20mg/L亚硝酸盐氮. 4.仪器 分光光度计 5.试剂 实验用水均为不含亚硝酸盐的水 1）无亚硝酸盐的水：于蒸馏水中加入少许高锰酸钾晶体，使呈红色，再加氢氧化钡（或氢氧化钙）使呈碱性。置于全玻璃蒸馏器中蒸馏，弃去50ml初馏液，收集中间约70%不含锰的馏出液。亦可于每升蒸馏水中加1ml浓硫酸和0.2ml硫酸锰溶液（每100ml水中含36.4gMnSO4.H2O）,JIARU 1~3ml0.04%高锰酸钾溶液至呈红色，重蒸馏。 2）磷酸密度=1.70g/ml。 3）显色剂：于500ml烧杯中，加入250ml水和50ml磷酸，加入20.0对-氨基苯磺酰胺，再将1.00gN-（1-萘基）-乙二胺二盐酸盐溶于上述溶液中，转移至500ml容量瓶中，用水稀释至标线，混匀。 此溶液贮于棕色瓶中，保存在2~5度，至少可稳定一个月。 注意：本试剂有毒性，避免与皮肤接触或摄入体内。 4）贮备液：称取 1.232g 亚硝酸钠（Na2NO2），溶 于 150ml 水中，转移至 1000ml 容量瓶中，用水稀释至标线。每 毫升含约 0.25mg 亚硝酸盐氮。 此溶液贮于棕色瓶中，加入 1ml 三氯甲烷，保存在 2-5℃，至少 稳定一个月。贮备液的标定如下： 在 300ml 具塞锥形瓶中，移入 50.00ml 0.050mol/L 高锰酸钾溶 液，5ml 浓硫酸，用 50ml 无分度吸管，使下端插入高锰酸钾溶液液面 下，加入 50.00ml 亚硝酸钠贮备液，轻轻摇匀，置于水浴水加热至 70-80℃，按每次 10.00ml 的量加入足够的草酸钠标准溶液，使红色褪 去并过量，记录草酸钠标准溶液用量（V2 ）。然后用高锰酸钾标准溶 液滴定过量草酸钠至溶液呈微红色，记录高锰酸钾标准溶液总用量 （V1）。 再以 50ml 水代替亚硝酸盐氮标准贮备液，如上操作，用草酸钠 标准溶液标定高锰酸钾溶液的浓度（c1）。按下式计算高锰酸钾标准溶 液浓度：亚硝酸盐 c1(1/5KMnO4)=0.0500 × V4 /V3 按下式计算亚硝酸盐氮标准贮备液的浓度： 亚硝酸盐氮(N, mg/L)=(V1c1 − 0.0500 × V2 ) × 7.00 × 1000/50.00 =140 V1 c1 –7.00×V2 式中:c1--经标定的高锰酸钾标准溶液的浓度(mol/L)； V1—滴定亚硝酸盐氮标准贮备液时，加入高锰酸钾标准溶液总 量（ml）； V2--滴定亚硝酸盐氮标准贮备液时，加入草酸钠标准溶液总量 （ml）； V3—滴定水时，加入高锰酸钾标准溶液总量（ml）； V4—滴定空白时，加入草酸钠标准溶液总量（ml）； 7.00—亚硝酸盐氮（1/2N）的摩尔质量（g/mol）； 50.00—亚硝酸盐标准贮备液取用量（ml）； 0.0500—草酸钠标准溶液浓度（1/2Na2C2O4，mol/L）。 4) 亚硝酸盐氮标准中间液:分取适量亚硝酸盐标准贮备液（使含 12.5mg 亚硝酸盐氮），置于 250ml 容量瓶中，用水稀释至标线。此 溶液每毫升含 50.0µg 亚硝酸盐氮。中间液贮于棕色瓶内，保存在 2-5℃，可稳定一周。 6) 亚硝酸盐标准使用液:取 10.00ml 亚硝酸盐标准中间液，置于 500ml 容量瓶中，用水稀释至标线。每毫升含 1.00µg 亚硝酸盐氮。 此溶液使用时，当天配制。 7)氢氧化铝悬浮液：溶解 125g 硫酸铝钾[KAl (SO4)2·12H2O]或硫酸铝[NH4Al(SO4)2·12H2O]于 1000ml 水中，加热至 60℃，在不断搅拌下，徐徐加入 55ml 氨水，放置约 1h 后，移入 1000ml 量筒内，用水 反复洗涤沉淀，最后至洗涤液中不含亚硝酸盐为止。澄清后，把上 清液尽量全部倾出，只留稠的悬浮物，最后加入 300ml 水，使用前 应振荡均匀. 8)高锰酸钾标准溶液（1/5KMnO4，0.050 mol/L）：溶解1.6g 高锰酸钾于1200ml 水中，煮沸 0.5-1h，使体积减少到 1000ml 左右，放置过夜。用 G-3 号玻璃砂芯滤器过滤后，滤液贮存于棕色试剂瓶中避 光保存，按上述方法标定。 9)草酸钠标准溶液（1/2Na2C2O4，0.0500mol/L）：溶解经 105℃烘干 2h 的优级纯无水草酸钠 3.350g 于 750ml 水中，移入 1000ml 容量瓶 中，稀释至标线. 6、实验步骤 （1）校准曲线的绘制 依次吸取亚硝酸盐氮标准使用液0ml、1.00ml、3.00ml、5.00ml、 7.00ml及10.00ml ，至50ml比色管中，用水稀释 至标线，然后加入1.0 ml显色剂 密塞，混匀。 显色剂， 至标线，然后加入1.0 ml显色剂，密塞，混匀。 静置20 min， 1cm比色皿 于波长540 nm处 比色皿， 静置20 min， 1cm比色皿，于波长540 nm处，以 水为参比，测量吸光度。 水为参比，测量吸光度。 从测得的吸光度， 从测得的吸光度，减去零浓度空白管的吸光 度后，获得校正吸光度绘制曲线。     （2） 水样的测定 • 当水样pH≥11时，可加入1滴酚酞指示液，边搅拌边逐滴加入（1+9）磷酸溶液，至红刚消 失。（ 水样如有颜色和悬浮物，加入2 ml氢氧化铝悬浮液，搅拌、静置、过滤， 弃去25 ml初滤液 初滤液。 弃去25 ml初滤液。 • 分取经预处理的水样入50 ml比色管中（分取经预处理的水样入50 ml比色管中 比色管中（如含量高，则分取适量，用水稀释至标线）， ），加量高，则分取适量，用水稀释至标线），加1.0 ml显色剂，然后按校准曲线绘制的相同的步骤操作，测量吸光度。经空白校正后， 步骤操作，测量吸光度。经空白校正后，从校准曲线上查得亚硝酸盐氮含量。准曲线上查得亚硝酸盐氮含量。     （3）空白试验用实验用水代替水样，用实验用水代替水样，按相同步骤进行全程测定。 7、计算 亚硝酸盐氮（mg/L）亚硝酸盐氮（N，mg/L）= m/V m——由水样测得的校正吸光度，从校准曲线 ——由水样测得的校正吸光度 由水样测得的校正吸光度上查得相应的亚硝酸盐氮含量（μg）； V——水样体积（ml）。 8、注意事项 如水样经预处理后，还有颜色时，则分取两 如水样经预处理后，还有颜色时，份体积相同的经预处理的水样，一份加1.0ml 1.0ml显色 份体积相同的经预处理的水样，一份加1.0ml显色 剂，另一份改加1ml（1+9）磷酸溶液。由加显色 另一份改加1ml 1+9）磷酸溶液。 1ml（ 剂的水样测得的吸光度， 剂的水样测得的吸光度，减去空白试验测得的吸 光度， 光度，再减去改加磷酸溶液的的水样所测得的吸 光度后，获得校正吸光度，以进行色度校正。 光度后，获得校正吸光度，以进行色度校正。